七腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及干預(yù)研究第1頁/共183頁第2頁/共183頁第3頁/共183頁第4頁/共183頁第5頁/共183頁第6頁/共183頁第7頁/共183頁第8頁/共183頁第9頁/共183頁LiverMetastasisofLungCancer第10頁/共183頁主要內(nèi)容一、概述二、侵襲、轉(zhuǎn)移的定義三、癌轉(zhuǎn)移的條件及特點(diǎn)四、腫瘤轉(zhuǎn)移過程五、腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制第11頁/共183頁什么是轉(zhuǎn)移？第12頁/共183頁腫瘤侵襲（Invasion)是指惡性腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)灶而侵犯鄰近組織并繼續(xù)增殖的過程。第13頁/共183頁◆腫瘤細(xì)胞的增殖◆腫瘤從原發(fā)灶脫離—E-鈣粘連素下降◆腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性和趨化性◆血管生成與腫瘤侵襲侵襲包括四個(gè)過程第14頁/共183頁◆腫瘤細(xì)胞的增殖Ki67是一種增殖相關(guān)核抗原，檢測(cè)其表達(dá)能特異性識(shí)別增殖的腫瘤或正常細(xì)胞。反映細(xì)胞增殖活性的Ki67指數(shù)(Ki67LI)可作為判斷腫瘤生長速度的指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的反映腫瘤侵襲能力的形態(tài)學(xué)標(biāo)志(如核多形性、細(xì)胞不典型性和有絲分裂活躍等)，與垂體腺瘤增殖和侵襲性相關(guān)性較低。而腫瘤生長速度則被認(rèn)為是反映垂體腺瘤侵襲性的客觀指標(biāo)這與其具有高增殖性及高侵襲性有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腺病毒作為載體介導(dǎo)抑癌基因PTEN體外轉(zhuǎn)染人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87，檢測(cè)其細(xì)胞增殖力與體外侵襲力的改變，進(jìn)而探討PTEN作為膠質(zhì)瘤基因治療靶點(diǎn)的可能性。第15頁/共183頁第16頁/共183頁是惡性腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)部位，通過各種渠道轉(zhuǎn)運(yùn)到不連續(xù)的靶組織中繼續(xù)增殖，形成同樣性質(zhì)腫瘤的過程。遠(yuǎn)隔部位繼發(fā)瘤形成繼發(fā)瘤繼續(xù)生長繼發(fā)瘤再侵襲轉(zhuǎn)移腫瘤轉(zhuǎn)移(Metastasis)第17頁/共183頁第18頁/共183頁人類對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的認(rèn)識(shí)腫瘤是高度異質(zhì)性的細(xì)胞群體轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、序貫的復(fù)雜過程轉(zhuǎn)移的發(fā)生是多因素相互作用的結(jié)果（Fidler,IJ

SurgicalOncologyClinicsofNorthAmerica.2001，10（2）：257-269）第19頁/共183頁

轉(zhuǎn)移有什么特點(diǎn)？第20頁/共183頁腫瘤轉(zhuǎn)移特點(diǎn)1.不同腫瘤其轉(zhuǎn)移能力有差異低轉(zhuǎn)移基底細(xì)胞癌、脊髓瘤、唾液腺腺樣囊性癌、軟骨肉瘤、

高轉(zhuǎn)移甲狀腺濾泡型腺癌、黑色素瘤第21頁/共183頁2.不同類型腫瘤其轉(zhuǎn)移途徑不同淋巴道轉(zhuǎn)移癌如肺癌、

NPC血道轉(zhuǎn)移肉瘤、絨癌、腎癌前列腺癌等第22頁/共183頁3.轉(zhuǎn)移的器官特異性原發(fā)瘤轉(zhuǎn)移器官乳腺癌

骨、腦、腎上腺前列腺癌骨肺小細(xì)胞癌

骨、腦、肝甲狀腺癌

骨腎癌

骨、肝、甲狀腺膀胱癌

腦睪丸癌

肝……第23頁/共183頁第24頁/共183頁“SeedandSoil”theoryByPagetS.ThedistributionofsecondarygrowthincancerofthebreastLancet,1889Seed:tumorcellwithmetastaticpotentialSoil:microenviroment第25頁/共183頁轉(zhuǎn)移器官特異性的機(jī)制(1)腫瘤細(xì)胞表型的差異

