關(guān)于實(shí)驗(yàn)二銀耳多糖含量的測(cè)定第1頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握多糖含量測(cè)定的原理和方法。第2頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三三、實(shí)驗(yàn)原理多糖在濃硫酸中水解，進(jìn)一步脫水生成糖醛及其衍生物，與蒽酮（10-酮-9,19-二氫酮）反應(yīng)生成藍(lán)綠色復(fù)合物，在620nm處有最大吸收值。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液作標(biāo)準(zhǔn)，在620nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色，可計(jì)算出總糖的含量。第3頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（1）糖經(jīng)濃無機(jī)酸處理后，脫水生成糠醛或糠醛衍生物；第4頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（2）糠醛和糖醛衍生物在濃無機(jī)酸的作用下，能與蒽酮化合物反應(yīng)生成有色物質(zhì)。（3）反應(yīng)液顏色的深淺，反映出糖濃度的高低。第5頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三四、儀器、試劑與藥品試劑：0.1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、蒽酮試劑、蒸餾水樣品液：0.5mg/ml試管、電爐、可見光分光度計(jì)、容量瓶etc.第6頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三五、實(shí)驗(yàn)操作1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(1)加樣：(2)將加好的樣品混勻，沸水浴10min，室溫冷卻，于620nm處比色。(3)以第一管為空白，進(jìn)行比色。以光密度（OD值)為縱坐標(biāo)，糖的含量(μg)數(shù)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。第7頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2.樣品的準(zhǔn)備稱取適量樣品，先加少量的水溶解，最后定容于50ml，至溶液濃度約為0.5mg/ml.3.樣品中多糖含量的測(cè)定分別吸取0.1、0.3和0.5ml樣品液，用蒸餾水補(bǔ)足1.00ml。加入蒽酮試劑，同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作之操作，比色測(cè)定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品濃度計(jì)算含量。第8頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第9頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三六、思考題1、根據(jù)樣品液多糖含量，計(jì)算實(shí)驗(yàn)一中多糖的提取率。2、根據(jù)蒽酮測(cè)糖原理，設(shè)計(jì)測(cè)定化合物中淀粉量的方案。第10頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三注意事項(xiàng)：加樣要求準(zhǔn)確。第11頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)三豬胃粘膜中提取胃膜素、胃酶第12頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)從豬胃粘膜中提取胃膜素、胃酶的原理和方法，了解有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀法的應(yīng)用。第13頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、簡(jiǎn)介胃膜素：功效：一種以黏蛋白為主要成分的生物活性藥物，有極強(qiáng)的黏附作用，可直接作用于消化道內(nèi)壁，在胃及十二指腸潰瘍面形成一層保護(hù)膜，減少胃酸對(duì)它的刺激，利于潰瘍面的愈合；另一方面有潤(rùn)滑作用，使進(jìn)入消化道的食物易于在消化道內(nèi)移行，有利于減少某些物質(zhì)對(duì)潰瘍面的刺激。胃膜素臨床上用于胃及十二指腸潰瘍。性質(zhì)描述:淡黃色或淡灰色粉末，或微小顆粒。著水脹為粘漿。顯微溶狀態(tài)，略帶類蛋白胨臭。具有很強(qiáng)的粘附力。第14頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三胃蛋白酶：存在于動(dòng)物胃液中，以無活性的胃蛋白酶原形式，存在于胃底的主細(xì)胞中，在酸性條件下，胃蛋白酶原變化成有消化蛋白質(zhì)能力的胃蛋白酶。在醫(yī)學(xué)上主要用于治療消化不良、食欲不振、慢性胃炎等，工業(yè)上可作水解蛋白用。