一、蛋白質(zhì)通論二、肽三、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定四、蛋白質(zhì)的氨基酸(Suan)序列與生物學(xué)功能第一頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋白質(zhì)、多肽、寡肽蛋白質(zhì)與多肽可以通用有時(shí)也以胰島(Dao)素（51個(gè)氨基酸，MW=5807）作為一個(gè)分界線，大于稱為蛋白質(zhì)，小于為多肽寡肽通常指2-10個(gè)氨基酸的小分子肽第二頁(yè)，共九十一頁(yè)。一、蛋白(Bai)質(zhì)通論（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組織層次（二）蛋白質(zhì)的形狀和大小（一）蛋白質(zhì)的分類第三頁(yè)，共九十一頁(yè)。N末(Mo)端C末端牛核糖核酸酶第四頁(yè)，共九十一頁(yè)。一、蛋白(Bai)質(zhì)通論蛋白質(zhì)的分類依據(jù)蛋白質(zhì)的外形分類球狀蛋白質(zhì)：globularprotein，外形接近球形或橢圓形，溶解性較好，能形成結(jié)晶，大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于這一類。球狀蛋白的長(zhǎng)度與直徑之比一般小于10第五頁(yè)，共九十一頁(yè)。纖維狀蛋白(Bai)質(zhì)：fibrousprotein，分子類似纖維或細(xì)棒。它又可分為可溶性纖維狀蛋白質(zhì)和不溶性纖維狀蛋白質(zhì)。第六頁(yè)，共九十一頁(yè)。依據(jù)(Ju)蛋白質(zhì)的組成分類結(jié)合蛋白(conjugatedprotein)簡(jiǎn)單蛋白(simpleprotein)單純蛋白質(zhì)：這類蛋白質(zhì)只含由-氨基酸組成的肽鏈，不含其它成分清蛋白和球蛋白albuminandglobulin由簡(jiǎn)單蛋白與其它非蛋白成分結(jié)合而成第七頁(yè)，共九十一頁(yè)。含(Han)量57-672-54-96.2-1212-20抗體（丙種球蛋白）注意等電點(diǎn)及分子量1937年Tiselius和Kabat的電泳方法第八頁(yè)，共九十一頁(yè)。色蛋白：由簡(jiǎn)單蛋白與色素物質(zhì)結(jié)合而成。如血紅蛋白、葉綠蛋白和細(xì)胞色素等。糖蛋白：由簡(jiǎn)單蛋白與糖類物質(zhì)組成。如細(xì)胞膜中的糖蛋白等。脂蛋白：由簡(jiǎn)單蛋白與脂類結(jié)合而成。如血清-，-脂蛋白等。核蛋白：由簡(jiǎn)單蛋白與核酸結(jié)合而成。如DNA拓(Tuo)撲異構(gòu)酶、病毒的DNA或RNA復(fù)制過(guò)程中等。結(jié)合蛋白共價(jià)通過(guò)絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸的側(cè)鏈羥基經(jīng)磷酸二酯鍵連接到DNA或RNA的3′或5′端第九頁(yè)，共九十一頁(yè)。（二）蛋白(Bai)質(zhì)的形狀和大小纖維蛋白質(zhì)、球狀蛋白質(zhì)、膜蛋白質(zhì)長(zhǎng)度/直徑>10第十頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋白質(zhì)分子量變化范圍很大,從(Cong)大約6000到1,000,000道爾頓甚至更大。（二）蛋白質(zhì)的形狀和大小第十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的組(Zu)織層次化學(xué)結(jié)構(gòu)（construct,構(gòu)造

)：是指組成分子的原子種類+數(shù)量以及它們之間的鍵合(化學(xué)鍵)形式

C2H5OH乙醇 CH3OCH3乙醚

構(gòu)型(configuration)：在給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)下，分子中原子在鍵合時(shí)所形成的不同的空間排列（可分離）旋光異構(gòu)順反異構(gòu)第十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。構(gòu)象(conformation)：在化學(xué)結(jié)構(gòu)和(He)configuration相同的分子中，其原子由于單鍵的內(nèi)旋轉(zhuǎn)(internaltotation)而在空間形成的不同的構(gòu)象體可以相互轉(zhuǎn)化