異質(zhì)性表現(xiàn)細(xì)胞表面糖蛋白復(fù)合物、抗原、酶活性、運(yùn)動(dòng)能力等如EGFR(-)/EGFR(+)第26頁/共183頁HEx20EBERx20TFCx20第27頁/共183頁HEx20EBERx20TFCx20NPC65第28頁/共183頁HEx60EBERx60TFCx60NPC65第29頁/共183頁（2）組織器官微環(huán)境差異實(shí)驗(yàn)證明不同腫瘤移植于相同器官同種腫瘤移植于不同器官侵襲轉(zhuǎn)移能力有差異如：部位相同小鼠胃癌、人食管癌不同部位皮下、肌肉和腹腔

第30頁/共183頁繼發(fā)器官微環(huán)境對(duì)腫瘤細(xì)胞的特殊親和性

①繼發(fā)器官脈管內(nèi)皮細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)②化學(xué)趨化因子作用③器官相關(guān)的免疫狀態(tài)④各種生長因子作用第31頁/共183頁鼻咽癌轉(zhuǎn)移裸鼠模型第32頁/共183頁

腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移需要哪些條件？第33頁/共183頁三、腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的條件及轉(zhuǎn)移特點(diǎn)（一）轉(zhuǎn)移發(fā)生的條件

1.細(xì)胞變異—轉(zhuǎn)移異質(zhì)性瘤細(xì)胞遺傳不穩(wěn)定異質(zhì)性演進(jìn)轉(zhuǎn)移亞克隆優(yōu)勢(shì)生長依據(jù)第34頁/共183頁轉(zhuǎn)移異質(zhì)性實(shí)驗(yàn)依據(jù)1977FidlerClone第35頁/共183頁TissuecultureSpontanousmetastasisNinetimesCNE-2Z-H5本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行裸鼠體內(nèi)篩選高轉(zhuǎn)移癌株：BALB/cnudemice第36頁/共183頁2.微環(huán)境和機(jī)體免疫狀態(tài)（1）毗鄰細(xì)胞旁分泌各種生長因子，促進(jìn)腫瘤生長（2）血液流變學(xué)改變表現(xiàn)血漿粘稠度及紅細(xì)胞密度高第37頁/共183頁（3）機(jī)體的免疫反應(yīng)（4）細(xì)胞粘附性改變瘤細(xì)胞—瘤細(xì)胞間粘附力下降瘤細(xì)胞—細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)粘附力增高第38頁/共183頁

腫瘤轉(zhuǎn)移的條件第39頁/共183頁四、腫瘤轉(zhuǎn)移過程及其影響因素Fidler第40頁/共183頁（一）原發(fā)瘤的形成與生長即正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和生長?受血管生成因子和抑制因子共同調(diào)控（二）腫瘤血管生成

?始于腫瘤直徑達(dá)1-2mm

?與宿主血管網(wǎng)互相聯(lián)系第41頁/共183頁（三）腫瘤細(xì)胞脫落并侵入基質(zhì)

1.瘤細(xì)胞粘附能力改變

同質(zhì)型粘附力低異質(zhì)性粘附力高易侵襲轉(zhuǎn)移第42頁/共183頁細(xì)胞粘附力與轉(zhuǎn)移關(guān)系細(xì)胞系同質(zhì)粘附%轉(zhuǎn)移率%LA191.290LAD88.516LA572.532

CNE2L46313CNE2L292100異質(zhì)粘附%第43頁/共183頁瘤細(xì)胞間橋粒減少瘤細(xì)胞表面負(fù)電荷增加鈣粘蛋白表達(dá)水平下降瘤細(xì)胞表面受體改變瘤細(xì)胞表面纖維連接蛋白減少有關(guān)影響因素第44頁/共183頁2.瘤細(xì)胞表面負(fù)電荷增加實(shí)驗(yàn)表明：細(xì)胞系電泳率轉(zhuǎn)移率%MFC-C-640.73μm/sec/v/cm7.5MFC-C-380.83μm/sec/v/cm31.4CNE2L40.76μm/sec/v/cm13CNE2L21.36μm/sec/v/cm100第45頁/共183頁3.瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)細(xì)胞系36h(μm/h)轉(zhuǎn)移率%LA11980LAD28516LA531632

