動物實驗操作第一頁，共六十七頁，2022年，8月28日大鼠生物學(xué)特性大鼠汗腺極不發(fā)達(dá)，僅在爪墊上有汗腺，尾巴是散熱器官。大鼠無嘔吐反應(yīng)，對許多藥物易產(chǎn)生耐藥性。對營養(yǎng)缺乏敏感，可發(fā)生典型的缺乏癥狀。大鼠無膽囊，膽汁通過總膽管進(jìn)入十二指腸。大鼠神經(jīng)系統(tǒng)與人類相似。第二頁，共六十七頁，2022年，8月28日動物實驗基本技能編號與標(biāo)記方法大鼠的抓取大鼠麻醉供試品給予方法采集體液大鼠的采血第三頁，共六十七頁，2022年，8月28日

一、編號與標(biāo)記方法染色法穿耳孔法標(biāo)牌法烙印法剪毛法第四頁，共六十七頁，2022年，8月28日

在每組動物不超過l0只或一個實驗不超過40只的情況下適用實驗動物：大鼠、小鼠染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色染色法：單色涂染法第五頁，共六十七頁，2022年，8月28日涂染原則：從左到右、從上到下左前肢為1號、左側(cè)腹部2號、左后肢3號，兩耳后部4號、背部5號、后肢背部6號，右前肢7號、右側(cè)腹部8號、右后肢9號頭部為40號、尾巴根為10號。方法步驟第六頁，共六十七頁，2022年，8月28日在每組動物不超過100只的情況下適用實驗動物：大鼠、小鼠常用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色，作為“個”位數(shù)常用染色劑：0.5%中性紅或品紅溶液，可染成紅色，作為“十”位數(shù)染色法：雙色涂染法第七頁，共六十七頁，2022年，8月28日用兩種顏色同時進(jìn)行染色標(biāo)記用苦味酸(黃色)染色標(biāo)記作為個位數(shù)，個位數(shù)的染色標(biāo)記方法同單色涂染法用品紅(紅色)染色標(biāo)記作為十位數(shù)方法步驟第八頁，共六十七頁，2022年，8月28日左前肢為10號、左側(cè)腹部20號、左后肢30號兩耳后部40號、背部50號、后肢背部60號右前肢70號、右側(cè)腹部80號、右后肢90號第100號不作染色標(biāo)記方法步驟第九頁，共六十七頁，2022年，8月28日穿耳孔法：用專用耳空器在動物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號碼的方法。原則是：左耳代表十位，右耳代表個位。實驗動物：兔、犬、豬標(biāo)牌法：一般掛在動物的頸部、耳朵、腳上。實驗動物：犬、猴烙印法剪毛法其它方法第十頁，共六十七頁，2022年，8月28日器材：大鼠飼養(yǎng)盒+面罩1套方法步驟：首先戴好防護(hù)手套用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定二、大鼠的抓取第十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日動物全身麻醉分四期：

第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運動與運動失調(diào)

第二期：不隨意興奮期，由意識完全喪失至規(guī)則的自動呼吸開始時止第三期：外科麻醉期

第四期：延髓麻醉期，進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過量

三、實驗動物麻醉第十二頁，共六十七頁，2022年，8月28日麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動物麻醉常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）麻醉方法與麻醉藥第十三頁，共六十七頁，2022年，8月28日種類戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑小鼠3550IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP--大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV豬<45kg>45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM常用麻醉藥劑量與注射途徑第十四頁，共六十七頁，2022年，8月28日麻醉前應(yīng)禁食8h以上麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重注意麻醉劑量麻醉過程中注意觀察動物的反應(yīng)情況注意保溫靜脈注射時必須緩慢，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動物體溫水平注意事項第十五頁，共六十七頁，2022年，8月28日原理：是使用非揮發(fā)性麻醉藥對動物進(jìn)行全麻術(shù)的方法器材：3％戊巴比妥鈉、注射器大鼠的麻醉第十六頁，共六十七頁，2022年，8月28日用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿刺針頭刺入皮下后進(jìn)針3mm左右，接著使注射針頭與皮膚呈45度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失固定針頭，保持針尖不動，回抽針?biāo)?，如無回血、腸液和尿液后即可注射藥液大鼠麻醉步驟第十七頁，共六十七頁，2022年，8月28日經(jīng)口給藥注射給藥

