1/1實驗動物學(xué)實驗報告圖文實驗動物學(xué)課程

實驗報告

實驗內(nèi)容:

1.小鼠的基本實驗操作

2.小鼠皮膚移植試驗、睪丸(或卵巢摘除術(shù)

3.豚鼠和兔的一般操作技術(shù)

4.大鼠實驗的基本操作

5.大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立

6.小鼠無菌取胎術(shù)

7.Beagle犬的一般操作和沙鼠、金黃地鼠、裸小鼠的特性

實驗一小鼠的基本實驗操作

一、實驗?zāi)康?通過實際操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓取和固定、性別鑒定、編號、去毛、給藥、采血、麻醉、處死,尤其是染色法編號、灌胃、眼球摘除法采血、腹腔注射、脊椎脫臼法處死。

二、實驗動物:昆明小鼠4只(2雌2雄

三、實驗步驟

1、抓取和固定

2、性別鑒定

3、編號(染色法

4、去毛(脫毛劑法

5、給藥:消化道、腹腔注射、尾靜脈注射

6、采血:眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法

7、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉

8、處死:脊椎脫臼法、過量麻醉

9、解剖:

9.1生殖系統(tǒng):

9.1.1雄性:睪丸、附睪、輸精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,膠質(zhì)狀,透明

9.1.2雌性:雙角子宮、卵巢

9.2腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺

四、實驗結(jié)果

1、抓取和固定:

抓取:抓小鼠的尾根部

固定:抓住小鼠的尾根部,讓小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇指和食指抓住小鼠兩耳及其間的頸部皮膚,小指和無名指將尾巴固定在手掌面。

2、性別鑒定:

觀察肛門與生殖器間的距離和二者之間的毛發(fā)。雄性:距離長,毛發(fā)密(和其

他部位一樣;雌性:距離短,毛發(fā)稀疏。

3、編號:

3.1染色法:

3.1.1用苦味酸(黃色在小鼠背面染色

3.1.2逆毛發(fā)生長方向染色,自毛根開始

3.1.3可編1-10號(10號為不編號

3.2去毛:脫毛劑:8%Na2S,自毛發(fā)根部涂抹

3.3給藥:

3.3.1灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃針,沿一側(cè)口角進(jìn)針,緊貼咽后壁,頭后仰以便伸直消化道,進(jìn)針2/3后灌生理鹽水0.5ml

3.3.2注射給藥:

3.3.2.1腹腔注射:

3.3.2.1.1從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針

3.3.2.1.2進(jìn)針時針與腹部成45°。進(jìn)針后稍微晃動針,如無粘滯感則可注射藥物

3.3.2.2尾靜脈注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指和拇指將尾拉直,食

指托住尾部,消毒后右手持帶4號針頭的注射器在圖示A(背面,實為動脈

位置進(jìn)針注射0.5ml生理鹽水。注射完畢拔出針頭,用無菌棉球壓迫止血。尾動脈細(xì)小,且貼近皮膚,未注射成功。

小鼠尾靜脈切面圖

3.4采血

3.4.1:從眼角內(nèi)側(cè)0.5cm處

進(jìn)針。(右圖

3.4.2眼球摘除法:左手抓取

用固定小鼠,右手持彎頭鑷在

眼球根部將眼球摘除,頭朝下,

眼眶內(nèi)血迅速流出。

3.5麻醉:

0.5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重25g,按100mg/kg的藥量給藥,8分鐘麻醉成功

3.6處死:

3.6.1脊椎脫臼法:按住頭部,將尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死3.6.2過量麻醉:追加0.5%氯胺酮過量(5ml腹腔麻醉

3.7解剖:

3.7.1生殖系統(tǒng):

3.7.1.1雄性:尋

找到睪丸、附睪、

輸精管、鼠蹊腺

3.7.1.2雌性:雙

角子宮、卵巢

3.7.2腎上腺:米粒大

小

3.7.3胰腺:位于胃下方,類似于脂肪組織,渾濁狀

3.7.4膽囊:芝麻大小,淺綠色,半透明

3.7.5甲狀腺:緊貼環(huán)狀軟骨

五、實驗討論

1、小鼠抓取的感受:

小鼠性情較溫順,一般不會咬人,比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上,在小鼠向前掙扎爬行時,用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚,將小鼠置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮膚和尾部,即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實驗中,如進(jìn)行尾靜脈注射時,可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定,如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作,如進(jìn)行解剖實驗則必須先行無痛處死后再進(jìn)行。

