合成DNA的HPLC級(jí)純化流程設(shè)計(jì)方案_第1頁(yè)
合成DNA的HPLC級(jí)純化流程設(shè)計(jì)方案_第2頁(yè)
合成DNA的HPLC級(jí)純化流程設(shè)計(jì)方案_第3頁(yè)
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合成DNA的HPLC級(jí)純化流程設(shè)計(jì)方案_第5頁(yè)
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學(xué)合成和高效純化技術(shù)的最新進(jìn)展大大減少了以往寡核苷酸合成所需要的的時(shí)間和精力。三、所需儀器、用具及流動(dòng)相rr)(一)合成(二)粗樣前處理變)。樣品脫保護(hù)完從烘箱拿出，放冰盒冷卻，接近常溫后用移液槍將樣品從Tube中轉(zhuǎn)移至試管或雞心瓶(可加純水潤(rùn)洗Tube)。(三)修飾反應(yīng)(四)HPLC逆向分取(五)HPLCPA100色譜柱再分取(六)C18柱脫鹽濕樹(shù)脂，待注射器內(nèi)的甲醇接近流干，加水置換有機(jī)溶劑，待水快流干，加入TEAB置換(七)HPLCPA200色譜柱進(jìn)行純度檢測(cè)(八)樣品分裝品離子交換HPLC純化原理：依據(jù)分子(DNA)所帶負(fù)電荷的多少，利用梯度洗脫(分辨(一)前處理：1.60度以上脫保護(hù)的樣品從烘箱拿出來(lái)的時(shí)候要室溫放置一分鐘再轉(zhuǎn)入冰盒，防止2.注意有樹(shù)脂的樣品轉(zhuǎn)移時(shí)不要將過(guò)多的樹(shù)脂轉(zhuǎn)移至試管，以防蒸樣的時(shí)候暴沸。3.蒸樣時(shí)，不要將樣品直接放至水面，要將樣品先放至水面上方十厘米預(yù)熱。(二)修飾反應(yīng)光。2.修飾試藥需要提前將試藥從冰箱拿出室溫解凍。(三)HPLC分取的分取梯度，進(jìn)樣品之前儀器用該梯度平衡。2.吸樣品之前進(jìn)樣針要清洗到位，以防止上一個(gè)樣品殘留造成樣品混合。(四)C18脫鹽(五)分裝2.分裝量的確定及分裝體積，需要明確負(fù)責(zé)人，并且確認(rèn)體積。(一)1260開(kāi)機(jī)維護(hù)為流速的突然升高造成機(jī)器壓力過(guò)大。(二)1260使用維護(hù)譜柱一定要定期用水沖洗，將鹽分沖洗掉。(三)1260關(guān)機(jī)維護(hù)[1]王維.多肽與寡核苷酸偶聯(lián)純化方法及功能化寡核苷酸的應(yīng)用研究[D].湖南大學(xué),2016.[2]翁國(guó)鋒.基于質(zhì)譜技術(shù)的寡核苷酸分離分析方法研究[D].浙江大學(xué),2019.[3]柴梅梅.淺談高效液相色譜儀日常維護(hù)經(jīng)驗(yàn)[J].食品安全導(dǎo)刊,2020(27)

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