1.皮下注射給藥

2.皮內(nèi)注射給藥

3.肌肉注射給藥

4.靜脈注射給藥

5.腹腔注射給藥

四、供試品給予方法第十八頁，共六十七頁，2022年，8月28日自動口服給藥灌胃給藥:是借器械將藥物直接灌入動物胃內(nèi)的方法，此法可以準(zhǔn)確控制給藥量，但如果操作不當(dāng)易造成動物死亡經(jīng)口給藥第十九頁，共六十七頁，2022年，8月28日將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液操作前，大致量一下從口到胃的距離，估計灌胃針頭插入的深度左手捉持動物，使頭部向上；右手持針，把灌胃針頭的前端放進(jìn)動物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推，灌胃針會順著食管滑入動物的胃內(nèi)，此時沒有抵觸感用右手食指將針?biāo)聣海瑢⒆⑸淦髦械乃幰汗嗳雱游锏奈钢泄辔附o藥第二十頁，共六十七頁，2022年，8月28日劑量：小鼠約／10g體重，最大體積為1.0ml/只；大鼠約1-2ml／100g體重，最大體積為1.0ml/只注意：在灌胃過程中，避免誤插入氣管灌胃給藥第二十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日1.皮下注射給藥原理：將藥液注入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)器材：1m1注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球注射給藥第二十二頁，共六十七頁，2022年，8月28日注射部位：頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下常規(guī)消毒注射部位的皮膚，用注射針頭取一銳角角度刺入皮下.

將針頭輕輕向左右擺動，易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下。

注射量：0.01ml—0.03ml／g體重皮下注射方法步驟第二十三頁，共六十七頁，2022年，8月28日此法用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反應(yīng)注射部位：動物背部，脫毛，用針頭平直進(jìn)入皮內(nèi)注射藥液后，皮膚表面鼓起小泡，停片刻拔出針頭2.皮內(nèi)注射給藥第二十四頁，共六十七頁，2022年，8月28日原理：將藥液注入動物的肌肉組織，經(jīng)毛細(xì)血管吸收進(jìn)入血液循環(huán)器材：1ml注射器1支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球注射部位：一般選擇肌肉豐富而無大血管通過的臀部或大腿外測，回抽無血即可注射3.肌肉注射給藥第二十五頁，共六十七頁，2022年，8月28日原理：將藥液注入小鼠的尾靜脈器材：1m1注射器1支、生理鹽水、燒杯、金屬籠或大小鼠器、酒精、碘酒、棉球4.靜脈注射給藥第二十六頁，共六十七頁，2022年，8月28日將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器中，通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴用左手捏住鼠尾巴中下部，用75％酒精棉球反復(fù)擦拭尾部；注射時，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用食指從下面托起尾巴，以無名指夾住尾巴的末梢。右手持4號針頭的注射器，使針頭與靜脈平行(小于30度角)；從鼠尾巴下1/4處進(jìn)針，仔細(xì)觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，即可注入藥物拔出針頭后，用干棉球壓住注射部位約l-2min，防止出血注射量：小鼠

0.005m1—0.01m1／g體重。

大鼠

m1／100g體重靜脈注射方法步驟第二十七頁，共六十七頁，2022年，8月28日原理：將藥液注入大鼠的腹腔器材：注射器1支、生理鹽水、燒杯5.腹腔注射給藥第二十八頁，共六十七頁，2022年，8月28日用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部；右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿刺針頭刺入皮下后進(jìn)針3mm左右，接著使注射針頭與皮膚呈45度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失固定針頭，保持針尖不動，回抽針?biāo)ǎ鐭o回血、腸液和尿液后即可注射藥液注射量：0.01—0.02m1／g體重腹腔注射方法步驟第二十九頁，共六十七頁，2022年，8月28日胸水腹水消化液尿液骨髓液動物精液乳汁

五、采集體液第三十頁，共六十七頁，2022年，8月28日代謝籠法:此法較常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-3ml/24h，大鼠為55-75ml/24h導(dǎo)尿法：常用于雄兔、犬等動物，要輕度麻醉，可以采到無污染的尿液壓迫膀胱法：此法適用于兔、貓、犬等大動物輸尿管插管法膀胱插管法膀胱穿刺法剖腹采尿法反射排尿法尿液的采集第三十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日眼眶后靜脈叢(竇)取血器材：毛細(xì)管(玻璃或塑料均可)、1％肝素溶液、干燥皿、乙醚、試管、干棉球