一種物質(zhì)它的構(gòu)造和構(gòu)型只有一種，但它的構(gòu)象可以有許多種！第十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次分一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三(San)級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)在二、三級(jí)結(jié)構(gòu)之間又分出二個(gè)亞層次：超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域?？臻g結(jié)構(gòu)=三維結(jié)構(gòu)=蛋白質(zhì)的構(gòu)象第十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。第十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。二(Er)、肽

1、肽的基本概念2、肽命名3、動(dòng)植物體內(nèi)重要的肽4、肽的物理和化學(xué)性質(zhì)第十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。1、肽的(De)基本概念一分子氨基酸的α-羧基與另一分子氨基酸α-氨基脫水縮合的化合物叫做肽，氨基酸之間通過(guò)酰胺鍵（蛋白質(zhì)化學(xué)中將這類酰胺鍵專稱為肽鍵）連接而成。指示:

刪除樣本文檔圖標(biāo),并替換為工作文檔圖標(biāo)，如下:在Word中創(chuàng)建文檔.返回PowerPoint在“插入”菜單中選擇“對(duì)象...”單擊“從文件創(chuàng)建”定位“文件”框中的文件名確認(rèn)選中“顯示為圖標(biāo)”。單擊“確定”選擇圖標(biāo)從“幻燈片放映”菜單中選擇“動(dòng)作設(shè)置”單擊“對(duì)象動(dòng)作”，并選擇“編輯”單擊“確定”第十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。肽鍵性(Xing)質(zhì)1：肽鍵中的C-N鍵具有部分雙鍵性質(zhì)，不能自由旋轉(zhuǎn)。肽鍵性質(zhì)2：在大多數(shù)情況下，以反式結(jié)構(gòu)存在。相鄰2個(gè)氨基酸的側(cè)鏈R形成反式構(gòu)型

組成肽鍵的原子（4+2）處于同一平面－肽平面。第十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。第十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。

-H2O二(Er)肽：丙氨酰甘氨酸

N——C2、肽命名

第二十頁(yè)，共九十一頁(yè)。寡肽——少(Shao)數(shù)幾個(gè)氨基酸

組成的肽絲氨酸甘氨酸酪氨酸丙氨酸亮氨酸第二十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。多肽鏈、蛋白質(zhì)就是由幾十個(gè)到幾百個(gè)甚至幾千個(gè)氨基酸(Suan)分子借肽鍵相互連接起的多肽鏈肽鏈中的氨基酸不是原來(lái)完整的分子，多肽鏈中的氨基酸單位稱為氨基酸殘基第二十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。

無(wú)論肽鏈有多長(zhǎng)，在鏈的兩端一端有游離的氨基（-NH2），稱為N端；鏈的另(Ling)一端有游離的羧基（-COOH），稱為C端。

多肽化合物的名稱，通常按照肽內(nèi)氨基酸殘基的排列順序，以殘基名稱（如某某氨酰）從N端依次閱讀到C端，并以C端殘基全名結(jié)束肽的名稱。第二十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。命名舉(Ju)例氨基末端羧基末端下列五肽命名為：丙氨酰谷氨酰亮氨酰纈氨酰組氨酸第二十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。注(Zhu)意：在開鏈肽的N端和C端可以有游離的α氨基和α羧基，而有的開鏈肽的N端或C端的游離的α氨基或α羧基被別的基團(tuán)結(jié)合（如烷基化、?；龋┗騈端殘基自身環(huán)化。第二十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。例如促甲狀腺素釋放激素的N端殘基是谷氨酸(Suan)，此殘基易于自身環(huán)化成焦谷氨?；é涟被c谷氨酸的γ羧基脫水縮和而成）。第二十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。在生物體中，多肽(Tai)最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。但是，也有許多分子量比較小的多肽以游離狀態(tài)存在。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為活性肽。如：腦啡肽；激素類多肽；抗生素類多肽；谷胱甘肽；蛇毒多肽等?；钚噪摹に仉幕蛏窠?jīng)肽3、動(dòng)植物體內(nèi)重要的肽第二十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。