CNE2L416.9413CNE2L228.94100第46頁/共183頁刺激瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)而抑制其生長，如TGF,干擾素等參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的因子促進(jìn)瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)與生長，如

EGF,肝細(xì)胞生長因子等刺激腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和侵襲的因子，如：自分泌運(yùn)動(dòng)因子(AMF)第47頁/共183頁4.瘤細(xì)胞產(chǎn)生蛋白水解酶增加主要包括?血漿纖維蛋白溶解酶原激活物（Plasminogenactivators,PA)?組織蛋白酶(cathepsins)?

基質(zhì)金屬蛋白酶

(Matrixmetalloproteinase,MMPs）第48頁/共183頁（四）瘤細(xì)胞進(jìn)入脈管系統(tǒng)新生脈管管壁不完整瘤細(xì)胞通過運(yùn)動(dòng)、粘附、侵襲血管基底膜而進(jìn)入脈管第49頁/共183頁（五）瘤細(xì)胞與脈管粘附及瘤栓形成循環(huán)中的瘤細(xì)胞互相粘連或與血小板粘附形成瘤栓。瘤細(xì)胞通過粘附分子介導(dǎo)與內(nèi)皮細(xì)胞粘附（選擇素、整合素及其受體等）但瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附有異質(zhì)性第50頁/共183頁（六）瘤細(xì)胞穿出血管內(nèi)皮細(xì)胞層損傷內(nèi)皮下基底膜暴露瘤細(xì)胞粘附降解基底膜瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)進(jìn)入間質(zhì)第51頁/共183頁（七）轉(zhuǎn)移灶生長及再侵襲轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞與靶器官的實(shí)質(zhì)細(xì)胞粘附瘤細(xì)胞和靶器官分泌各種生長因子刺激瘤細(xì)胞增殖新生血管形成第52頁/共183頁微小轉(zhuǎn)移的概念1971年Huvos直徑<2ｍｍ

Fisher直徑<1.3ｍｍ1980年Black直徑小于受累淋巴結(jié)的20%作為標(biāo)準(zhǔn)1993年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1～2ｍｍ目前,直徑<2ｍｍ第53頁/共183頁腫瘤可轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)(包括新鮮淋巴結(jié)和石蠟切片)、骨髓、外周血及其他體液等,較多見的取材為淋巴結(jié)、骨髓、外周血。第54頁/共183頁微小轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法細(xì)胞學(xué)方法癌細(xì)胞數(shù)量很少,鑒別良、惡性細(xì)胞仍有困難,其特異性和敏感性差,陽性率1%連續(xù)切片法工作量繁重,費(fèi)時(shí)費(fèi)力7%～33%免疫學(xué)方法抗上皮細(xì)胞膜/骨架成份的單克隆抗體檢測(cè)肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等播散至外周組織中的癌細(xì)胞。

第55頁/共183頁微小轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法聚合酶鏈反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)PCR、RT-PCR

高效率、高靈敏度、高特異性、操作簡便,現(xiàn)已能測(cè)定組織、體液中的單個(gè)癌細(xì)胞診斷特異性尚存在爭(zhēng)議定量ＰＣＲ法具有更高的特異性和敏感性第56頁/共183頁

微小轉(zhuǎn)移檢測(cè)方法癌基因直接檢測(cè)法

肺和6例癌組織均有ＭＵＣ1基因表達(dá),

正常淋巴結(jié)無端粒酶活性檢測(cè)外周血端粒酶活性,反映血液微轉(zhuǎn)移的情況,是一種潛在的預(yù)后指標(biāo)。第57頁/共183頁五、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制(一)腫瘤轉(zhuǎn)移的基因表達(dá)調(diào)控1.癌基因(Oncogenes)

