甘露聚糖肽一甘露聚糖肽發(fā)現(xiàn)甘露聚糖肽(Mannatide),曾用名多抗甲素(PolyactinA,PAA)。是我國首創(chuàng)的一種新型免疫增強劑，是從健康人口腔分離的一株a-溶血性鏈球菌(a-hemolyticStreptococcui)33#菌株經深層培養(yǎng),發(fā)酵提取而得到的一種具有免疫活性和抗腫瘤作用的多糖類物質。它是由原西安醫(yī)科大學方亮教授在克山病的研究中發(fā)現(xiàn)的,于1976年從鏈球菌的代謝產物中提取的多糖類物質,初步試驗有抗腫瘤作用,臨床預期有一定效果。1976年國家醫(yī)藥管理局安排四川抗菌素研究所，在方亮教授的指導下和初步工作的基礎上，開展了菌種篩選獲得了a—甘露聚糖肽產生菌33#菌株,并對菌種生理生化特性、血清型分類、深層培養(yǎng)和提取工藝、理化特性、化學組成、毒性和藥理用量標準等方面進行了系統(tǒng)的研究、試驗。二甘露聚糖肽的化學構造及理化特性a—甘露聚糖肽的化學結構式如下：分子量為71,700kD,是具有一定均一性的混合物，不存在單糖、雙糖等小分子糖類和游離氨基酸，完全由不同鏈長的甘露聚糖肽分子構成。a—甘露聚糖肽的總糖含量為87.7?90.3%，主要為甘露糖以及少量的葡萄糖殘基，二者之比約為39:1；蛋白質含量為4.5?6.2％主要的構成氨基酸為天門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸和亮氨酸，其比例為1：2：2：1：1：1；此外還有少量的甘氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、精氨酸等。甘露聚糖以B-(1-4)鍵連接組成甘露聚糖肽的糖主鏈且甘露聚糖肽的糖鏈還存在1-6、1-2等支鏈結合方式和還原末端。甘露聚糖肽中糖鏈與肽鏈的連接有兩種方式N-糖苷鍵連接和0-糖苷鍵連接。在0-糖苷鍵連接的結構中，主要是糖鏈還原末端的甘露糖基，以糖苷鍵形式通過肽鍵上的羥基氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸、羥脯氨酸或羥賴氨酸)的羥基氧與甘露聚糖連接，組成聚糖肽。N-糖苷鍵連接的結構中，糖鏈還原末端可以與肽鏈中的賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸的氨基連接。a—甘露聚糖肽為類白色或微黃色無定形粉末、無臭、無味；易溶于水，不溶于有機溶劑如甲醇、乙醇、丙醇、乙醚、氯仿、正己烷等；化學性質穩(wěn)定。三a—甘露聚糖肽的生物活性由于a—甘露聚糖肽中的寡糖和氨基酸殘基數(shù)變動很大，再加上其復雜的殘基連接方式，使得a—甘露聚糖肽具有明顯的免疫活性。當a—甘露聚糖肽通過凝集素與巨噬細胞上的受體結合后，巨噬細胞被激活，增強網狀內皮系統(tǒng)(RES)吞噬活性，能刺激脾臟淋巴細胞增生，能直接作用于中樞免疫器官胸腺，并能誘導機體產生一系列的細胞免疫和體液免疫反應，增強動物體的非特異性免疫功能，提高各類動物對一般疾病和各種病原性細菌、病毒等的抵抗力，能最大限度地減少各種疾病和細菌病毒對動物的不利影響。⑵.a—甘露聚糖肽能促進免疫細胞活化增殖及特異抗體生成，提高外周血白細胞數(shù)，顯著增強動物對各種環(huán)境的應激機能。⑶.a—甘露聚糖肽能很好的治療動物各種原因所致的再生障礙性貧血，促進造血干細胞生長。⑷.a—甘露聚糖肽能增強粘膜免疫系統(tǒng)修復防御功能，顯著提高粘膜系統(tǒng)創(chuàng)傷修復能力，改善粘膜免疫系統(tǒng)調節(jié)功能。⑸?具有特殊的抗菌效果，吸附并抑制腸道內病原菌群定植和生長，促進腸道內有益菌增殖。⑹.a—甘露聚糖肽具有抑制腫瘤細胞生長與代謝的作用。