犐犆犛１３．３００；１１．１００

犃８０

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２１７９３—２００８

化學(xué)品體外哺乳動物細(xì)胞

基因突變試驗方法

犆犺犲犿犻犮犪犾狊—犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻狀狏犻狋狉狅犿犪犿犿犪犾犻犪狀

犮犲犾犾犵犲狀犲犿狌狋犪狋犻狅狀

２００８０５１２發(fā)布２００８０９０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜２１７９３—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)等同采用經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（ＯＥＣＤ）化學(xué)品測試指南Ｎｏ．４７６（１９９７年）《體外哺乳動物細(xì)

胞基因突變試驗》（英文版）。

本標(biāo)準(zhǔn)作了以下編輯性修改：

———增加了范圍部分；

———計量單位改成我國法定計量單位；

———刪除了ＯＥＣＤ的參考文獻(xiàn)部分。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國危險化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ２５１）提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草單位：北京市疾病預(yù)防控制中心、天津市檢驗檢疫科學(xué)技術(shù)研究院。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳維皚、穆嘯群、李朝林、林錚、張園、李寧濤。

Ⅰ

書

犌犅／犜２１７９３—２００８

犗犈犆犇引言

１．體外哺乳動物基因突變試驗可用于檢測化學(xué)品誘發(fā)的基因突變?？蛇x用的細(xì)胞株包括Ｌ５１７８Ｙ

小鼠淋巴瘤細(xì)胞，ＣＨＯ，中國倉鼠細(xì)胞的ＡＳ５２和Ｖ７９株，ＴＫ６人淋巴樣母細(xì)胞。在這些細(xì)胞株中，最

常用的遺傳學(xué)終點是檢測胸苷激酶（ＴＫ）和次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（ＨＰＲＴ）突變，以及黃

嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（ＸＰＲＴ）的基因突變。ＴＫ、ＨＰＲＴ和ＸＰＲＴ突變試驗檢測不同的遺傳

事件譜。ＴＫ和ＸＰＲＴ位于常染色體，可檢測ＨＰＲＴ（位于Ｘ染色體）不能檢測的遺傳學(xué)事件，如大片

段缺失。

２．在體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗中，可使用已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株培養(yǎng)物。要根據(jù)在培養(yǎng)

基中的生長能力和自發(fā)突變率是否穩(wěn)定選擇細(xì)胞。體外進(jìn)行的試驗通常都需要用外源性代謝活化系

統(tǒng)。但外源性代謝活化系統(tǒng)不能完全模擬哺乳動物體內(nèi)的代謝條件，因此應(yīng)采取措施避免出現(xiàn)無法反

映體內(nèi)基因突變的情況。ｐＨ值和重量滲透壓濃度的改變或受試樣品的細(xì)胞毒性較高等可致假陽性結(jié)

果，從而使試驗結(jié)果無法反映體內(nèi)基因突變的真實情況。

３．本試驗可用于哺乳動物致突變劑和致癌劑的篩查。本試驗中陽性的很多化合物都是哺乳動物

致癌劑，然而本試驗與致癌性之間并不存在良好的相關(guān)性。相關(guān)性取決于化學(xué)品的種類。越來越多的

證據(jù)表明，很多致癌物因通過其他的、非遺傳毒性機制發(fā)揮作用或因其致癌機制在這些細(xì)胞中不容易被

檢測出而無法在本試驗中獲得陽性結(jié)果。

Ⅱ

犌犅／犜２１７９３—２００８

化學(xué)品體外哺乳動物細(xì)胞

基因突變試驗方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品體外哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗的范圍、術(shù)語和定義、試驗基本原則、試驗方

法、試驗數(shù)據(jù)和報告。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測體外哺乳動物細(xì)胞基因突變。

２術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

２．１

正向突變犳狅狉狑犪狉犱犿狌狋犪狋犻狅狀

從原型（野生型）轉(zhuǎn)變至突變型的基因突變，可引起酶活性和編碼蛋白的改變和丟失。

２．２

堿基對置換突變劑犫犪狊犲狆犪犻狉狊狌犫狊狋犻狋狌狋犻狅狀犿狌狋犪犵犲狀狊

能夠引起ＤＮＡ中一個或幾個堿基對置換的物質(zhì)。

２．３

移碼突變劑犳狉犪犿犲狊犺犻犳狋犿狌狋犪犵犲狀狊

能夠引起ＤＮＡ分子中單個或多個堿基對增加或缺失的物質(zhì)。

２．４

表型表達(dá)時間狆犺犲狀狅狋狔狆犻犮犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狋犻犿犲

新的突變細(xì)胞耗盡未改變的基因產(chǎn)物所需的時間。

２．５

突變頻率犿狌狋犪狀狋犳狉犲狇狌犲狀犮狔

所觀察到的突變細(xì)胞數(shù)與存活細(xì)胞數(shù)之比值。

２．６

相對總生長數(shù)狉犲犾犪狋犻狏犲狋狅狋犪犾犵狉狅狑狋犺

與陰性對照組細(xì)胞數(shù)相比，整個過程中所增加的細(xì)胞數(shù)，等于懸浮生長數(shù)乘以相對集落形成效率

之積。

２．７

相對懸浮生長狉犲犾犪狋犻狏犲狊狌狊狆犲狀狊犻狅狀犵狉狅狑狋犺

與陰性對照組相比，整個表達(dá)期細(xì)胞增加的數(shù)量。

２．８

細(xì)胞活性狏犻犪犫犻犾犻狋狔

表達(dá)期結(jié)束后，接種在選擇性培養(yǎng)基中細(xì)胞形