1）、谷胱(Guang)甘肽

γ-肽鍵

GSH容易氧化，二分子GSH脫氫以二硫鍵相連成氧化型的谷胱甘肽（GSSG）谷胱甘肽是某些酶的輔酶，在體內(nèi)氧化還原過(guò)程中起重要作用。第二十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。2）、促腎上腺皮質(zhì)激(Ji)素（ACTH）大腦分泌的ACTH參與意識(shí)行為的調(diào)控；腺垂體分泌的ACTH主要作用于腎上腺皮質(zhì)

第二十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。3）、腦(Nao)啡肽

Leu-腦啡肽

Met-腦啡肽

神經(jīng)遞質(zhì)，有鎮(zhèn)痛作用而又不會(huì)像嗎啡那樣使病人上癮的藥物第三十頁(yè)，共九十一頁(yè)。嗎啡是鴉片中最主要的生物堿（含量約10-15%），1806年法國(guó)化學(xué)家F·澤爾蒂納首次從鴉片中分離出來(lái)。分離得到的白色粉末在狗和自己身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果狗吃下去后很快昏昏睡去，用強(qiáng)刺激法也無(wú)法使其興奮蘇醒；他本人吞下這些粉末后也長(zhǎng)眠不醒。據(jù)此他用希臘神話中的睡眠之(Zhi)神嗎啡斯（Morphus）的名字將這些物質(zhì)命名為“嗎啡”。第三十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。腦啡肽（endorphin），是一種內(nèi)成性（腦下垂體分泌）的類嗎啡生物化學(xué)合成物激素。它能與嗎啡受體結(jié)合，產(chǎn)生跟嗎啡、鴉片劑一樣(Yang)有止痛和欣快感。等同天然的鎮(zhèn)痛劑。runner'shigh

1975年，兩個(gè)小組分別自豬腦和牛腦中發(fā)現(xiàn)2008年3月《Science》第三十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。4）、胰高血糖(Tang)素——29肽

第三十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。4、肽(Tai)的物理和化學(xué)性質(zhì)離子晶體，熔點(diǎn)高，兩性離子。1、雙縮脲反應(yīng)（biuretreaction）是肽和蛋白質(zhì)所特有的一個(gè)反應(yīng)。一般含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的肽鍵的化合物與CuSO4堿性溶液都能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)面生成紫紅色或蘭紫色復(fù)合物利用這個(gè)反應(yīng)可以以分光光度計(jì)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量（非蛋白質(zhì)特異性）第三十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。第三十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。肽的等(Deng)電點(diǎn)如何求出？2、兩性離子第三十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。+H3N—His—Glu—Val—COO-COO-查(Cha)P133pK9.17pK6.00pK4.25pK2.322.324.256.009.17+-+2+10-1-2pK=4.25*6/2=5.125第三十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋(Dan)白質(zhì)分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)及其測(cè)定

一級(jí)結(jié)構(gòu)組成多肽鏈的氨基酸殘基的連接方式和排列順序二硫鍵第三十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋白質(zhì)(Zhi)的一級(jí)結(jié)構(gòu)：(Primarystructure)組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目多肽鏈的氨基酸順序多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置第三十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。1，樣品必需純（>97%以上）；2，知道蛋白質(zhì)的分子量；3，知道蛋白質(zhì)由幾個(gè)亞基組成；4，測(cè)定蛋白質(zhì)的氨基酸組成；并根據(jù)分子量計(jì)算每種氨基酸的個(gè)數(shù)。5，測(cè)定水解液中的氨量，計(jì)算酰(Xian)胺的含量。測(cè)定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的要求第四十頁(yè)，共九十一頁(yè)。三、蛋白(Bai)質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定1.氨基酸組成分析