2、小鼠尾靜脈注射感受:

首先,注射前尾巴用稍熱的水浸泡幾分鐘,有利于注射;其次,先遠(yuǎn)后盡,不要一開始就從尾根部,那樣失敗了不好辦;再次,進(jìn)血管后注意保持穩(wěn)定,針尖很容易刺穿血管的。

尾靜脈就在尾巴的正左右兩邊,先用酒精用力擦,可以去掉部分角質(zhì),然后按住近心端讓充血,就很容易看到了。進(jìn)針大概1~2厘米是最合適的。

尾靜脈注射時,可用45~50度的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭,可使血管擴(kuò)張,同時也可軟化表皮角質(zhì)。以左手拇指和食指夾住鼠尾,使靜脈充盈,中指幫助無名指和小指捏住鼠尾末梢,右手持注射器(連5號細(xì)針頭,針頭與靜脈夾角一般小于30度,從距尾尖2-3厘米處進(jìn)針,此處皮薄易進(jìn)入,先抽回血,見到血后再緩慢注入少量藥液,如無阻力,表示針頭已進(jìn)入靜脈,可繼續(xù)注入。一般推注速度為0.05-0.10ml/秒,一次注入量為0.05-

0.25ml/10g體重。如反復(fù)注入,應(yīng)盡可能從尾末端開始,以后向尾根部方向移動注射。

實驗二小鼠皮膚移植試驗、睪丸(或卵巢摘除術(shù)

一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握近交系小鼠常用的皮膚移植試驗(尾~背植皮法,尾~尾植皮法。

2.掌握小鼠卵巢摘除術(shù)和大鼠睪丸摘除術(shù)

二、實驗步驟

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗

1.1尾~背植皮法

1.2尾~尾植皮法

2、小鼠卵巢摘除術(shù)

2.1固定體位、麻醉

2.2卵巢摘除

三、實驗結(jié)果

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗

1.1尾~背植皮法:

1.1.1將近交系小鼠(受體固定后(已

麻醉,背部剪毛(約1.5cm×1.5cm大小,75%酒精常規(guī)消毒。用眼科剪在此部位剪開一個0.3cm×0.3cm大小的方形洞備用。

1.1.2將近交系小鼠(供體固定后(已

麻醉,75%酒精常規(guī)消毒鼠尾。用眼科剪

沿尾靜脈剪開一條縫,用止血鉗將皮膚剝

下,剪成0.5cm×0.5cm大小,刮掉皮片

上的結(jié)締組織。

1.1.3將供體皮片(0.5cm×0.5cm大小覆蓋在受體背部的方形洞(0.3cm×0.3cm大小內(nèi),鋪平,用棉球吸去滲出的血液,使植皮緊貼受體的創(chuàng)面,并與宿主的

邊緣密切吻合。

1.1.4無菌紗布覆蓋植皮區(qū),膠布包扎(此步驟本實驗中省略。

1.1.51~3周后觀察結(jié)果

1.2尾~尾植皮法(本實驗中為自體尾~尾移植:

1.2.1將近交系小鼠固定后(已麻醉,75%酒精常規(guī)消毒尾部皮膚。

1.2.2固定鼠尾的根部,用4號手術(shù)刀在鼠尾背部切開一0.5cm×0.5cm大小的皮片,盡量不損傷局部血管,用止血鉗將皮膚剝下。

1.2.3將皮片旋轉(zhuǎn)180°,鑲嵌在創(chuàng)面上,棉球吸去局部滲出的血液和組織液,使

其盡可能緊貼,可以不包扎。

1.2.41~3周后觀察結(jié)果(100天

2、小鼠卵巢摘除術(shù)

2.1固定體位、麻醉:

選雌性小鼠,取左側(cè)臥位,以左腹外側(cè)區(qū)(左肋弓下緣為手術(shù)區(qū),局部剪毛,75%酒精消毒兩遍后,用0.5%氯胺酮以100mg/kg的劑量(本實驗:0.5ml進(jìn)行腹腔麻醉,5分鐘后小鼠靜臥于手術(shù)臺上,呼吸深大而有節(jié)律,頻率略快,四肢肌肉松弛,麻醉成功。

2.2卵巢摘除:

用手術(shù)刀在左肋緣下,取腹正中線平行方向切開皮膚1cm,暴露腹腔內(nèi)容物。撥開腸管,找到右腎。在右腎下方找到右側(cè)卵巢和右側(cè)子宮角。游離右側(cè)卵巢并摘除。局部消毒,縫合腹膜、腹壁肌肉和皮膚。

按上述方法摘除左側(cè)卵巢(另一位同學(xué)操作。

四、實驗討論

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗

1.1皮膚移植實驗是用于鑒定近交系動物組織相容性基因是否一致的簡單而可靠的方

法。

1.2尾~背植皮法:將小鼠尾部皮膚移植到同品系的異體小鼠的背部,通過觀察移植皮

片和背部其他區(qū)域的毛發(fā)稀疏和皮膚光澤異同來鑒定二者的組織相容性。如果組織相容性好,植皮色澤與周圍一致,沒有充血或炎癥,移植皮片毛少而光澤。若組織相容性基因不純合,尾皮在術(shù)后1~3周內(nèi)被排斥,,植皮脫落,背部留下一塊傷痕。另外,供體皮片應(yīng)略大于受體創(chuàng)面以充分吻合,以免因皮片邊緣缺血壞死而導(dǎo)致愈合后創(chuàng)面周邊皮膚不連續(xù)。

1.3自體尾~尾植皮法:可以鑒定植皮的脫落是否是手術(shù)失敗而造成。移植時應(yīng)將皮片

旋轉(zhuǎn)180°,以利于術(shù)后通過毛發(fā)生長的方向觀察植皮是否存活。

2、小鼠卵巢摘除術(shù)、大鼠睪丸摘除術(shù)

2.1小鼠卵巢摘除術(shù):進(jìn)入腹腔后,可以先找到腎臟。然后在腎臟下方查找卵巢并摘除。

2.2行卵巢或睪丸摘除術(shù)時應(yīng)將兩側(cè)的卵巢或睪丸均摘除。

實驗三豚鼠和兔的一般操作技術(shù)

1.實驗?zāi)康?/p>

通過實際操作,掌握豚鼠和兔的一般操作方法和尸體解剖及病理取材方法,包括豚鼠和兔的抓取和固定、編號、性別鑒定、灌胃、給藥途徑、麻醉、采血和處死等方法。

2.實驗動物:新西蘭兔,豚鼠(各1只

3.實驗步驟

3.1豚鼠的抓取和固定

抓取豚鼠應(yīng)先用手掌抓住背部,將手張開,用拇指和食指握住頸部,再拿起來。

3.2豚鼠的性別鑒定

將豚鼠抓取后,觀察肛門與生殖器之間的距離,距離近者為雌性,距離遠(yuǎn)者為雄性。

3.3豚鼠的給藥

腹腔注射:自下腹部兩側(cè)進(jìn)針,可避免刺傷肝、脾或膀胱。

3.4豚鼠的采血

心臟采血法:由助手抓取豚鼠,左手固定頭部和兩前肢,右手固定兩后肢和尾部,

使胸部突出。操用酒精消毒皮膚,在左側(cè)第3~4肋間用左手食指觸摸心臟搏動。

右手持連有4~5號針頭的注射器,選擇心臟搏動最強(qiáng)處穿刺。當(dāng)針頭刺入心臟內(nèi)時,血液回流進(jìn)注射器,即可進(jìn)行采血。

