水蛭素2精制

將粗品A和B分別溶于250和200ml蒸餾水中，各裝入已撿漏的透析袋(析袋MW值為6000)，扎緊上口，放置有蒸餾水的燒杯中，4度冰箱放置，每隔8小時換水，連續(xù)透析48h，取出透析袋，水液減壓濃縮蒸壓干燥得純化樣品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。（按書上介紹;A的收率應為0.104％，B收率為0.0825％)3精制

將粗品A和B分別溶于250和200ml蒸餾水中，各裝入已撿漏的透析袋內(透析袋MW值為6000)，扎緊上口，放置有蒸餾水的燒杯中，4度冰箱放置，每隔8小時換水，連續(xù)透析48h，取出透析袋，水液減壓濃縮蒸壓干燥得純化樣品A和B,A得量1.19克，收率7.9％，B得量0.21克，收率1.4％。(按書上介紹;A的收率應為0.104％，B收率為0.0825％)（得到的A為深棕色粉末狀固體，B的顏色比A要淡也為棕色固體;)，(起始時配置的水蛭樣品與生理鹽水比例越高最后得到的A和B的顏色越深)4水蛭樣品與生理鹽水1:5和1:15得到的最后產物A的圖片5電泳時溶液的配置（1）0.005MTris—Hcl溶液（pH=8.8）：稱取0.06055gTris溶于50mL水，用2N鹽酸調pH至8.8，定容至100mL。（2）分離膠緩沖液（pH=8.9）：稱取36.3gTris溶于60mL雙蒸水中，用2N鹽酸調pH至8.9，再用雙蒸水定容至100mL，4°C保存?zhèn)溆谩＃?）單體貯液：稱取30g丙烯酰胺和0.8g甲叉雙丙烯酰胺，先用70mL雙蒸水溶解，再用雙蒸水定容至100mL，過濾后用棕色瓶裝，于4°C下保存?zhèn)溆谩＃?）電極緩沖液：稱0.6gTris和2.88g甘氨酸溶于雙蒸水，調pH至8.3，定容至1000mL。（5）10%過硫酸銨溶液：稱取1g過硫酸銨溶于10mL雙蒸水中，使用前現配。（6）濃縮膠緩沖液：稱6.06gTris溶于60mL雙蒸水中，調pH至6.8，再用雙蒸水定容至100mL，于4°C下保存?zhèn)溆?。?）0.0252%七水硫酸亞鐵溶液：稱0.0252g七水硫酸亞鐵溶于100mL雙蒸水中即可。6膠的制作（制作分離膠5%）1.分離膠緩沖液：10毫升2.單體貯液：

21.36毫升3.雙蒸水：

48.66毫升4.TEMED:150毫升5.過硫酸銨：

150毫升7制作濃縮膠(3%)1.濃縮膠緩沖液：2.5毫升2.單體貯液：2.76毫升3.雙蒸水：14.68毫升4.TEMED:10毫升5.過硫酸銨：60毫升8用兩塊普通玻璃作為制備板框的材料。大小為23×23×0.3cm的方形玻璃一塊，23×23×0.3cm的凹型玻璃一塊。

9點樣：先將提取的A和B溶解在含有7.5％可溶性淀粉的雙蒸水中，取20uL樣品點樣，marker的尺度為3到10不連續(xù)電泳：電泳開始前，加0.2%溴酚藍作指示劑。采用不連續(xù)電泳，初始電壓為161V，電流為32mA，時間1小時35分鐘，當溴酚藍通過濃縮膠與分離膠界面時，立即將電壓升高至200V，電流為32mA，時間1小時35分鐘，時間為4小時30分鐘，待溴酚藍電泳至凝膠底部時，電泳結束，電泳時間約6小時。10染色

考馬斯亮藍G250：20mg溶于10ml95％乙醇，加入20ml磷酸，用雙蒸水定容至200ml，定容前用玻璃棒攪溶。（在恒溫箱中染色20分鐘）11脫色25％甲醇，7.5％乙酸，室溫振搖下脫色，總共配置200ml。1213總結1.在進行水蛭粉末獲取時，是否直接將整個水蛭攪碎就能使用了。2.當抽干儀溫度為52度會不會改變水蛭素的性質3.在水液減壓濃縮蒸壓干燥得純化樣品A和B時，應用小離心管或稱量紙收集精品A和B4.