干燥的胃蛋白酶為白色或淡黃色粉末，引濕性強(qiáng)，易溶于水；對(duì)熱較穩(wěn)定，100℃10min不破壞。水溶液中，70℃以上破壞。第15頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三三、實(shí)驗(yàn)原理胃粘膜一般指胃底粘膜，分泌胃液的主細(xì)胞集中在胃底粘膜，呈暗紅色，直徑約10-12厘米圓塊，約100g。胃膜素是從豬胃粘膜經(jīng)胃蛋白酶和鹽酸消化后的上層液中，60%左右的乙醇所沉淀的部分。蛋白質(zhì)、酶等極性物質(zhì)的水溶液加入與水混溶的有機(jī)溶劑，可沉淀析出。第16頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三四、儀器、試劑與藥品水浴鍋，攪拌器，冰箱，真空干燥，鹽酸，氯仿，丙酮，乙醇，離心機(jī)等。第17頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三四、實(shí)驗(yàn)操作1.激活提取豬胃粘膜0.55Kg（5只豬肚）+水約220ml升（胃粘膜的40%），用1：1鹽酸調(diào)pH2.5-3.0，45-50℃攪拌提取3h(在攪拌的過程中需注意不停的調(diào)節(jié)pH)。2.脫脂分層雙層紗布過濾，冷卻至室溫，緩慢加入約55ml氯仿（胃粘膜的10%），攪拌2h，室溫靜置24h后，放掉底層的氯仿和雜質(zhì)，上清液預(yù)冷至5℃以下第18頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3.胃膜素分離上清液在攪拌下（同一方向，否則胃膜素會(huì)散開）緩緩加入預(yù)冷至5℃以下的丙酮（γ=0.708）至比重約0.97，撈出胃膜素，以適量的75%乙醇洗兩次，真空干燥。4.胃酶的沉淀母液再加丙酮至比重約0.91，有黃色沉淀產(chǎn)生，離心（4℃,

7000rpm,10min)取沉淀，70℃以下真空干燥。第19頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三實(shí)驗(yàn)四胃蛋白酶活力的測(cè)定第20頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握以牛血紅蛋白為底物的胃蛋白酶活力測(cè)定的原理和方法，掌握紫外分光光度計(jì)的使用。第21頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三二、實(shí)驗(yàn)原理胃蛋白酶能催化水解芳香環(huán)氨基酸連接的肽鍵。在一定條件下，可定量催化水解牛血紅蛋白產(chǎn)生不被三氯醋酸（TCA）所沉淀的酚基氨基酸（如酪氨酸）。酪氨酸在275nm波長(zhǎng)處有最大吸收，以酪氨酸為對(duì)照，可以求出胃蛋白酶活力。第22頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三三、儀器、試劑與藥品水浴鍋，紫外分光光度計(jì)，酪氨基，鹽酸，三氯醋酸，牛血紅蛋白等。第23頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三四、實(shí)驗(yàn)操作1、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的酪氨酸適量，加鹽酸溶液〔取1mol/l鹽酸溶液65ml，加水至1,000ml〕制成每1ml中含0.5mg的溶液，搖勻，備用。2、供試品溶液的制備：精密稱取實(shí)驗(yàn)三提取的胃酶干粉40-60mg，用上述鹽酸溶液制成每1ml中約含0.2～0.4U的溶液。（稱本品（一般3500U/g以上）40-60mg，用上述鹽酸溶液定容至100ml，再取5ml用上述鹽酸溶液定容至50ml，即0.04-0.06mg/ml）。第24頁(yè)，共26頁(yè)，2023年，2月20日，星期三3、測(cè)定方法：取試管6支，其中3支各精密加入對(duì)照品溶液1ml，另3支各精密加入供試品溶液1ml，置37±0.5℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37±0.5℃的牛血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37±0.5℃水浴中反應(yīng)10分鐘。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，搖勻，過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37±0.5℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加對(duì)照樣品鹽酸溶液1ml，搖勻，過濾，棄初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對(duì)照品的空白對(duì)照，按照分光光度法在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，算出平均值ＡS和Ａ，按下式計(jì)算。Ａ×Ｗｓ×ｎ每g含蛋白酶活力單位數(shù)＝───────────Ａs×Ｗ×10×181.19式中：ＡS為對(duì)照品的平均吸收度；Ａ為供試