2．氨基酸末端分析

3.蛋白質(zhì)中肽鏈的拆離4.肽鏈的部分降解及肽片斷的分離5．肽段氨基酸順序測(cè)定及肽段重疊6.二硫鍵與酰胺基的定位

第四十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。1.氨基酸組成(Cheng)分析第四十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。N-末端(Duan)分析C-末端分析2.氨基酸末端分析N末端測(cè)定方法比C末端更加成熟、可靠和準(zhǔn)確，第四十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。N-末(Mo)端分析二硝基氟苯法（FDNB法）二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法）異硫氰酸苯酯法（Edman法）氨基酸末端分析2.氨基酸末端分析N-末端分析第四十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。二硝基氟苯(Ben)法（FDNB法）1945年由Sanger發(fā)明此法曾用此方法測(cè)定了胰島素的N-末端。2.氨基酸末端分析第四十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。二甲基氨基萘磺酰(Xian)氯法（DNS-Cl法）1956年hartley等提出靈敏度較高（比FDNB法提高100倍）樣品量小于1毫微摩爾DNS-氨基酸穩(wěn)定性較高2.氨基酸末端分析第四十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。異硫氰(Qing)酸苯酯法（Edman法）2.氨基酸末端分析生成PTH-氨基酸非常穩(wěn)定，在268nm處有強(qiáng)吸收峰第四十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。C-末(Mo)端分析肼解法還原法羧肽酶法2.氨基酸末端分析第四十八頁(yè)，共九十一頁(yè)?？膳c苯甲醛(Quan)作用形成不溶的二亞芐基衍生物而除去溶于上清中第四十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。2.還原(Yuan)法2.氨基酸末端分析硼氫化鋰還原成α-氨基醇。完全水解后分析α-氨基醇第五十頁(yè)，共九十一頁(yè)。3.羧(Suo)肽酶法主要方法

根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測(cè)出酶水解所釋放的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的C末端殘基順序。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，由于羧肽酶對(duì)不同的C末端氨基酸作用的速度不同，而且反應(yīng)是連續(xù)的，不能停在某一步上，因此給正確判斷氨基酸的順序造成了一定的困難。2.氨基酸末端分析肽鏈外切酶自多肽鏈的C端逐個(gè)的水解氨基酸第五十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。第五十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。4種(Zhong)常用羧肽酶：羧肽酶來(lái)源專一性CpA胰臟能釋放除pro、Arg和Lys以外的所有C端氨基酸CpB胰臟主要水解C端為Arg或Lys的肽鍵CpC植物或微生物相當(dāng)廣泛，幾乎能釋放C端的所有氨基酸CpY面包酵母可釋放C端所有氨基酸羧肽酶A、B均不作用于C-末端第二位為Pro的C-末端的殘基的肽鍵第五十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。-AA-AA-Lys-AA-AA-Arg-AA-AA-Pro-AA-AA-pro-AA羧肽酶A不(Bu)作用-AA-AA-Lys-AA-AA-Arg羧肽酶B只作用羧肽酶A、B均不作用羧肽酶Y設(shè)計(jì)自動(dòng)化序列儀return第五十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。肽鏈間的(De)結(jié)合非共價(jià)鍵血紅蛋白（四聚體）烯醇化酶（二聚體）共價(jià)鍵結(jié)合胰島素免疫球蛋白等3、蛋白質(zhì)中肽鏈的拆離第五十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。非共價(jià)鍵連接(Jie)的多肽鏈溫和條件下可以解離通過(guò)二硫鍵連接的多肽鏈需要較強(qiáng)的條件將二硫鍵切斷3、蛋白質(zhì)中肽鏈的拆離第五十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。拆(Chai)分二硫鍵結(jié)構(gòu)是半胱氨酸殘基經(jīng)氧化作用而形成胱氨酸殘基。還原法氧化法3、蛋白質(zhì)中肽鏈的拆離第五十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。主要二種方法：1.過(guò)(Guo)甲酸氧化法巰基（-SH）和二硫鍵（-S-S-）同時(shí)氧化成磺基，生成的磺酸基很穩(wěn)定，肽鏈不再重新形成二硫鍵，便于肽鏈分離二硫橋的斷裂第五十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。巰基乙醇8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍二硫橋的(De)斷裂2.巰基化合物還原法蛋白質(zhì)變性二硫鍵暴露第五十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。可以用碘乙酸等烷基化試劑保護(hù)生成(Cheng)的半胱氨酸的-SH+HI+巰基保護(hù)試劑第六十頁(yè)，共九十一頁(yè)。

由于氨基酸順序測(cè)定多數(shù)采用Edman降解法，它一次能分析肽鏈長(zhǎng)(Chang)度約10余個(gè)氨基酸殘基，所以分離得到的單鏈如果太長(zhǎng)，須將長(zhǎng)的肽鏈斷裂成易分析的較短肽鏈。

