新型食源性致病菌檢測(cè)顯色培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法微生物分析的主要方法原理:

糖發(fā)酵

Ex:乳糖發(fā)酵用于大腸菌群檢測(cè)

氧化還原Ex:如H2S基礎(chǔ)培養(yǎng)基用于Salmonellaspp.缺點(diǎn):大部分生化反應(yīng)只是用于檢測(cè)微生物種群(屬).

需要轉(zhuǎn)代

浪費(fèi)金錢和時(shí)間:大部分需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)傳統(tǒng)培養(yǎng)基方法應(yīng)用:鑒定板快速酶測(cè)試接加至培養(yǎng)基中(固體和液體)減少和降低確認(rèn)測(cè)試量顯色及熒光底物技術(shù)底物結(jié)構(gòu)共價(jià)鍵(糖苷的,肽聚,磷酸二氫聚…)由酶進(jìn)行專一性識(shí)別糖類脂類蛋白胨色原底物結(jié)構(gòu)共價(jià)鍵結(jié)合專一酶糖類脂類蛋白胨色原非裂解底物:不顯色糖類脂類蛋白胨色源

游離或二聚物可顯色ALOA?AgarListeriaacc.Ottaviani&AgostiChromogenicmedium單增李斯特菌檢測(cè)和計(jì)數(shù)培養(yǎng)基ALOA?原理:Beta-glucosidaseactivityBluecoloniesΒ-葡萄糖苷酶活性，藍(lán)色PhospholipaseactivityOpaquehalo磷酸酶活性，混濁暈Listeriaspp.ListeriamonocytogenesAloa單增李斯特菌的選擇性ListeriainnocuaListeriamonocytogenes相同的菌落L.mListeriamonocytogenes可非常清晰地分辨單增李斯特菌L.i混合李斯特氏菌存在的問題假如隨機(jī)挑取5個(gè)菌落確認(rèn)，在X個(gè)無毒李斯特菌中有1個(gè)單增李斯特菌，被檢出的可能性如下：可能性66%1/415%5%X=ratioL.i/L.m4192999ALOAOneDayalternativemethod:分析方法圖25g食品樣品+225mlHALFFRASERBROTH24H/30°C

涂布0.1mlonALOA

24H/37°C存在典型菌落:

不存在典型菌落:

確認(rèn)* 不存在單增李斯特氏菌*:糖/溶血試驗(yàn)

ALOA?認(rèn)證AFNORvalidation(ALOAONEDAYMETHOD-France)CompendiumCanadaregisteredBAMregistered(FDAapproval)NMKLapproval(Sweden)ISO:preferredreferenceculturemediaforListeriamonocytogenesdetectionandenumeration(ISO11290–1&2revision–publicationinJanuary2005)ASAPPrinciple:C8酯酶活性Beta-葡萄糖苷酶活性粉紅及紫色菌落Salmonella藍(lán)色菌落Klebsiella,Enterobacter白色不透明瓊脂增強(qiáng)顏色對(duì)比易讀數(shù)ASAP?Examples:C8-酯酶檢測(cè)Beta-葡萄糖苷酶活性C8-酯酶和葡萄糖苷酶活性檢測(cè)白色菌落粉紅至紫紅菌落Salmonellaspp.藍(lán)至菌綠色菌落Klebsiella藍(lán)紫色菌落Serratia其它類型E.coli,Citrobacter,Proteus,Pseudomonas…ESIA?

阪崎腸桿菌分離培養(yǎng)基ESSB/ESIA?

E.sakazakii

檢測(cè)流程

25gsample+225mlESSB18/24H–37°CIsolation–ESIA18/24H–44°C48H內(nèi)出陰性結(jié)果和陽性初