3.5豚鼠的解剖

觀察器官:脾臟、小腸和大腸、肝臟、膽囊、胃、十二指腸和胰腺、腎上腺、腎臟、膀胱、睪丸、附睪或子宮、卵巢、肝臟、心臟、甲狀腺、腦、垂體。

3.6兔的抓取和固定

右手抓住頸部的被毛與皮膚,提起兔,然后用左手托住它的臀部。

3.7兔的性別鑒定

左手抓去兔子的背部皮膚,右手拇指和食指把生殖器附近的皮膚扒開,雄兔可見有

一圓孔,里面露出陰莖;雌兔此處為一條朝向尾巴的長縫,呈橢圓形間歇,下端有陰道開口處。雌兔有8~12個乳頭。

3.8兔的給藥

3.8.1經(jīng)口灌胃法:灌胃時用一木制張口器橫放于上下腭之間,用繩固定。這時

可用左手抓住動物的嘴,右手將一適當(dāng)粗細(xì)的導(dǎo)尿管由張口器中央小孔插

入,進(jìn)入食管和胃。將裝有藥液的注射器接上導(dǎo)尿管,即可慢慢灌入胃內(nèi)。

3.8.2注射給藥:耳緣靜脈注射法:將兔固定好。把去耳緣部被毛,用二甲苯擦

拭耳緣,促使靜脈充盈。用左手拇指和食指壓住耳根部,右手持連有4號

針頭的注射器,順血管平行方向刺入靜脈,進(jìn)針約1cm,如有血液回流,

即可進(jìn)行注射。注射完畢,拔出針頭,用棉球壓迫止血。

3.9兔的采血:耳緣靜脈采血法:采血方法同兔耳緣靜脈注射法。

3.10兔的處死:

空氣栓塞法:從兔的靜脈內(nèi)注入一定量的空氣,使之發(fā)生空氣栓塞。

3.11兔的解剖:觀察器官:脾臟、小腸和大腸、肝臟、膽囊、胃、十二指腸和胰

腺、腎上腺、腎臟、膀胱、睪丸、附睪或子宮、卵巢、肝臟、心臟、甲狀腺、腦、

垂體。

4.實驗討論

4.1豚鼠生性膽小,不咬人,抓時不能太粗野,更不能用力抓腰腹,否則容易造成肝破

裂而引起死亡。

4.2家兔比較馴服,不咬人,但爪尖利,不正確的抓取容易被其抓傷。抓取時不要抓其

兩耳,也不要托拉四肢或提握腰部。根據(jù)實驗需要進(jìn)行固定,如需耳靜脈采血、注

射時,可用兔盒固定;如要測量血壓、呼吸等實驗和手術(shù)時,可將兔固定在兔手術(shù)

固定臺上。

4.3室溫較高時,雄性豚鼠的睪丸會從腹腔降到陰囊內(nèi),此時易于區(qū)別。

4.4兔耳緣靜脈采血法,每次采血量為1.0~

5.0mL。由于兔的體型較大,心臟采血較豚

鼠容易,一次采取全血量的1/6~1/5,一周后可重復(fù)采血。如采血致死,可采

50~100mL。

4.5使用空氣栓塞法,兔需要20~40mL空氣。本法方法簡單、迅速,但由于動物死于急

性循環(huán)衰竭,各臟器凝血十分明顯。

4.6解剖時可發(fā)現(xiàn),豚鼠的腸道長度為體長的10倍,盲腸特別發(fā)達(dá),占腹腔容積的1/3。

兔的盲腸比例亦大,回腸和盲腸相接處膨大形成一個厚壁的圓囊,稱為圓小囊,實

質(zhì)為淋巴球囊,為兔所特有。雌兔有2個完全分離的子宮。兔頸部有減壓神經(jīng)獨力

分支。

左圖為豚鼠翻開腸道后暴露腹膜后器官,可見雙條形的子宮。

右圖為兔圓小囊結(jié)構(gòu),位于回結(jié)腸交界處。

5.實驗感受:

實驗動物的基本操作是科研操作的基本技術(shù),熟練掌握各種動物手術(shù)對于完成科研任務(wù)有重要的作用。

實驗四大鼠實驗的基本操作

一、實驗?zāi)康?/p>

通過實際操作,掌握大鼠的一般操作方法,包括大鼠的抓取和固定、性別鑒定、編號、去毛、給藥、采血、麻醉、處死。

二、實驗步驟

1、抓取和固定

2、性別鑒定

3、編號(染色法

4、去毛(剪毛

5、給藥:消化道、腹腔注射、尾靜脈注射

6、采血:眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法

7、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉

8、處死:脊椎脫臼法、過量麻醉

9、解剖:

9.1生殖系統(tǒng):

9.1.1雄性:睪丸、附睪、輸精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,膠質(zhì)狀,透明

9.1.2雌性:雙角子宮、卵巢

9.2腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺

三、實驗結(jié)果

1、抓取和固定:左手抓住大鼠的尾根部,右手的食指和無名指卡住大鼠頭部兩側(cè),右手的拇指和食指同時捏住大鼠的左上肢。或一手一把抓住頭部兩側(cè)及雙上肢根部

2、性別鑒定(同小鼠:觀察肛門與生殖器間的距離和二者之間的毛發(fā):

