2023年高考生物模擬試卷注意事項(xiàng)：1．答卷前，考生務(wù)必將自己的姓名、準(zhǔn)考證號(hào)、考場號(hào)和座位號(hào)填寫在試題卷和答題卡上。用2B鉛筆將試卷類型（B）填涂在答題卡相應(yīng)位置上。將條形碼粘貼在答題卡右上角"條形碼粘貼處"。2．作答選擇題時(shí)，選出每小題答案后，用2B鉛筆把答題卡上對(duì)應(yīng)題目選項(xiàng)的答案信息點(diǎn)涂黑；如需改動(dòng)，用橡皮擦干凈后，再選涂其他答案。答案不能答在試題卷上。3．非選擇題必須用黑色字跡的鋼筆或簽字筆作答，答案必須寫在答題卡各題目指定區(qū)域內(nèi)相應(yīng)位置上；如需改動(dòng)，先劃掉原來的答案，然后再寫上新答案；不準(zhǔn)使用鉛筆和涂改液。不按以上要求作答無效。4．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．紅酸湯是苗族人民的傳統(tǒng)食品，它顏色鮮紅、氣味清香、味道酸爽。以番茄和辣椒為原料的紅酸湯制作流程如下。下列相關(guān)敘述中正確的是（）A．紅酸湯制作過程中用到的微生物主要是醋酸菌B．裝壇時(shí)加入成品紅酸湯是為了增加發(fā)酵菌種的數(shù)量C．裝壇時(shí)不裝滿的原因是為了促進(jìn)微生物繁殖D．紅酸湯的制作中發(fā)酵時(shí)間越長，口味越純正2．下圖是果蠅體內(nèi)一個(gè)正在分裂的細(xì)胞及其部分染色體組成（數(shù)字代表對(duì)應(yīng)的染色體，字母表示染色體上的基因）。不考慮染色體變異，據(jù)圖判斷此果蠅基因型是（）A．AaBbdd B．AaBbXdY C．AaBbXYd D．AaBbXdXd3．某地區(qū)修建了一條人工河導(dǎo)致一片森林被分為兩個(gè)區(qū)域，森林中的松鼠隔離成了兩個(gè)數(shù)量相等的種群。十年后最不可能發(fā)生的是（）A．兩個(gè)松鼠種群的基因庫出現(xiàn)差異B．兩個(gè)松鼠種群間不能發(fā)生基因交流C．兩個(gè)松鼠種群的數(shù)量不同D．該森林的群落結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變4．下列敘述與事實(shí)不相符的是A．基因的表達(dá)產(chǎn)物中，有一些需要進(jìn)一步加工和修飾后才能發(fā)揮作用B．轉(zhuǎn)錄過程形成的三種RNA均不存在雙鏈結(jié)構(gòu)C．核糖體在翻譯時(shí)與mRNA的結(jié)合部位形成兩個(gè)tRNA結(jié)合位點(diǎn)，每次沿mRNA移動(dòng)時(shí)新讀取一個(gè)密碼子D．某些RNA病毒內(nèi)存在RNA復(fù)制酶，可在宿主細(xì)胞內(nèi)完成自身RNA的復(fù)制5．某灰身（B）、白眼（w）果蠅細(xì)胞分裂過程中某細(xì)胞的基因與染色體的關(guān)系如圖（不考慮基因突變和染色體變異）。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．該果蠅一定是雜合子B．該細(xì)胞不可能是極體C．該細(xì)胞內(nèi)含有兩對(duì)同源染色體D．該細(xì)胞形成過程中發(fā)生了交叉互換6．下圖為甲、乙兩種遺傳病的遺傳系譜圖，其中Ⅱ-4不含甲病治病基因，乙病在人群中的發(fā)病率為1/625。下列敘述正確的是（）A．乙病為伴X染色體隱性遺傳病B．Ⅲ-10的致病基因來自Ⅰ-1C．若Ⅱ-5和Ⅱ-6再生一個(gè)孩子，只患一種病的概念為5/8D．若Ⅲ-11與某正常男性婚配，后代患兩病的概率為1/3127．下列實(shí)驗(yàn)中，有關(guān)操作時(shí)間的長短對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或結(jié)果影響的敘述，正確的是（）A．在“質(zhì)壁分離與復(fù)原”的實(shí)驗(yàn)中，第二次與第三次觀察間隔時(shí)間的長短對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的影響相同B．在“觀察根尖分生組織細(xì)胞的有絲分裂”實(shí)驗(yàn)中，解離時(shí)間的長和短對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的影響相同C．用標(biāo)志重捕法調(diào)查種群密度時(shí)，兩次捕獲間隔時(shí)間的長和短對(duì)調(diào)查結(jié)果的影響相D．“32P標(biāo)記的噬菌體侵染細(xì)菌”的實(shí)驗(yàn)中，保溫時(shí)間過長和過短對(duì)上清液檢測放射性的結(jié)果影響趨勢相同8．（10分）下列關(guān)于新物種形成的敘述，與事實(shí)不相符的是（）A．異地的物種形成需要種群間遺傳差異的積累B．四倍體和二倍體雜交得到的三倍體是新物種C．新物種可以在親本物種所在地區(qū)產(chǎn)生D．一個(gè)新物種可以擴(kuò)展形成多個(gè)基因庫二、非選擇題9．（10分）大豆油脂中的化合物種類繁多，但主要成分是甘油三酯，常溫下一般為液態(tài)，不溶于水'易溶于有機(jī)溶劑，沸點(diǎn)較高。大豆種子中的油脂多與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，要提取純度較高的大豆油脂，往往需要將油脂成分與蛋白質(zhì)分離．芽孢桿菌是常見的蛋白酶產(chǎn)生菌，廣泛存在于土壤中，較易與其他細(xì)菌分離．研究人員利用芽孢桿菌分離大豆油脂與蛋白質(zhì)、以及提取大豆油的流程如下圖?；卮鹣铝袉栴}：（1）從土壤中分離芽孢桿菌，需要先將土壤樣品稀釋后再接種到固體培養(yǎng)基上，稀釋的目的是____，便于在平板上形成單個(gè)菌落。將接種后的平板培養(yǎng)一段時(shí)間后，可以根據(jù)__等菌落特征挑選出芽孢桿菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。（2）將芽孢桿菌接種到含酪蛋白的固體培養(yǎng)基（酪蛋白使培養(yǎng)基呈不透明的乳白色）上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，在某些菌落周圍會(huì)形成透明圈，原因是__。根據(jù)_____就可篩選出比較高效的目的菌株。（3）將篩選到的目的菌株擴(kuò)大培養(yǎng)后，接種到含有大豆原料的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，振蕩的目的是____，培養(yǎng)過程中還需要嚴(yán)格控制____等條件（至少答出兩點(diǎn)）。