六、大鼠的采血第三十二頁，共六十七頁，2022年，8月28日先將毛細(xì)管浸泡在1％肝素溶液中數(shù)分鐘，取出干燥備用將大鼠進(jìn)行麻醉，使大鼠保持側(cè)臥位左手拇指、食指抓住兩鼠耳之間的頸部頭皮，并輕輕向下壓迫頸部兩側(cè)，致大鼠靜脈血回流障礙，眼球外突，眶后靜脈叢充血右手持毛細(xì)管由大鼠的目內(nèi)眥部插入結(jié)膜，使毛細(xì)管與眶壁平行地向喉頭方向推進(jìn)，深度約3—5mm輕輕旋動毛細(xì)管，使其穿破靜脈叢，讓血流順毛細(xì)管流出采血量：0.4—0.6ml／次方法步驟第三十三頁，共六十七頁，2022年，8月28日第三十四頁，共六十七頁，2022年，8月28日腦立體定位技術(shù)某些顱外標(biāo)記與顱內(nèi)結(jié)構(gòu)具有相對固定的位置關(guān)系，確定腦內(nèi)功能核團(tuán)的位置核團(tuán)微量注射電位引導(dǎo)核團(tuán)的刺激或損毀第三十五頁，共六十七頁，2022年，8月28日腦立體定位儀第三十六頁，共六十七頁，2022年，8月28日腦立體定位儀的調(diào)試:擺穩(wěn)定位儀，用水平儀測水平。檢驗電極移動架上各個軸向滑尺是否保持互相垂直，微量注射器針尖是否光滑垂直。檢查定位儀各銜接部位的螺絲有無松動。檢查頭部固定裝置兩側(cè)是否對稱。檢查耳桿使兩耳桿尖端相對,以此判定耳桿固定的準(zhǔn)確程度。第三十七頁，共六十七頁，2022年，8月28日鼠顱的固定:將麻醉大鼠置于腦立體定位儀上，鼠顱依靠兩耳桿及切牙鉤三點固定。腦立體定位儀坐標(biāo)“0”點的測得:按照Paxinos

大鼠腦立體定位圖譜，以顱骨前囟即冠矢點作為前后方向的“0”參照點，當(dāng)微量注射器的針尖對準(zhǔn)冠矢點時,讀取立體定位儀三維坐標(biāo)上標(biāo)尺的數(shù)值，此數(shù)值即是“0”點坐標(biāo)。第三十八頁，共六十七頁，2022年，8月28日第三十九頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十二頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十三頁，共六十七頁，2022年，8月28日生物信號在體檢測遙控系統(tǒng)第四十四頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十五頁，共六十七頁，2022年，8月28日IllustrationofthehighfidelityrecordingprovidedbytheC10telemeter,whichallowsfortheaccuratemeasurementofpulsepressuresinmicedespitetheirhighheartrate(10persecond!).第四十六頁，共六十七頁，2022年，8月28日Burstsofrenalsympatheticnerveactivitymadeinaconscious,freelybehavingrat64daysfollowingtelemeterimplantation第四十七頁，共六十七頁，2022年，8月28日PowerLab系統(tǒng)第四十八頁，共六十七頁，2022年，8月28日第四十九頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日FaradaycageVibrationIsolationTableMicroscopeMicro-ManipulatorsRemoteControllerAmplifiersCCDCamera膜片鉗系統(tǒng)第五十二頁，共六十七頁，2022年，8月28日Micro-ManipulatorsDAD-VCsystemCCDCamera第五十三頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十四頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十五頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十六頁，共六十七頁，2022年，8月28日第五十七頁，共六十七頁，2022年，8月28日活體生物發(fā)光和熒光成像技術(shù)第五十八頁，共六十七頁，2022年，8月28日59理想的光源：螢火蟲熒光素酶（luciferase）基因、細(xì)胞、活體都可被熒光素酶基因標(biāo)記。活體生物發(fā)光成像系統(tǒng)原理●遺傳學(xué)標(biāo)記●實時、原位●多波長檢測標(biāo)記癌細(xì)胞標(biāo)記細(xì)菌標(biāo)記轉(zhuǎn)基因鼠第五十九頁，共六十七頁，2022年，8月28日60熒光素酶的表達(dá)

將熒光素酶基因連接于啟動子下游，穩(wěn)定整合到細(xì)胞染色體內(nèi)，使熒光素酶得到持續(xù)表達(dá)。啟動子染色體體內(nèi)表達(dá)外源注入底物活躍細(xì)胞體內(nèi)發(fā)光第六十頁，共六十七頁，2022年，8月28日61活體成像技術(shù)的主要應(yīng)用標(biāo)記細(xì)胞

癌癥及藥物研究標(biāo)記病毒,DNA,RNA

病毒學(xué)及基因治療轉(zhuǎn)基因動物模型蛋白質(zhì)相互作用、代謝、發(fā)育、內(nèi)分泌學(xué)，等等…標(biāo)記基因

siRNA研究的應(yīng)用干細(xì)胞,免疫其它…細(xì)胞凋亡組織特異性基因表達(dá)標(biāo)記細(xì)菌第六十一頁，共六十七頁，2022年，8月28日62體內(nèi)藥物分析的生物發(fā)光檢測1x106，PC-3M-Luc腫瘤細(xì)胞，皮下注射14天21天28天35天雄性SCID小鼠處理方式細(xì)胞數(shù)無治療對照2.