⑺?對動物的關節(jié)腫有明顯的治療效果。四a—甘露聚糖肽的作用機理a—甘露聚糖肽進入消化道后，被消化酶分解為甘露聚糖(低聚甘露糖)和堿性多肽兩部分，而甘露聚糖經相應酶的不完全水解產生甘露寡糖(MOS)，通過這幾種生物活性物質而發(fā)生作用。甘露聚糖(低聚甘露寡糖)的功能吸附病原菌甘露聚糖吸附病原菌研究結果發(fā)現(xiàn)于1980年末所做的甘露聚糖抑制肉雞沙門氏菌感染能力的研究。當大腸桿菌或沙門氏菌與低聚甘露糖一起培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)凝集現(xiàn)象，干擾了腸道病原菌的定植，從而打斷了病原菌附著—繁殖-致病的途徑，并攜帶病原菌排出體外。原因是寡聚糖與病原菌產生外源凝集素結合，防止微生物在胃腸道上皮的附著。凝聚素與糖分子的結合具有高度的特異性。2?為有益菌提供營養(yǎng)MOS因其特有的糖苷鍵(a—1,4糖苷鍵)不能被動物消化酶消化利用，腸道內的有益菌(雙歧桿菌和乳酸菌)卻能很好利用MOS而能大量繁殖；相反，大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌則不能利用MOS,使其饑餓而死。Yasuis(1992)試驗證實，某些雙歧桿菌可以誘導分泌免疫球蛋白A的分泌。3?調節(jié)免疫機能甘露聚糖分子中含有磷酸成分。研究表明甘露聚糖中的磷酸含量較高時，對結合病原菌是不利的，但對免疫調節(jié)功能則是重要的。試驗證明低聚甘露糖對巨嗜細胞和單核細胞有積極影響，增強其吞噬作用；提高血清中溶菌酶水平；刺激腫瘤壞死因子(TNF)、白細胞介素(IL)、干擾素(IFN)和一氧化氮(NO)水平升高。TNF能抑制腫瘤細胞；IL和IFN是具有免疫活性的內源性肽，兩者都可以激活或調節(jié)免疫應答中心；NO由巨嗜細胞產生，而NO具有直接殺傷腫瘤細胞的作用。4?結合霉菌毒素霉菌毒素由需氧菌產生，是動物營養(yǎng)的最大挑戰(zhàn)之一，而酯代葡甘露聚糖(Esterifiedglucomannas)是一種較好的霉菌素結合劑。Diaz[140]在奶牛精料混合物中添加500g/t的甘露聚糖可以使奶中的黃曲霉素水平下降，從而減少霉菌素對人和動物的毒副作用降低霉菌素的免疫抑制作用。5?改善營養(yǎng)物質的消化吸收MOS通過發(fā)酵產生短鏈脂肪酸，降低pH值，抑制有害菌生長，同時也刺激消化道的蠕動，而且通過微生物區(qū)系的改變而改變腸道形態(tài)(腸絨毛高度、腺窩深度)，更加有利于營養(yǎng)物質的消化吸收。Newman等報道，在1?35日齡犢牛的奶中添加MOS時，生長速度提高8%,采食量提高10%。堿性多肽的功能肽不僅是機體蛋白質代謝的底物，而且還具有其他重要的生物學作用。堿性多肽能作用于革蘭氏陽性菌的細胞成份一一肽聚糖，切斷連接N—乙酰葡胺和N—乙酰胞壁酸的聚糖鏈，喪失其堅韌性，使細菌發(fā)生低滲透型的裂解，從而殺傷細菌。肽還有促進巨嗜細胞的吞噬作用，促進淋巴細胞和脾細胞的增殖作用，從而增強機體免疫力。由于多抗甲素具有很廣的應用前景，對其藥理和臨床研究力度在最近6、7年得到加強，并取得了突破性進展，對原先觀察到的功能進行了機制上的進一步解釋，主要包括以下6個方面。調整巨噬細胞功能劉曉波網等的研究結果表明，多抗甲素能增強在淀粉或硫代乙醇酸鈉刺激下獲得免疫應答能力而表達吞噬功能的小鼠巨噬細胞的吞噬功能，且表現(xiàn)出濃度依賴性(0.5mg/L)。如誘導T細胞和B細胞的功能活化，增加天然殺傷細胞(NK)功能活性，因而表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤作用。最近的研究還發(fā)現(xiàn)，多抗甲素可以誘導小鼠巨噬細胞產生一氧化氮(NO)。