研究表明：多種癌基因與轉(zhuǎn)移相關(guān)，如Myc,Mos,Raf,Fos,Ras等第58頁/共183頁以Ras為例：

Ras家屬：N-Ras,K-Ras,H-Ras實(shí)驗(yàn)依據(jù)：Collard(1987)H-Rasgene第59頁/共183頁H-RasgeneTransfection體外侵襲體內(nèi)轉(zhuǎn)移

小鼠T淋巴瘤細(xì)胞

BW5147(無侵襲轉(zhuǎn)移力）提示：H-Ras促進(jìn)BW5147

侵襲轉(zhuǎn)移第60頁/共183頁以NIH/3T3細(xì)胞為對(duì)象的研究還發(fā)現(xiàn)：H-Ras可以改變某些基因表達(dá)水平OsteopontinTIMPCalcyclinTIMP-2組織蛋白酶LJun組織蛋白酶BFosMMPs活性或表達(dá)高活性或表達(dá)低第61頁/共183頁2.抑癌基因目前已發(fā)現(xiàn)的抑癌基因近20種如Rb,P53,P15,P16,APC等。實(shí)驗(yàn)證實(shí)：高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞系PGP53wtmRNA低于正常第62頁/共183頁P(yáng)CR-SSCP檢測(cè)p53,CD44v突變情況P53突變CD44v6突變第63頁/共183頁3.轉(zhuǎn)移抑制基因—nm23發(fā)現(xiàn)Steeg(1988)從小鼠黑色素瘤細(xì)胞系中克隆出蛋白17KD,與核苷酸二磷酸激酶(NDPK)高度同源基因定位17q22,533bp有兩個(gè)亞型H1,H2第64頁/共183頁功能A.

通過與NDPK相似途徑參與細(xì)胞分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控B.

影響微管的聚合以調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)C.影響G蛋白的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程第65頁/共183頁A.

在多數(shù)腫瘤中，nm23-H1表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān)B.

在癌轉(zhuǎn)移過程中，出現(xiàn)等位基因缺失，造成其蛋白功能異常C.nm23-H2基因常出現(xiàn)點(diǎn)突變，蛋白結(jié)構(gòu)被破壞與轉(zhuǎn)移的關(guān)系第66頁/共183頁（二）粘附分子與腫瘤轉(zhuǎn)移1.粘附的類型細(xì)胞間粘附(同質(zhì)或異質(zhì)）細(xì)胞與ECM粘附第67頁/共183頁2.粘附分子的種類與作用（1）整合素(integrins)?整合素為跨膜糖蛋白?由α和β兩個(gè)亞基構(gòu)成異二聚體?參與不同細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)粘附?受多種活化因子活化第68頁/共183頁（2）鈣粘蛋白(Cadherin)

?為跨膜糖蛋白家族

E-CD:上皮組織

P-CD:上皮、胎盤

N-CD:神經(jīng)組織?基因定位于16q22-q23.1第69頁/共183頁

?E-CD和

Catenin構(gòu)成復(fù)合體介導(dǎo)同源細(xì)胞粘附?E-CD的低表達(dá)促進(jìn)多數(shù)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移第70頁/共183頁第71頁/共183頁?主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間粘附

?包括ICAM-1、VCAM-1、

NCAM等

?ICAM-1，VCAM-1過表達(dá)，腫瘤侵襲能力強(qiáng)?NCAM低表達(dá)，促進(jìn)轉(zhuǎn)移(3)免疫球蛋白類粘附分子第72頁/共183頁?包括

L-選擇素存在于白細(xì)胞表面

E-選擇素內(nèi)皮細(xì)胞

P-選擇素參與瘤細(xì)胞與血小板粘附?選擇素參與瘤細(xì)胞聚集和瘤細(xì)胞與特定內(nèi)皮細(xì)胞錨定(4)選擇素（selectins)第73頁/共183頁?分標(biāo)準(zhǔn)型(CD44s)和變異型

(CD44v)