肽鏈部分降解的方法要求選擇性強(qiáng)、裂解點(diǎn)少、反應(yīng)率高，一般采用化學(xué)裂解和酶解法兩種。4.肽鏈的部分降解及肽片斷的分離第六十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。1）．化學(xué)裂解法

溴化氰（CNBr）與肽鏈中Met殘基側(cè)鏈的硫醚基發(fā)生反應(yīng)，生成環(huán)化的溴化亞氨內(nèi)酯，此產(chǎn)物水解后，產(chǎn)生高絲氨酸內(nèi)酯，使蛋氨酸羧基端的肽鍵斷裂。這一方法的優(yōu)點(diǎn)是產(chǎn)率高（可達(dá)85%）、專一性強(qiáng)，故實(shí)際應(yīng)用(Yong)較多。甲硫氨酸,人體唯一的含硫必需AA第六十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。氰化物(Wu)，帶有氰基（CN）的化合物cyanide['sai?,naid]叁鍵給予氰基以相當(dāng)高的穩(wěn)定性，使之在通常的化學(xué)反應(yīng)中都以一個(gè)整體存在。該基團(tuán)具有和鹵素類似的化學(xué)性質(zhì)，常被稱為擬鹵素。

有機(jī)氰化物可分類為腈jīng（C-CN）異腈（C-NC）

第六十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。苦杏仁中毒機(jī)理主要是由于苦杏仁苷被腸道菌群中的β-葡萄糖苷酶水解，產(chǎn)生氫氰(Qing)酸而被吸收。氰離子能與細(xì)胞色素氧化酶的三價(jià)鐵（Fe3+）結(jié)合，阻斷了氧化呼吸過(guò)程中電子的傳遞，致使血紅蛋白喪失攜氧能力，最后組織細(xì)胞因缺氧而窒息。有報(bào)道，成人一次口服生苦杏仁40-60?？芍卸荆?0-100?？芍滤?。亦有文獻(xiàn)報(bào)道，小兒口服5粒引起中毒，服10余粒致死的。第六十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。產(chǎn)生(Sheng)片段的C端是Met第六十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。

2）．酶解法

酶解法相對(duì)化學(xué)(Xue)裂解法而言，有許多優(yōu)點(diǎn)，如專一性強(qiáng)、裂解條件溫和、副反應(yīng)少等，再則蛋白水解酶對(duì)肽鏈的水解率也比較高;不同的蛋白水解酶對(duì)不同氨基酸形成的肽鍵水解專一性不同。廣泛使用第六十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。胰蛋白(Bai)酶胰凝乳(糜)蛋白酶葡萄球菌V8蛋白酶胃蛋白酶溴化氰梭菌蛋白酶（Arg蛋白酶）pH2-3Arg(C)第六十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。胰(Yi)蛋白酶第六十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。胰蛋白酶：R1=賴氨酸Lys和精(Jing)氨酸Arg側(cè)鏈（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。肽鏈水解位點(diǎn)第六十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。胰凝乳蛋白酶或糜蛋白酶：R1=苯丙氨酸Phe,色氨酸Trp,酪(Lao)氨酸Tyr（速度快）;亮氨酸Leu，蛋氨酸Met和組氨酸His水解速度稍慢。肽鏈水解位點(diǎn)第七十頁(yè)，共九十一頁(yè)。5、肽段的分離提純

肽鏈經(jīng)部分裂解得到肽片段必須分離提純，才能進(jìn)一步測(cè)定其氨基酸(Suan)順序。先采用凝膠過(guò)濾，得到不同相對(duì)分子質(zhì)量的肽片段組分肽片段組分可用離子交換層析進(jìn)一步提純，也可應(yīng)用雙相高壓紙電泳和層析相結(jié)合的方法，HPLC或FPLC具有更高的分辨率。第七十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。6.肽段氨基酸序列的測(cè)(Ce)定主要Edman降解法現(xiàn)在主要由氨基酸序列推定法7.肽段在多肽鏈中次序的決定重疊肽段拼湊法重建多肽鏈序列8.二硫橋位置的確定——對(duì)角線電泳第七十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。