生理狀態(tài)下，巨噬細胞產生的NO可以起到免疫調節(jié)的作用，在一些誘導劑作用下，巨噬細胞則可產生大量的NO,并對外源性抗原及腫瘤細胞等起到殺傷作用。向大鼠腹腔內注射a—甘露聚糖肽2天后，其腹腔內巨噬細胞數(shù)量、乳酸脫氫酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)的活性、吞噬活力、NO的分泌以及細胞毒性均隨著甘露聚糖肽劑量的增加而增加,同時大網膜乳斑的數(shù)量和面積也顯著增加。表明腹腔內注射甘露聚糖肽增強了腹腔巨噬細胞的免疫功能。對人天然殺傷細胞活性的作用天然殺傷細胞在體內可抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移，是機體執(zhí)行免疫監(jiān)視功能的重要效應細胞。惡性腫瘤患者天然殺傷細胞的活性降低可能是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的重要因素之一。強文安等應用單細胞細胞毒試驗及形態(tài)學觀察的方法，研究了多抗甲素對人體天然傷細胞的作用機制。結果表明，多抗甲素能增強食道癌患者淋巴細胞明顯低下的結合率和殺傷率。由于多抗甲素能增加人外周血淋巴細胞IL-2的生長和適應性，而IL-2和干擾素洲又能通過直接激活與靶細胞結合。經多抗甲素預處理的效應細胞似無促進天然殺傷細胞與靶細胞的結合，但可能促進了未成熟天然殺傷細胞釋放淋巴細胞顆?；蚰撤N可溶性細胞溶解因子，使靶細胞遭受致死性損傷，導致溶解。對人淋巴細胞免疫功能的影響在應用多抗甲素治療后，細胞免疫功能迅速改善，3H-胸甘及14C-尿甘的參入計數(shù)明顯高于治療前，表明多抗甲素改善和調節(jié)了腫瘤病人淋巴細胞的免疫功能。另外，隨著多抗甲素劑量的增加，淋巴細胞的參入計數(shù)也相應的增加，在多抗甲素劑量為10mg/L時，3H-胸甘及14C-尿甘的參入計數(shù)達到最高值；而當多抗甲素劑量增至50?100mg/L時，3H-胸甘及14C-尿甘的參入計數(shù)明顯低于對照組;在劑量為50mg/L時，刺激作用減小;當劑量增至100mg/L時，其對淋巴細胞DNA及RNA的合成功能呈現(xiàn)抑制作用。對淋巴因子活化的殺傷細胞增殖抑制及殺傷活性的影響淋巴因子活化的殺傷細胞(LAK)/IL-2療法是一種有效的腫瘤生物治療方法，對某些類型的腫瘤有良好的療效，但是需要相當數(shù)量的效應細胞輔以大劑量的IL-2,代價昂貴，不良反應大，因而其推廣受到限制。由于多抗甲素成本相對較低，又無明顯不良反應，本身又是一種生物反應調節(jié)劑，因此臨床上可望將多抗甲素與LAK/IL-2療法聯(lián)合應用，以降低IL-2的服用量并減少其不良反應。增強特異性細胞毒T細胞活性體外研究發(fā)現(xiàn)，用多抗甲素共育外周血單個核細胞可增強其天然殺傷性細胞活性和巨噬細胞的細胞毒性價。最近的研究發(fā)現(xiàn)用多抗乙素治療S180肉瘤荷瘤小鼠后，其腫瘤特異性細胞毒性可明顯增強，而對天然殺傷性細胞敏感細胞株K562的殺傷活性則無明顯的增強。這可能是由于多抗乙素增強了荷瘤小鼠的細胞免疫而使腫瘤生長緩慢所致。有關特異性細胞毒T細胞的活化可能來自于巨噬細胞和天然殺傷性細胞產生的IL-1、干擾素、腫瘤壞死因子等細胞活性物質或細胞間的直接作用。這些細胞活化后，其抑制和殺傷腫瘤作用可進一步放大增強。對動物紅細胞變性能力和免疫功能的影響腫瘤血行性轉移是一個非常復雜的過程，影響腫瘤轉移的因素也比較多，目前研究認為主要與機體血凝狀態(tài)私免疫功能等因素有關。Holm等認為血小板聚集受血栓素A2-前列腺環(huán)素的比例所控制，提示多抗甲素可能與通過影響血栓素A2/前列腺環(huán)素比值而抑制腫瘤轉移的可能性較小側。