（4）芽孢桿菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間后，將培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離，在分離得到的培養(yǎng)液中加入乙醚完成過程①，這種提取大豆油脂的方法叫做____法。獲得純凈大豆油還需要完成過程②，該過程的主要目的是__________________。10．（14分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對(duì)人體沒有影響。我國科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒置于經(jīng)_________處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中，獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測不同生物對(duì)密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），并按圖2方式依次進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點(diǎn)的_________技術(shù)。②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和_________分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較_________的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點(diǎn)是_________。11．（14分）利用轉(zhuǎn)基因的工程菌生產(chǎn)藥用蛋白，近些年在我國制藥行業(yè)中異軍突起。圖1表示基因工程常用的一種質(zhì)粒?；卮鹩嘘P(guān)問題：（1）SphⅠ和SacⅠ兩種限制酶識(shí)別并切割不同的DNA序列，將目的基因和質(zhì)粒都通過SphⅠ和SacⅠ切割，可以避免_______________。拼接成重組質(zhì)粒，需要加入_______________酶才能完成。（2）各限制酶在該質(zhì)粒上分別只有一處識(shí)別序列，有關(guān)質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的限制酶酶切片段長度如下表所示。已知質(zhì)粒被切除的片段長度為0.5kb，則與質(zhì)粒結(jié)合的目的基因長度為_____kb。質(zhì)粒上ClaⅠ與PstⅠ區(qū)域之間的長度為2.4kb（圖1所示），結(jié)合圖2分析目的基因上ClaI、PstⅠ兩種限制酶的切割位點(diǎn)分別為___________（填“a和b”或“b和a”）。質(zhì)粒重組質(zhì)粒BglⅡ6.0kb7.1kbClaⅠ6.0kb2.3kb，4.8kbPstⅠ6.0kb1.5kb，5.6kb（3）在篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌時(shí)，培養(yǎng)基中加入適量的________________，使導(dǎo)入重組質(zhì)粒和普通質(zhì)粒的受體菌都能在該培養(yǎng)基上生長。為了進(jìn)一步篩選，可以利用抗原-抗體雜交的方法，若出現(xiàn)______________，則該受體菌可以作為工程菌。（4）若要對(duì)藥用蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，可利用____________工程對(duì)目的基因進(jìn)行修飾。12．人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA的兩條途徑，其中報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。圖二為相關(guān)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，以及HAS基因兩側(cè)的核苷酸序列。據(jù)圖回答下列問題：（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，我們常常用不同的限制酶去切割目的基因和運(yùn)載體來獲得不同的黏性末端，原因是_____。依據(jù)圖一和圖二分析，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)下列敘述錯(cuò)誤的是____A．應(yīng)該使用酶B和酶C獲取HSA基因B．應(yīng)該使用酶A和酶B切割Ti質(zhì)粒C．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒含1個(gè)酶A的識(shí)別位點(diǎn)D．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒用酶C處理將得到2個(gè)DNA片段（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是_____，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用_________尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。（3）圖一過程①中需將植物細(xì)胞與_______________________混合后共同培養(yǎng)，旨在讓__________________整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含_____的培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。（4）圖一③過程中將目的基因?qū)刖d羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法是_____。（5）為檢測HSA基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的_____，用抗血清白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、B【解析】