2.1雄性:距離長,毛發(fā)密(和其他部位一樣

2.2雌性:距離短,毛發(fā)稀疏

3、編號:

3.1染色法(最常用:

3.1.1用苦味酸(黃色在大鼠背面染色

3.1.2逆毛發(fā)生長方向染色,自毛根開始

3.1.3因為大鼠體形大,一般一籠內(nèi)養(yǎng)1~5只,1~5號編號同小鼠(實驗一所示,

3.2同時結(jié)合籠子的編號加以區(qū)別

4、去毛:

4.1剃毛:可用電動剃須刀剔除大鼠毛發(fā)

4.2剪毛:剪毛之前先用酒精濕潤

5、給藥:

采用灌胃法:左手抓取小鼠固定后,雙下肢及尾部另請一人協(xié)助。右手持特制灌胃針,沿一側(cè)口角進(jìn)針,緊貼咽后壁,頭后仰以便伸直消化道,順利進(jìn)針后灌生理鹽水0.5ml

6、注射:

6.1腹腔注射:

6.1.1妥善固定大鼠后,從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針

6.1.2進(jìn)針時針與腹部成45°,進(jìn)針后稍微晃動針并回抽,如無粘滯感且沒有回血

則可注射藥物

6.2肌肉注射:大鼠下肢肌肉發(fā)達(dá),可在大腿外側(cè)進(jìn)行肌肉注射

6.3尾靜脈注射:一人固定大鼠,另一人用左手中指和拇指將尾拉直,食指托住尾部,

消毒后右手持帶4號針頭的注射器在圖示A(背面,實為動脈位置進(jìn)針注射0.5ml生理鹽水。注射完畢拔出針頭,用無菌棉球壓迫止血。尾動脈細(xì)小,且貼近皮膚,注射難度較大。

大鼠尾靜脈切面圖

7、采血:

7.1眼眶后靜脈叢:從眼角外下方或前下方進(jìn)針,然后立即拔針,用自制毛細(xì)管取血。

7.2眼球摘除法:未嘗試

7.3尾靜脈采血:按摩大鼠尾部使靜脈充盈,用注射針頭刺破血管后,擠壓尾部取血,

血量較少,僅采集到一滴。

8、麻醉:

0.5%氯胺酮腹腔麻醉:本雌性大鼠重350g,按100mg/kg的藥量給藥,10分鐘麻醉成功9、處死:

9.1脊椎脫臼法:按住頭部,將尾根部向后上方以短促的較大的力量拉即可致死

9.2過量麻醉:追加0.5%氯胺酮過量(2ml腹腔麻醉

10、解剖:

10.1顱部:

10.1.1視交叉:將大鼠過量麻醉致死后,剪開顱頂部皮膚,暴露顱骨,用鑷子咬

除顱頂部骨,充分暴露大腦半球。用鑷子從額部將腦組織翻至枕后,可見位于顱底

的視交叉、視神經(jīng)和視束(白色纖維

10.1.2垂體:夾斷視神經(jīng),充分暴露顱底,可見位于垂體窩中的垂體,色白,米

粒大小。

10.2頸部:

甲狀腺:緊貼環(huán)狀軟骨,較小鼠明顯。

10.3腹部:

10.3.1腎上腺:米粒大小

10.3.2胰腺:位于胃下方,類似于脂肪組織,渾濁狀

10.3.3膽囊:缺如

10.3.4睪丸:大鼠睪丸體積較大

10.3.5子宮:子宮為雙角型,雙側(cè)卵巢被大量脂肪組織所包裹

11、稱重:

四、實驗討論

1、抓取和固定:

(1大鼠牙齒和爪子銳利,個頭大,抓取時要小心,不要被其抓傷或咬傷。(2初學(xué)者為確保安全,可佩戴棉紗手套。(3提尾部時應(yīng)靠近尾根部提取,以防大鼠身體搖晃,或扭頭過來咬人。(4一手不容易固定時,可另請另一人協(xié)助操作。

2、性別鑒定:同小鼠。另外健康雄性大鼠的體重明顯超過同齡雌性大鼠4、編號:

(1常用苦味酸染色法,也可用專門打孔器進(jìn)行耳部打孔編號。

(2大鼠體形大,籠養(yǎng)數(shù)量有限,可結(jié)合染色和籠子編號以區(qū)別,方便實驗。5、給藥:采用灌胃法:

(1為最常用的給藥方法。(2待固定穩(wěn)當(dāng)后再進(jìn)針。

(2如進(jìn)針不順,須暫停操作,以免激若大鼠,妨礙實驗順利進(jìn)行。6、注射:

6.1腹腔注射:注意妥善固定,最好一人固定頭部和上肢,另請一人固定雙下肢和尾部,以免進(jìn)針時大鼠掙扎妨礙操作6.2肌肉注射:要選擇肌肉豐滿耳無大血管通過的大腿外側(cè)進(jìn)針

6.3尾靜脈注射:尾靜脈鱗片厚,雖然肉眼可見血管,但成功率低,一般少用。

胃脾臟腎臟肺

肝臟睪丸心臟

雙角子宮

7、采血

尾靜脈采血:對動物損傷小,采血后感染率低,適用于大鼠的血糖監(jiān)測。

8、麻醉:對于不同個體,由于對麻醉藥的耐受性不同,在麻醉過程中應(yīng)隨時檢查動物的呼

吸和外周血液循環(huán)、心跳等反應(yīng),劑量不夠時可適當(dāng)加量

9、處死方法選擇原則:

(1盡量避免因處死方法不當(dāng)而造成病理損害,影響實驗結(jié)果

(2盡量使動物快速、安靜、無痛苦死亡

10、解剖:

(1顱部:大鼠視神經(jīng)發(fā)達(dá),很容易找到視交叉。

(2膽囊:缺如,這是與小鼠的不同之處。

實驗五大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立

實驗動物:SD大鼠1只(雌

【實驗?zāi)康摹?/p>

1.通過實際操作掌握大鼠陰道涂片的制作方法和性周期觀察。

2.通過實驗掌握大鼠急性肺水腫模型的建立,了解誘發(fā)型動物模型的制作方法。

【實驗步驟】

一、大鼠性周期觀察

1、固定大鼠:左手抓取大鼠,食指和中指卡緊大鼠頸部,拇指和無名指握住胸部,小指固

定腹部,右手拉住尾部和雙下肢,稍用力后拉,充分暴露雌鼠的陰部。

2、采集陰道分泌液、涂片:另一人用滴管吸生理鹽水2滴,插入大鼠陰道深部,沖洗3次,

吸出沖洗液,分別滴1滴在兩個載玻片上,用第3塊玻片推片,自然晾干(10分鐘。

3、染色和鏡檢:用姬姆薩染液染色30分鐘,細(xì)流水小心沖洗,然后在顯微鏡下觀察。

二、大鼠急性肺水腫模型的建立

1、氯化銨腹腔注射:按上述方法固定大鼠后,抽取6%氯化銨3.5ml(本大鼠重量360g,按

1ml/100g藥量,從左側(cè)下腹部進(jìn)針,無粘滯感后注射氯化銨。8分鐘后僅見大鼠活動減少無其他異常改變,又追加6%氯化銨0.5ml

2、尸體解剖:大鼠出現(xiàn)興奮、肌肉震顫,繼而死亡后立即尸體解剖,直接打開胸腔,結(jié)扎

氣管交叉稍上方,自結(jié)扎處上方剪斷氣管,游離周圍組織和心臟,取出肺臟,觀察形態(tài)學(xué)改變,并在臺式稱上稱重。

3、計算肺重量系數(shù)=肺臟重量(g/大鼠體重(g×100%。

【實驗結(jié)果】

一、大鼠性周期觀察

陰道脫落細(xì)胞涂片、染色、鏡檢:

顯微鏡下看到大鼠發(fā)情間期的部分改變:有核細(xì)胞和少量上

皮細(xì)胞,也看到少量白細(xì)胞。右圖所示為20×顯微鏡下觀察到的

情況。

二、大鼠急性肺水腫模型的建立

1.腹腔注射6%氯化銨3.5ml后大鼠的活動明顯減少,呼吸急促,出現(xiàn)肌無力,靜俯于桌上。

20分鐘后首先出現(xiàn)張口呼吸,點頭樣呼吸,口唇紫紺,鼻翼煽動,約15秒鐘后出現(xiàn)肌肉震顫,持續(xù)約30s,然后發(fā)生抽搐、昏迷,最后死于呼吸衰竭。如下圖所示。