?為跨膜蛋白，細(xì)胞內(nèi)部分與細(xì)胞骨架相連，膜外部分與透明質(zhì)酸(HA)等配體作用（5）CD44分子第74頁/共183頁介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與ECM之間粘附，為淋巴細(xì)胞的歸巢受體具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用通過影響細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)和胞外基質(zhì)降解而參與腫瘤轉(zhuǎn)移第75頁/共183頁(三)腫瘤血管生成與轉(zhuǎn)移1.血管生成的過程⑴血管內(nèi)皮基底膜降解⑵內(nèi)皮細(xì)胞向腫瘤組織遷移⑶內(nèi)皮細(xì)胞增殖⑷管腔及血管網(wǎng)形成⑸形成新基底膜第76頁/共183頁Fig4-14第77頁/共183頁第78頁/共183頁第79頁/共183頁CancercellsdisseminatetoremoteorgansviabloodstreamxFunctionoftumorvesselsSupplytumorswithoxygen,nutrientsandgrowthfactorsTransportofCO2andtoxiccomponentsawayfromthetissueMediatetumormetastasis第80頁/共183頁第81頁/共183頁第82頁/共183頁第83頁/共183頁2.腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)促進(jìn)因子纖維母細(xì)胞生長因子(bFGF)

干擾素(INF-α,β)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)

轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-α)血小板因子4TNFαPAI

PATIMPsPDEGFMMPs

IL-8

抑制因子第84頁/共183頁低氧誘導(dǎo)VEGFmRNA表達(dá)(RT-PCR)IsoformsFoldss

VEGF1892.67±0.30(P>0.05)VEGF1652.05±0.03(P<0.01)VEGF1452.73±0.15(P<0.05)VEGF1211.65±0.01(P<0.05)第85頁/共183頁低氧誘導(dǎo)VEGF蛋白表達(dá)(Western-Blot)VEGFinhypoxiccellswas(2.20±0.07)-foldofthatinnormoxiccells.*IndependentSamplesT-Test:t=8.944,P<0.05第86頁/共183頁（四）蛋白水解酶與腫瘤轉(zhuǎn)移1.纖維蛋白溶解酶原激活劑及其抑制劑(PAandPAI)(1)PA的分類與功能

?分組織型(t-PA)和尿激酶型

(u-PA)第87頁/共183頁不同的基因產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)相似，即單鏈絲氨酸蛋白酶參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程，包括細(xì)胞分化、血管生成、細(xì)胞遷移、基質(zhì)降解等第88頁/共183頁luPAmRNA246bpMCNE-2ZCNE-2Z-H5CNE-2Z-H5-9圖1uPA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)第89頁/共183頁圖2各鼻咽癌細(xì)胞RT-PCR結(jié)果uPAmRNA與GAPDHmRNA灰度比值第90頁/共183頁圖3uPARmRNA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)第91頁/共183頁圖4各鼻咽癌細(xì)胞RT-PCRuPARmRNA結(jié)果與GAPDHmRNA灰度比值第92頁/共183頁CNE-2ZH5H5-960KD55KDWesternBlot檢測(cè)

uPAR在CNE-2Z,H5,H5-9中的表達(dá)第93頁/共183頁圖5PAI-1mRNA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)第94頁/共183頁?包括PAI-1,2,3

?PAI-1為糖蛋白，52KD,PAI-2分子量46.6KD,

為u-PA抑制劑

?在多數(shù)腫瘤中高表達(dá)，提示預(yù)后好(2)PAI的分類與功能第95頁/共183頁圖6各鼻咽癌細(xì)胞RT-PCR結(jié)果PAI-1mRNA與GAPDHmRNA灰度比值第96頁/共183頁(1)分類與結(jié)構(gòu)

?為Zn依賴的內(nèi)肽酶，包括膠原酶(collagenase)

明膠酶(gelatinase)

基質(zhì)溶素(tromitysinase)

膜型MMP(MT-MMPs)2.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑(MMPs/TIMPs)第97頁/共183頁?能降解ECM中所有成分

?誘導(dǎo)和促進(jìn)新生血管形成調(diào)節(jié)瘤細(xì)胞的粘附細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）