紅酸湯制作需要用到乳酸菌，乳酸菌是一種厭氧菌，在無氧的條件下，乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生乳酸，使得菜品有一股特別的風(fēng)味提升菜品的口感。【詳解】A、紅酸湯制作過程中用到的微生物主要是乳酸菌，A錯(cuò)誤；B、裝壇時(shí)加入成品紅酸湯是為了增加發(fā)酵菌種的數(shù)量，B正確；C、裝壇時(shí)壇口留有一點(diǎn)空間而不裝滿的目的是防止番茄發(fā)酵后液體膨脹外溢，C錯(cuò)誤；D、如果發(fā)酵時(shí)間過長，會(huì)影響口感，D錯(cuò)誤。故選B。2、C【解析】

果蠅有8條染色體，共4對(duì)，其中有3對(duì)常染色體，且這3對(duì)染色體形態(tài)大小都相同，還有1對(duì)性染色體形態(tài)、大小不同，即X和Y染色體。果蠅的Y染色體比X染色體要大?！驹斀狻繄D中畫出了四條染色體，由于其上標(biāo)有基因，根據(jù)等位基因位于同源染色體上，可以清楚的判斷出1和3號(hào)染色體是同源染色體，所以推出2和4號(hào)應(yīng)是另一對(duì)同源染色體，由于二者形態(tài)不同，即X和Y染色體。所以此果蠅是雄性；由于果蠅的X染色體比Y染色體短小，所以2號(hào)為X染色體，4號(hào)為Y染色體，基因型是AaBbXYd，選C正確。故選C。3、D【解析】

隔離導(dǎo)致物種的形成：

（1）地理隔離是物種形成的量變階段，生殖隔離是物種形成的質(zhì)變時(shí)期，只有地理隔離而不形成生殖隔離，能產(chǎn)生亞種，但絕不可能產(chǎn)生新物種。

（2）生殖隔離是物種形成的關(guān)鍵，是物種形成的最后階段，是物種間的真正界限。生殖隔離有三種情況：不能雜交；雜交不活；活而不育。【詳解】A、可遺傳的變異、環(huán)境因素的影響等會(huì)導(dǎo)致種群基因庫發(fā)生改變，因此兩個(gè)松鼠種群的基因庫會(huì)出現(xiàn)差異，A不符合題意；

B、十年后，若兩個(gè)松鼠種群之間產(chǎn)生了生殖隔離，則兩個(gè)種群之間不能在進(jìn)行基因交流，B不符合題意；

C、開始時(shí)兩個(gè)松鼠種群的數(shù)量相等，但由于各種因素的影響，若干年后這兩個(gè)松鼠種群的數(shù)量不一定相等，C不符合題意；

D、群落結(jié)構(gòu)的形成是環(huán)境和生物長期相互作用的結(jié)果，由于十年內(nèi)環(huán)境會(huì)不斷變化，所以該森林的群落結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變，D符合題意。