2.尸體解剖:肺腫脹,包膜緊張,大部分肺表面出現(xiàn)暗紅色斑塊,切開有少量紅色泡沫樣

液體流出;胸腔內(nèi)有液體積聚,如下圖。

3.將氣管結(jié)扎后,稱取全肺質(zhì)量,為

4.3g,實驗前稱取大鼠質(zhì)量為385g

則本實驗中,

肺重量系數(shù)=肺臟重量(g/大鼠體重(g×100%=4.3g/385g×100%=1.11%>1%【實驗討論】

1.大鼠性周期觀察

a大鼠性周期為4~5天,由于大鼠有晝伏夜行的習(xí)性,一般在下午不能看到大鼠的

發(fā)情期。本大鼠處于發(fā)情間期

b大鼠的陰栓一般在24小時后脫落。所以觀察期間籠具必須保持整潔,不能放置刨

木花?？吹疥幩ㄕf明交配成功,受孕率為70~80%。

c大鼠春秋兩季的受孕率較夏冬兩季高。

d大鼠性周期陰道脫落細(xì)胞變化情況如下表所示

表1大鼠性周期陰道脫落細(xì)胞變化情況

2.大鼠急性肺水腫模型的建立

2.1按提供的氯化銨劑量(8ml/kg體重,即3ml腹腔注射后,大鼠未及時出現(xiàn)呼吸

運動改變,可能原因:

2.1.1稱重欠準(zhǔn)確;

2.1.2藥品濃度未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)濃度;

2.1.3個體對藥物的反應(yīng)有差異。

可結(jié)合具體情況適量追加,實驗中追加了0.5mlNH4Cl,很快就觀察到了呼吸急促、抽搐等現(xiàn)象。

2.2注射氯化銨前大鼠呼吸、運動均正常。注射足量氯化銨20分鐘后大鼠出現(xiàn)典型的

呼吸、運動改變。尸體解剖后肺臟也出現(xiàn)典型的肺水腫表現(xiàn),肺重量系數(shù)也達(dá)到肺水腫的標(biāo)準(zhǔn),實驗成功,對比其它小組的實驗結(jié)果,總結(jié)幾點經(jīng)驗:

2.2.1本組大鼠出現(xiàn)呼吸改變反應(yīng)的時間相對其它小組長,可能是引起肺水腫較顯著的原

因,因其呼吸、循環(huán)衰竭時間較長,病理改變較為明顯;

2.2.2解剖時,本組在氣管位置即結(jié)扎,減少了一部分如氣管的泡沫狀液體的丟失;

2.2.3解剖較為及時,在其死亡后第一時間即開胸去肺;另外操作時也未將肺損壞,標(biāo)本

較為完整。

2.3氯化銨導(dǎo)致大鼠急性肺水腫的機(jī)制可能為

2.3.1氯化銨進(jìn)入體內(nèi)破壞了體液平衡,使得肺泡比毛細(xì)血管通透性增加,致肺泡壁氣-

血、氣-液屏障破壞,大量漿液滲向肺間質(zhì)及肺泡

2.3.2氨是神經(jīng)毒性物質(zhì),高濃度的氨與三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物結(jié)合,導(dǎo)致其無法正常運轉(zhuǎn),

ATP生成收到嚴(yán)重阻礙,腦功能受損,從而引起大腦皮層功能抑制,皮層中樞興

奮性增高,引起機(jī)體抽搐,同時心肌收縮力加強(qiáng)、心率加快、心肌耗氧量增加,

使得皮膚、黏膜及內(nèi)臟小血管收縮,導(dǎo)致體循環(huán)血管和肺血管劇烈收縮使得心臟

后負(fù)荷明顯增加,打破Starling定律平衡引起動力性水腫。

實驗六小鼠無菌取胎術(shù)、

實驗動物:KM小鼠1只(懷孕15天后一、實驗?zāi)康?

通過示教了解無菌取胎術(shù)培育無菌小鼠的基本原理和操作步驟。二、實驗步驟:

1.無菌待乳鼠準(zhǔn)備(省略

2.剖腹鼠的準(zhǔn)備:清潔級小鼠,預(yù)產(chǎn)期前1天(本實驗估計在預(yù)產(chǎn)期前1周內(nèi)進(jìn)行手術(shù)

3.無菌取胎術(shù)

3.1用頸椎脫臼法將孕鼠處死。

3.2將孕鼠仰臥位固定,用剪刀沿腹中線剪開腹部皮膚、腹肌和腹