標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 27528-2011 口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，專門針對口蹄疫病毒的快速、敏感且特異性的核酸檢測方法進(jìn)行了規(guī)定。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）結(jié)合熒光探針技術(shù)對口蹄疫病毒進(jìn)行定性檢測的過程。其主要適用于動物源性樣本中口蹄疫病毒核酸的存在與否的判定。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容涵蓋了實驗所需材料與試劑、儀器設(shè)備的具體要求，以及樣品采集和處理的方法。對于每一步操作都有明確指導(dǎo)，包括RNA提取步驟、逆轉(zhuǎn)錄過程、PCR擴增條件設(shè)置等，并指出了使用特定引物序列的重要性以確保檢測準(zhǔn)確性。此外，還提供了陽性對照品的選擇建議及其制備方式，這對于保證實驗結(jié)果的有效性和可靠性至關(guān)重要。

在結(jié)果分析部分，《GB/T 27528-2011》明確了如何根據(jù)Ct值判斷樣品是否含有目標(biāo)病毒DNA片段。同時強調(diào)了實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守生物安全規(guī)范，采取適當(dāng)防護措施避免交叉污染或?qū)嶒炇腋腥撅L(fēng)險。

此標(biāo)準(zhǔn)為獸醫(yī)診斷領(lǐng)域提供了一個標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，有助于提高口蹄疫監(jiān)測工作的效率與質(zhì)量，促進(jìn)疾病防控策略的有效實施。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2011-11-21 頒布
  • 2012-03-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27528—2011

口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法

Real-timeRT-PCRfordetectionoffootandmouthdiseasevirus

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T27528—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄附錄為規(guī)范性附錄

A、B。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學(xué)研究院北京盈九思

:、、

科技發(fā)展有限公司

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人秦智鋒林祥梅吳紹強花群義盧體康劉建陳書琨呂建強曾少靈

:、、、、、、、、、

詹愛軍韓雪清孫潔曹琛福賈廣樂高小博陳兵阮周曦梅琳張彩虹陶虹

、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27528—2011

口蹄疫病毒實時熒光RT-PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了口蹄疫病毒實時熒光檢測方法

RT-PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于口蹄疫病毒的檢測與鑒定

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

出入境動物檢疫采樣

GB/T18088

口蹄疫診斷技術(shù)

GB/T18935

實驗室生物安全通用要求

GB19489

基因檢驗實驗室技術(shù)要求

SN/T1193

3縮略語

下列縮略語適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。

值循環(huán)閾值

Ct:(cyclethreshold)。

4試劑耗材和儀器設(shè)備

41試劑耗材

.

411除非另有說明在檢測中使用的試劑均為分析純實驗室用水應(yīng)符合的要求

..,,GB/T6682。

412口蹄疫病毒實時熒光試劑保存見附錄

..RT-PCR:-20℃,A。

413引物和探針序列

..

上游引物序列為

(FMDV-F):5′ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA3′。

下游引物序列為

(FMDV-R):5′GCGAGTCCTGCCACGGA3′。

探針序列為其端和端分別標(biāo)記

TaqMan(FMDV-Pb):5′TCCTTTGCACGCCGTGGGAC3′,5′3′

和

FAMBHQ。

414處理水見附錄推薦購買商品化處理的無酶和酶的水

..DEPC:B。DEPCDNARNA。

415氯仿分析純常溫保存

..:,。

416異丙醇分析純使用前預(yù)冷至

..:,-20℃。

417乙醇用水和無水乙醇配制使用前預(yù)冷至

..75%:DEPC,-20℃。

418石英砂市售化學(xué)純高壓滅菌后備用

..:,121℃,15min。

419見附錄

..0.01mol/LPBS,pH7.6~7.8:B。

4110陽性對照為滅活疫苗毒或組織培養(yǎng)滅活毒保存?zhèn)溆藐幮詫φ諛悠房刹捎媒】档呢i

..,-20℃。

或牛的組織材料

。

42主要儀器設(shè)備

.

421熒光檢測儀

..PCR。

422

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