故選D。4、B【解析】分析：本題考查了基因的表達(dá)方面的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力、理解能力、運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題的能力。詳解：基因的表達(dá)產(chǎn)物中，有一些物質(zhì)如分泌蛋白、mRNA形成后需要進(jìn)一步加工和修飾后才能發(fā)揮作用，A正確；tRNA雖然是單鏈，但也存在局部雙鏈結(jié)構(gòu)，B錯(cuò)誤；mRNA在細(xì)胞核內(nèi)通過轉(zhuǎn)錄過程形成，由核孔進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，與核糖體結(jié)合，進(jìn)行翻譯過程。與核糖體結(jié)合的部位有2個(gè)密碼子，tRNA上有反密碼子，與密碼子互補(bǔ)配對(duì)，因此核糖體與mRNA的結(jié)合部位會(huì)形成兩個(gè)tRNA的結(jié)合位點(diǎn)，每次沿mRNA移動(dòng)時(shí)新讀取一個(gè)密碼子，C正確；RNA復(fù)制是以RNA為模板合成RNA，有些生物，如某些病毒的遺傳信息貯存在RNA分子中，當(dāng)它們進(jìn)入宿主細(xì)胞后，靠復(fù)制而傳代，在RNA復(fù)制酶作用下，可在宿主細(xì)胞內(nèi)完成自身RNA的復(fù)制，D正確。點(diǎn)睛：解答本題的關(guān)鍵是需要學(xué)生能夠正確分析與提取題干所提供的信息，同時(shí)能夠聯(lián)系所學(xué)知識(shí)答題。5、C【解析】

同源染色體是指細(xì)胞中的兩條染色體形態(tài)、大小一般相同，一條來自父方，一條來自母方。但性染色體的形態(tài)和大小有區(qū)分。該題的突破點(diǎn)是通過細(xì)胞分裂圖中染色體的形態(tài)和數(shù)目以及位置關(guān)系判定細(xì)胞的分裂時(shí)期?！驹斀狻緼、圖中的一條染色體的兩條姐妹染色單體上含有兩個(gè)等位基因B和b，在沒有發(fā)生基因突變的前提下應(yīng)該是發(fā)生了交叉互換，由此推測該個(gè)體一定是Bb的雜合子，A正確；B、果蠅的紅眼和白眼基因只位于X染色體上，Y上沒有它的等位基因，該圖示中的性染色體上沒有w基因，在沒有發(fā)生染色體變異的前提下，可以確定該細(xì)胞是含有Y染色體的次級(jí)精母細(xì)胞，不可能是極體，B正確；C、在該圖示中，沒有同源染色體，C錯(cuò)誤；D、在姐妹染色單體上含有B和b基因，應(yīng)該是在減數(shù)第一次分裂前期發(fā)生了交叉互換，D正確；故選C。6、D【解析】

據(jù)圖分析，Ⅱ-3、Ⅱ-4不患甲病，其兒子Ⅲ-7患甲病，說明甲病是隱性遺傳病，又因?yàn)棰?4不含甲病治病基因，因此甲病為伴X隱性遺傳?。虎?5、Ⅱ-6不患乙病，其女兒Ⅲ-9患乙病，說明乙病為常染色體隱性遺傳?。挥捎谝也≡谌巳褐械陌l(fā)病率為1/625，假設(shè)乙病致病基因?yàn)閎，則b的基因頻率為1/25，B的基因頻率為24/25，因此正常人群中雜合子的概率=2Bb÷（2Bb+BB）=2b÷（2b+B）=1/13?！驹斀狻緼、根據(jù)以上分析已知，乙病為常染色體隱性遺傳病，A錯(cuò)誤；B、Ⅲ-10患甲病，而甲病為伴X隱性遺傳病，則來自于Ⅱ-5，而Ⅱ-5的致病基因又來自于Ⅰ-2，B錯(cuò)誤；C、假設(shè)甲病致病基因?yàn)閍，則Ⅱ-5基因型為AaXBXb，Ⅱ-6AaXbY，后代甲病發(fā)病率為1/4，乙病發(fā)病率為1/2，因此后代只患一種病的概率=1/4+1/2-1/4×1/2×2=1/2，C錯(cuò)誤；D、Ⅲ-11基因型為2/3AaXBXb，正常男性為甲病致病基因攜帶者（AaXBY）的概率為1/13，兩者婚配，后代患甲病的概率為2/3×1/13×1/4=1/78，患乙病的概率為1/4，因此后代患兩病的概率=1/78×1/4=1/312，D正確。故選D。7、D【解析】

