SC9.11220B41NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T556-2002雞傳染性喉氣管炎診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforavianinfectiousiaryngotracheitis2002-08-27發(fā)布2002-12-01實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T556—2002雞傳染性喉氣管炎是雞的重要疫病之，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織World（rganizationforAnimalHealth(英）fficeInternationaldesEpizooties(法）,IE將本病定為B類動(dòng)物疾病，我國定為二類動(dòng)物疫病。本標(biāo)準(zhǔn)主要參照（)E推薦的雞傳染性喉氣管炎(IL.T)診斷方法制定。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄八、附錄3為規(guī)范性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜收售醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：范根成、王永玲、劉相蛾、王紅。

NY/T556-2002雞傳染性喉氣管炎診斷技術(shù)1范圓本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞傳染性喉氣管炎病毒分離及瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的病毒分離技術(shù)，適用于本病的確診。瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，適用于傳染性喉氣管炎的血清學(xué)診斷及用傳染性喉氣管炎疫苗免疫后的抗體檢測(cè)。喜分離鑒定技術(shù)2.1材料準(zhǔn)備2.1.1病料的準(zhǔn)備2.1.1.1活體采樣：用滅菌棉執(zhí)子伸入口咽或氣管采集分泌物，放人含青露素4000IU/ml.鏈猴素4000g/mL的無菌生理鹽水中。也可用棉拔子刮取眼分泌物，處理方法同上。2.1.1.2尸體采樣：無菌采取病死雞喉頭和氣管，放人尤菌的平血或燒杯中.飾封，2.1.2樣品的運(yùn)送采集的樣品應(yīng)立即放人4℃冰箱保存.24h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室；不能在24h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)將所采樣品冷凍保存和運(yùn)輸、2.1.3樣品處理2.1.3.1收到棉基子樣品后，先經(jīng)凍融兩次，并充分振動(dòng)、擠干棉執(zhí)子，將樣品液經(jīng)10000r/min離心10min.取上清液，加入青群素4000IU/ml..鏈莓素4000Pg/ml..于37℃作用30min.作為接種材料，2.1.3.2組織樣品：無的條件下將組織剪碎。按1：4加人生理鹽水后用研器研磨制成20%的勾漿懸浮液，再經(jīng)10000/min離心10min,取上清液，加人青霉素40001U/ml鏈雅素40002g/ml.于37℃作用30mim，作為接種材料。2.2操作方法2.2.1樣品接種取經(jīng)處理過的樣品，接種9～12日齡的雞胚絨毛尿囊膜。每枚0.2ml.,接種后的雞豚在37℃孵育每天觀察雞豚2次，連續(xù)觀察7d棄去24h內(nèi)死亡的雞胚，24h～120h內(nèi)死亡的雞胚，放4℃冷卻石觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無痘斑形成：120h仍不死亡的雞胚，亦取出，置4C冷卻后，觀察雞胚絨毛尿套膜上有無痘斑形成。有痘斑者，取出雞胚絨毛尿囊膜和尿囊液，無菌研磨后，置－20℃凍存?zhèn)溆?；無痘斑者，亦取出雞胚絨毛尿囊膜和尿囊液，無菌研磨，反復(fù)凍融，離心后，接種9～12日齡的雞胚絨毛尿囊膜盲傳。如此盲傳3代以上，如仍無病變·則判為雞傳染性喉氣管炎陰性。2.2.2病毒鑒定病毒分離物的鑒定：用雞傳染性喉氣管炎標(biāo)準(zhǔn)陽性血清(效價(jià)在1：32以上)和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清與分離物作雞胚中和試驗(yàn)，固定血清，稀釋病毒法中和試驗(yàn)操作方法。血清處理：將傳染性喉氣管炎標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