犐犆犛６５．１２０

犅４６

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２１１０３—２００７

動物源性飼料中哺乳動物源性成分定性

檢測方法實時熒光犘犆犚方法

犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犿犪犿犿犪犾犱犲狉犻狏犲犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犻狀犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犪狋犲犱犳犲犲犱狊狋狌犳犳狊—

犚犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚犿犲狋犺狅犱

２００７１０２４發(fā)布２００８０４０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２１１０３—２００７

前言

本標準由中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局提出。

本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會歸口。

本標準主要起草單位：中華人民共和國遼寧出入境檢驗檢疫局、寶生物工程（大連）有限公司、中國

檢驗檢疫科學研究院、中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫

局、中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局。

本標準主要起草人：曹際娟、李晶泉、鄭秋月、徐昊、張舒亞、于愛麗、王玉萍、陳穎、徐寶梁、高宏偉、

宗卉、金東權。

本標準首次發(fā)布。

Ⅰ

書

犌犅／犜２１１０３—２００７

動物源性飼料中哺乳動物源性成分定性

檢測方法實時熒光犘犆犚方法

１范圍

本標準規(guī)定了動物源性飼料中哺乳動物源性成分（包括牛、綿羊、山羊、豬、兔、鹿、馬、驢、狗、貓等）

實時熒光ＰＣＲ檢測方法，該檢測方法的檢出限為０．１％。

本標準適用于動物源性飼料中哺乳動物源性成分的定性檢測。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

ＧＢ６６８２分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

ＧＢ／Ｔ１４６９９．１飼料采樣（ＧＢ／Ｔ１４６９９．１—２００５，ＩＳＯ６４９７：２００２，ＩＤＴ）

ＳＮ／Ｔ１１９３基因檢驗實驗室技術要求

３術語和定義

下列術語和定義適用于本標準。

３．１

實時熒光犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚

實時熒光聚合酶鏈式反應。

３．２

犆狋值犮狔犮犾犲狋犻犿犲

每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環(huán)數。

４原理

采用ＴａｑＭａｎ實時熒光ＰＣＲ技術，根據線粒體ＤＮＡ的１２Ｓ核糖體ＲＮＡ（１２ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ，

１２ＳｒＲＮＡ）基因上哺乳動物與非哺乳動物種間序列差異而進行哺乳動物源性成分鑒定。利用裂解液破

碎細胞，三氯甲烷抽提蛋白質，異丙醇沉淀得到ＤＮＡ；以提取的ＤＮＡ為模板進行實時熒光ＰＣＲ擴增。

以實時熒光檢測技術，采用多重ＰＣＲ方法，將所用試劑配制成預混合形式，組建成實時熒光ＰＣＲ哺乳

動物ＤＮＡ檢測試劑盒。在同一反應管內對哺乳動物的１２ＳｒＲＮＡ基因及內參照基因同時進行擴增，

并通過標記兩種不同熒光物質６羧基熒光素（６ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ，ＦＡＭ）、５六氯熒光素（５ｈｅｘａｃｈｌｏ

ｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ，ＨＥＸ）的探針進行特異性雜交，兩色熒光同步檢測。其中，對內參照反應的檢測，可以監(jiān)

控反應是否正常進行，防止假陰性結果。觀察實時熒光