另一方面,siegel也曾推測紅細胞在阻止癌細胞血行性轉移方面有重要作用，可通過C3b受體粘附己激活的粘附補體的腫瘤細胞，從而增強吞噬細胞的吞噬、降解作用，防止癌細胞的血行性轉移。實驗證明，多抗甲素可使荷瘤小鼠紅細胞免疫功能全面上升。唐玉等卿的研究還發(fā)現(xiàn)多抗甲素可加速紅細胞的濾過速度，改善紅細胞的變形能力，降低血液粘稠度，促進動脈粥樣硬化等疾病的痊愈。甘露聚糖肽通過以下三種方式增強腹腔巨噬細胞殺傷癌細胞作用:誘導大量巨噬細胞進入腹腔;增強這些細胞的吞噬、清除能力;增強巨噬細胞的非接觸性細胞殺傷性。甘露聚糖肽能夠激活巨噬細胞,并誘導機體產生一系列細胞免疫和體液免疫反應,增強動物體的非特異性免疫功能,提高各類動物對一般疾病和各種病原性細菌、病毒等的抵抗力,最大限度地減少各種疾病和細菌、病毒對動物的不利影響。甘露聚糖肽能顯著增強動物對各種環(huán)境的應激機能。食用甘露聚糖肽后,在惡劣的環(huán)境刺激下能顯著增加腎上腺中維生素C（VC）含量，使肝糖元增加，而SGPT顯著降低，從而使動物在高溫和低溫下都能很好地保持正常的生理水平,最大限度地減少惡劣環(huán)境對動物的負面影響而正?？焖俚厣L;甘露聚糖肽具有特殊的抗菌效果,能吸附并抑制腸道內病原菌群定植和生長,促進腸道內有益菌增殖;甘露聚糖肽對動物的關節(jié)腫大也有明顯的治療效果,在動物試驗中可明顯減輕蛋清法引起的急性關節(jié)腫和甲醛引起的亞急性關節(jié)腫,治療效果比高劑量水楊酸注射治療更明顯。五a—甘露聚糖肽的生物合成5．1菌種:甲型溶血性鏈球菌33#株5.2將凍干管的菌種接入試管液體培養(yǎng)基中，在30°C下，培養(yǎng)18~24h,經無菌考查和形態(tài)學鑒定合格后再接入新鮮肉湯培養(yǎng)基試管中,30C培養(yǎng)18~24h,反復兩次。挑選生長旺盛、活力強、形態(tài)特征等符合要求的菌種,冰箱保存。5.3將優(yōu)良的試管液體菌種,按0.2%的接種量在無菌條件下接入搖瓶培養(yǎng)基中,靜置37C下,培養(yǎng)24h,鏡檢,長勢良好,無雜菌。5.4按0.2%的接種量在無菌條件下接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，靜置37C下，培養(yǎng)65~70h。鏡檢,染色開始變淺,盤繞球鏈開始部分斷裂,還原糖、氨基氮消耗將盡時,水浴80C30min滅活。5.5最適合菌株產甘露聚糖肽的培養(yǎng)基配方為葡萄糖15%、蛋白胨3%、酵母膏7%、氯化鈉5%、pH7.2。接種量2%,37C靜置培養(yǎng)65~70h,發(fā)酵液中甘露聚糖肽的含量可達到90mg/100mL,提高了甘露聚糖肽產物的得率,達到了優(yōu)化培養(yǎng)基目的。在培養(yǎng)過程中，酵母膏影響最大,葡萄糖其次,而蛋白胨影響最小。六a—甘露聚糖肽生產企業(yè)原料藥生產廠家：上海金宇生物科技內鄉(xiāng)制藥有限公司（批準日期：2010-10-26）（9家）成都利爾藥業(yè)有限公司（批準日期：2010-4-21）國藥集團川抗制藥有限公司（批準日期：2009-12-14）浙江瑞幫藥業(yè)有限公司（批準日期：2003-3-25）廣東宏遠集團藥業(yè)有限公司（批準日期：2002-12-16）西安交大瑞鑫藥業(yè)有限公司（批準日期：2002-10-16）西安亨通光華制藥有限公司（批準日期：2002-09-13）齊魯制藥有限公司（批準日期：2002-07-10）龍泉市辰龍藥業(yè)有限公司（批準日期：2002-07-10）資料來自國家食品藥品監(jiān)督管理局（2011-6-13）成都利爾藥業(yè)有限公司企業(yè)簡介成都利爾藥業(yè)有限公司主要產品有國內首創(chuàng)的新型免疫增強藥a-甘露聚糖肽（多抗甲素）系列產品及高科技微生態(tài)制劑促菌生片等，共有醫(yī)用原料藥、注射液、口服液、片劑、膠囊劑、顆粒劑、酊劑等七大類數(shù)十個品種。