用32P標(biāo)記的噬菌體侵染大腸桿菌，上清液中有少量放射性的原因：a保溫時(shí)間過短，部分噬菌體沒有侵染到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)離心后分布于上清液中，使上清液出現(xiàn)放射陡。b保溫時(shí)間過長，噬菌體在大腸桿菌內(nèi)增殖后釋放子代，經(jīng)離心后分布于上清液中，也會(huì)使上清液的放射性含量升高?！驹斀狻緼、在“質(zhì)壁分離與復(fù)原”的實(shí)驗(yàn)中，第二次與第三次觀察間隔時(shí)間的長短對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的影響不相同，間隔時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞失水過多而死亡，A錯(cuò)誤；B、在“觀察根尖分生組織細(xì)胞的有絲分裂”實(shí)驗(yàn)中，解離時(shí)間的長短對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的影響不相同，解離時(shí)間太短則組織細(xì)胞沒有完全分離開，解離時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致根尖過于酥爛，B錯(cuò)誤；C、用標(biāo)志重捕法調(diào)查種群密度時(shí)，兩次捕獲間隔時(shí)間的長短對(duì)調(diào)查結(jié)果的影響不相同，若間隔時(shí)間太短，被標(biāo)記的個(gè)體沒有與未被標(biāo)記的個(gè)體充分混合均勻，這會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差較大，C錯(cuò)誤；D、由以上分析可知，在“32P標(biāo)記的噬菌體侵染細(xì)菌”的實(shí)驗(yàn)中，保溫時(shí)間過長或過短時(shí)上清液檢測結(jié)果相同，都會(huì)導(dǎo)致上清液的放射性增強(qiáng)，D正確。故選D。8、B【解析】

物種是生物最小的分類單位，判斷生物是否屬于同一個(gè)物種，關(guān)鍵看它們是否存在生殖隔離，即能夠交配并且后代可育的，屬于同一個(gè)物種。種群，是指同一時(shí)間和空間同一物種的集合體，是物種的具體存在單位，也是進(jìn)化和繁殖的單位。物種的形成方式有同地和異地之分，異地即地理隔離，同地如用秋水仙素處理二倍體變?yōu)樗谋扼w，也可以產(chǎn)生新的物種。【詳解】A、異地的物種形成需要種群間遺傳差異的積累，致使兩種群基因庫差異較大，再也無法進(jìn)行交流，即產(chǎn)生新的物種，A正確；B、四倍體和二倍體雜交得到的三倍體不育，不能稱為一個(gè)物種，B錯(cuò)誤；C、新物種可以在親本物種所在地區(qū)產(chǎn)生，如二倍體加倍變成四倍體，四倍體即是一個(gè)新的物種，C正確；D、一個(gè)新物種在不同的區(qū)域可以形成不同的種群，可以擴(kuò)展形成多個(gè)基因庫，D正確。故選B。二、非選擇題9、將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞顏色、形狀、大小和隆起程度等芽孢桿菌產(chǎn)生的蛋白酶將酪蛋白分解透明圈的大小增加培養(yǎng)液中的溶氧量、使菌種與培養(yǎng)液充分接觸pH、溫度、培養(yǎng)液濃度萃取除去萃取劑（乙醚）【解析】

稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計(jì)算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計(jì)數(shù)?！驹斀狻浚?）稀釋的目的是將聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，便于在平板上形成單個(gè)菌落。通常是細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）生長發(fā)育，形成以母細(xì)胞為中心的一團(tuán)肉眼可見的、有一定形態(tài)、構(gòu)造等特征的子細(xì)胞的集團(tuán)，稱之為菌落。可以根據(jù)顏色、形狀、大小和隆起程度等等菌落特征挑選出芽孢桿菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。（2）芽孢桿菌產(chǎn)生的蛋白酶將酪蛋白分解，因此在芽孢桿菌周圍會(huì)形成透明圈。根據(jù)透明圈的大小就可篩選出比較高效的目的菌株，透明圈大的產(chǎn)生的蛋白酶多，分解作用顯著。（3）液體培養(yǎng)基常振蕩培養(yǎng)，振蕩的目的是增加培養(yǎng)液中的溶氧量、使菌種與培養(yǎng)液充分接觸。為了使目的菌株更好地生長，培養(yǎng)過程中還需要嚴(yán)格控制pH、溫度、培養(yǎng)液濃度等條件。（4）在分離得到的培養(yǎng)液中加入乙醚（低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑），使芳香油充分溶解，稱為萃取法，然后蒸去低沸點(diǎn)的溶劑，剩下的就是大豆油脂。獲得純凈大豆油還需要完成過程②，該過程的主要目的是除去萃取劑（乙醚）?！军c(diǎn)睛】熟悉微生物的培養(yǎng)、分離以及油脂的分離方法是解答本題的關(guān)鍵。10、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對(duì)人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個(gè)DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運(yùn)輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。③具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。3、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建1、目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因（1）啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來．常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1、轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2、常用的轉(zhuǎn)化方法：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)．此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少，最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用Ca2+處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。3、重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步：目的基因的檢測和表達(dá)1、首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。2、其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交。4、有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定，如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。【詳解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒；大腸桿菌作為受體細(xì)胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。（2）①根據(jù)題意和圖示分析，經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點(diǎn)的基因突變技術(shù)。②與研究者推測不同生物對(duì)密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計(jì)了與蛋白A基因結(jié)合的兩對(duì)引物（引物B和C中都替換了一個(gè)堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照原則，若要比較新蛋白A的表達(dá)效率是否提高，則需設(shè)置三組實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)變量的處理分別為：僅含新蛋白質(zhì)A的重組質(zhì)粒，僅含蛋白A的重組質(zhì)粒和空白對(duì)照（僅含空質(zhì)粒，以排除空質(zhì)?？赡墚a(chǎn)生的影響）。因此，將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用抗原——抗體雜交方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時(shí)常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，是因?yàn)榈鞍譇基因的發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會(huì)造成基因污染；有效成分純度較高?！军c(diǎn)睛】本題主要考查基因工程、PCR技術(shù)等相關(guān)知識(shí)，考生需要理解和記憶相關(guān)知識(shí)，并學(xué)會(huì)應(yīng)用所學(xué)知識(shí)正確答題。11、目的基因和切割后質(zhì)粒的自身環(huán)化DNA連接1.6a和b氨芐青霉素雜交帶（抗原-抗體復(fù)合物）蛋白質(zhì)（第二代基因）【解析】

基因工程的工具酶有限制酶和DNA連接酶，一般用同種限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，但容易造成自身環(huán)化現(xiàn)象?！驹斀狻浚?）目的基因通過SphⅠ和SacⅠ切割產(chǎn)生的末端不同，可避免自身環(huán)化，質(zhì)粒通過SphⅠ和SacⅠ切割，可避免切割后的質(zhì)粒重新結(jié)合而環(huán)化；目的基因和質(zhì)粒結(jié)合，需要DNA連接酶連接磷酸二酯鍵將缺口連接起來。（2）根據(jù)表格信息，質(zhì)粒為6.0kb，減去被切除的長度為0.5kb的片段，則剩余的為5.5kb，而重組質(zhì)粒為7.1kb，說明插入的目的基因長度為7.1-5.5=1.6(kb)；質(zhì)粒上含抗四環(huán)素基因的ClaⅠ與PstⅠ區(qū)域長度為2.4kb，減去被切取的片段長度為0.5kb后為1.9kb，插入的目的基因長度為1.6kb，所以重組質(zhì)粒上含抗四環(huán)素基因的ClaⅠ與PstⅠ區(qū)域長度為1.9+1.6=3.5(kb)，又根據(jù)表格信息，通過ClaⅠ切割重組質(zhì)粒，產(chǎn)生了2.3kb片段，通過PstⅠ切割重組質(zhì)粒，產(chǎn)生了1.5kb片段。設(shè)PstⅠ切割位點(diǎn)為a，ClaⅠ切割位點(diǎn)為b，則會(huì)出現(xiàn)圖3中所示結(jié)果，而2.3+