取少量的樣品，首先用碘代乙酰胺將肽鏈中未參與二硫鍵形成(Cheng)的巰基保護(hù)起來(lái)，然后用胃蛋白酶水解。肽水解后，可用Brown和Hartlay提出的對(duì)角線法電泳分離。8.二硫橋位置的確定——對(duì)角線電泳第七十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。對(duì)角線電(Dian)泳圖譜混合肽段點(diǎn)到濾紙中央，兩個(gè)方向的電泳條件完全相同第一向第二向過(guò)甲酸蒸氣處理2小時(shí)，使-S-S-斷裂，此時(shí)含-S-S-肽段的靜電荷發(fā)生了改變第七十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。序列分析中(Zhong)的重要方法和技術(shù)測(cè)定N-末端基的異硫氰酸苯酯（PITC）法；分析C-末端基的羧肽酶法；用于多肽鏈局部斷裂的酶裂解和CNBr化學(xué)裂解；斷裂二硫橋的疏基乙醇處理；測(cè)定肽段氨基酸序列的Edman化學(xué)降解和電噴射串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)；重建多肽鏈一級(jí)序列的重疊肽拼湊法用于二硫橋定位的對(duì)角線電泳等。第七十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。蛋白質(zhì)順序測(cè)定基本(Ben)戰(zhàn)略將肽段順序進(jìn)行疊聯(lián)以確定完整的順序?qū)㈦亩畏蛛x并測(cè)出順序?qū)Ｒ恍粤呀饽┒税被釡y(cè)定二硫鍵拆開純蛋白質(zhì)第七十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。9.蛋白質(zhì)(Zhi)測(cè)序舉例

英國(guó)Sanger等人在1953年首次完成了牛胰島素（bovineinsulin）的全部化學(xué)結(jié)構(gòu)的測(cè)定工作——這是一個(gè)里程碑性的工作FrederickSanger1918,8,13－1958年、1980年兩度獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)第七十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。A鏈(Lian)B鏈過(guò)甲酸產(chǎn)物分離第七十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。用胰蛋白酶用糜蛋白酶分離肽片(Pian)段，測(cè)定肽序列第七十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。用重疊肽重建多肽鏈序(Xu)列第八十頁(yè)，共九十一頁(yè)。胰(Yi)島素中二硫橋位置的確定糜蛋白酶溫和酸水解第八十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。由于蛋白質(zhì)序列測(cè)定技術(shù)先于DNA序列測(cè)定技術(shù)問(wèn)世，蛋白質(zhì)序列的搜集也早于DNA序列。60年代中期到80年代初，美國(guó)國(guó)家生物醫(yī)學(xué)研究基金會(huì)(簡(jiǎn)稱NBRF)Dayhoff領(lǐng)導(dǎo)的研究組將搜集到的蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)信(Xin)息以“蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)地圖集”(AtlasofProteinSequenceandStructure)的形式發(fā)表，主要用來(lái)研究蛋白質(zhì)的進(jìn)化關(guān)系。1984年，“蛋白質(zhì)信息資源”(ProteinInformationResource，簡(jiǎn)稱PIR)計(jì)劃正式啟動(dòng)，蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)PIR也因此而誕生。

10.蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)第八十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。10.蛋白(Bai)質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)

SWISS-PROTSWISS-PROT蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)，由日內(nèi)瓦大學(xué)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)系與EMBL（歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室）共同維護(hù)，是歐洲最主要的蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)，世界兩大蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)之一。PIRPIR（ProteinInformationResource）蛋白信息數(shù)據(jù)庫(kù)，由美國(guó)國(guó)家生物醫(yī)學(xué)研究基金會(huì)（NationalBiomedicalResearchFoundation)維護(hù)。是美國(guó)最主要的蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)，為世界兩大蛋白序列數(shù)據(jù)庫(kù)之一。PDBBrookhaven蛋白序列三維立體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)。PROSITE蛋白特征序列字典。ENZYME蛋白酶數(shù)據(jù)庫(kù)。REBASE限制酶數(shù)據(jù)庫(kù)。HSSP同類二級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白（Homology-derivedsecondarystructureofproteins）數(shù)據(jù)庫(kù)。BLOCKS蛋白序列塊數(shù)據(jù)庫(kù)（ProteinBlocksDatabase）。KABAT具有免疫學(xué)重要性的蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)（DatabaseofProteinsofimmunologicalinteres