特別是甘露聚糖肽系列產品為全國獨家首創(chuàng)，繼85年與抗菌素工業(yè)研究所共同申請到原料藥和針劑產品的生產批文后，又陸續(xù)研制開發(fā)出片劑、口服液、膠囊三種劑型，到目前為止，甘露聚糖肽是我公司在全國唯一生產的廠家。七a—甘露聚糖肽原料藥價格2000元/公斤含量三80%。八a—甘露聚糖肽臨床使用療效81a—甘露聚糖肽對鯽魚生長性能影響以0.75—3.00mg/kg為測定最佳使用劑量的范圍，其中，以1.50mg/kg組和3.00mg/kg組為最好效果，但這兩組間整體看來并未呈現(xiàn)明顯差異性。因此，在實際生產中以1.50mg/kg投喂劑量為最佳。其應用后，鯽魚血紅蛋白、紅細胞數(shù)、血清凝集抗體效價、SOD活性、吞噬活性和殺菌活性都顯著增強。1.50mg/kg的最佳使用劑量的情況下，投喂21d為最佳投喂周期。8．2a—甘露聚糖肽對豬生長性能影響8．2．1實驗一動物：“杜長大”三元雜交斷奶仔豬添加量：a一甘露聚糖肽在飼糧中添加0.10%(A)和0.15%(B)實驗結果：A組和B組與對照組比較：成活率和日增重分別提高了8.34%(P<0.05)和8.34%(P<0.05)、7.69%(P<.005)和9.32%(P<0.01)；料重比和腹瀉率分別降低了6.87%(P<0.05)和6.87%(P<0.05)、32.65%(P<0.01)和33.92%(P<0.01)A組和B組結腸菌群和消化機能方面與對照組相比：結腸中雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)分別增加了299.49%(P<01)和314.81%(P<0.01),97.40%(P<0.05)和141.67%(P<0.05)；結腸內容物pH值分別降低了0.50(P<0.05)和0.90個單位(p<0.01)；結腸中大腸桿菌以及梭菌數(shù)分別下降了86%(P<0.01)和82.47%(P<0.01)以及98.53%(P<0.01)和94.66%(P<0.01)；空腸絨毛高度分別提高了32.20%(P<.001)和29.85%(P<0.01);腺窩深度分別降低了1.682%(P<0.05)和19.20%(P<0.05);十二指腸內容物中總蛋白水解酶、胰蛋白酶、淀粉酶活性分別提高了 65.05%(P<0.05)和79.84%(P<0.01)、66.00%(P<0.01)和52.24%(P<0.01)、33.06%(P<0.05)和42.34%(P<0.01)；粗蛋白的表觀消化率分別提高了6.29%(P<0.05)和5.41%(P<0.05)。所以，a一甘露聚糖膚顯著改善了腸道微生態(tài)環(huán)境和促進腸道發(fā)育，增強了十二指腸消化酶的分泌，提高了小腸中蛋白質的消化率。A組和B組免疫力方面與對照組相比：血清中IgG分別提高了23.35%(P<0.01)和25.18%(p<0.01)；IgA分別提高了52.75%(p<0.01)和71.43%(P<.001)；T淋巴細胞轉化率分別提高了55.41%(P<0.01)和80.41%(P<0.01)；所以，a一甘露聚糖膚可增強斷奶仔豬的體液免疫和細胞免疫功能。8．2．1實驗二動物：保育階段的40日齡小豬含量：a-甘露聚糖肽在飼料中的添加量為0.2%時間：喂養(yǎng)40天以上實驗結果：1.1 日增重比對照組提高59.46g(PV0.05);料肉比和發(fā)病率分別降低0.1