關于植物組織培養(yǎng)技術流程第1頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四§1實驗室儀器設備

第2頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四第3頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四§2實驗基本操作一、母液的配制1.MS母液的配制2.激素母液的配制大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、鐵鹽(100倍)、有機元素(100倍)

6-BA、KT、ZT等濃度為0.5mg/ml；NAA濃度為0.1mg/ml第4頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四二、培養(yǎng)基的配制與滅菌

MS+6-BA2mg/L+瓊脂粉5.5mg/L+糖30mg/LpH6.01L

適用于各種器皿、培養(yǎng)基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。121℃維持20～30min

注意點：加足水、排盡氣、氣壓降到0時，才能開蓋。1.培養(yǎng)基配制2.培養(yǎng)基滅菌第5頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四三、外植體的消毒與無菌操作消毒劑使用濃度(%)消毒時間(min.)效果殘液去除難易乙醇70-750.1-3好易新潔爾滅10～205～30好易氯化汞0.1～12～15最好最難過氧化氫10～125～15較好最易抗菌素4～50mgl-130～60較好較難次氯酸鈣/納9～105～30好易1.外植體消毒第6頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四正

確

錯

誤取流水沖洗（至少5min）過的外植體，用一定的消毒劑浸泡消毒，用無菌水沖洗3-4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，用無菌的接種器械進行分離、切割或其他處理。第7頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四

1、用75%的酒精噴灑超凈工作臺。

2、打開室內(nèi)及超凈工作臺用紫外燈、無菌風及刀剪鑷殺菌20min-30min。注意：臺面上的用品不要放置太多或重疊放置，以免降低滅菌效果。

3、關空間紫外燈，過5-10min進入緩沖間，以75%洗手和手臂，進入接種臺。

4、關閉超凈臺紫外燈，打開照明燈。

5、試驗操作。

6、完畢后關閉照明燈、刀剪鑷、無菌風開關。

7、收拾無菌紙、材料瓶等。。2.無菌操作第8頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四注意（1）進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。（2）不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要重新消毒。（3）為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)。（4）工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復使用，應立即封閉瓶口，直立可增加落菌機會。第9頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四接種莖段：注意形態(tài)學下端插入培養(yǎng)基內(nèi)，而形態(tài)學上端露于空氣中

正

確

錯

誤第10頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四§3.植物組織培養(yǎng)流程路線一第11頁，共14頁，2023年，2月20日，星期四路線二第12頁，共14頁，2