膠原蛋白、彈性蛋白、糖蛋白、蛋白多糖第98頁/共183頁免疫組化檢測(cè)鼻咽癌組織中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表達(dá)情況LMP1MMP-2MMP-9第99頁/共183頁（五）機(jī)體免疫與轉(zhuǎn)移（1）NK細(xì)胞為第一道防線，無需抗原刺激可殺傷瘤細(xì)胞依據(jù)1.參與控制轉(zhuǎn)移的免疫細(xì)胞第100頁/共183頁小鼠環(huán)磷酰胺清除NK細(xì)胞移植腫瘤于小鼠轉(zhuǎn)移早裸小鼠T細(xì)胞缺陷，NK細(xì)胞存在移植腫瘤于小鼠轉(zhuǎn)移率相對(duì)低第101頁/共183頁（2）巨噬細(xì)胞其活性與轉(zhuǎn)移抑制能力呈正相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明巨噬細(xì)胞抑制劑促進(jìn)轉(zhuǎn)移巨噬細(xì)胞激活劑減少轉(zhuǎn)移第102頁/共183頁（3）T細(xì)胞Ts細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移Th細(xì)胞增強(qiáng)殺傷T細(xì)胞的作用殺傷T細(xì)胞抑制和殺傷瘤細(xì)胞第103頁/共183頁問題與展望：轉(zhuǎn)移各步驟和不同微環(huán)境中癌細(xì)胞基因表達(dá)譜變化尚難確定各信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間形成的交叉對(duì)話(Cross-talking)機(jī)制有待闡明腫瘤臨床診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷的敏感標(biāo)記物有待確定。高通量技術(shù)平臺(tái)的建立將為腫瘤轉(zhuǎn)移研究帶來新的希望第104頁/共183頁一、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制

（續(xù)）第105頁/共183頁（二）粘附分子與腫瘤轉(zhuǎn)移1.粘附的類型細(xì)胞間粘附(同質(zhì)或異質(zhì)）細(xì)胞與ECM粘附第106頁/共183頁2.粘附分子的種類與作用（1）整合素(integrins)?整合素為跨膜糖蛋白?參與不同細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)粘附?受多種活化因子活化第107頁/共183頁（2）鈣粘蛋白(Cadherin)

?為跨膜糖蛋白家族

E-CD:上皮組織

P-CD:上皮、胎盤

N-CD:神經(jīng)組織?基因定位于16q22-q23.1第108頁/共183頁

?E-CD和

Catenin構(gòu)成復(fù)合體介導(dǎo)同源細(xì)胞粘附?E-CD的低表達(dá)促進(jìn)多數(shù)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移第109頁/共183頁第110頁/共183頁?主要介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間粘附

?包括ICAM-1、VCAM-1、

NCAM等。

?ICAM-1，VCAM-1過表達(dá)，腫瘤侵襲能力強(qiáng)。?NCAM低表達(dá)，促進(jìn)轉(zhuǎn)移。(3)免疫球蛋白類粘附分子第111頁/共183頁?包括

L-選擇素存在于白細(xì)胞表面。

E-選擇素內(nèi)皮細(xì)胞

P-選擇素參與瘤細(xì)胞與血小板粘附?選擇素參與瘤細(xì)胞聚集和瘤細(xì)胞與特定內(nèi)皮細(xì)胞錨定。(4)選擇素（selectins)第112頁/共183頁(三)腫瘤血管生成與轉(zhuǎn)移1.血管生成的過程⑴血管內(nèi)皮基底膜降解⑵內(nèi)皮細(xì)胞向腫瘤組織遷移⑶內(nèi)皮細(xì)胞增殖⑷管腔及血管網(wǎng)形成⑸形成新基底膜第113頁/共183頁Fig4-14第114頁/共183頁第115頁/共183頁第116頁/共183頁CancercellsdisseminatetoremoteorgansviabloodstreamxFunctionoftumorvesselsSupplytumorswithoxygen,nutrientsandgrowthfactorsTransportofCO2andtoxiccomponentsawayfromthetissueMediatetumormetastasis第117頁/共183頁第118頁/共183頁第119頁/共183頁第120頁/共183頁2.腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)促進(jìn)因子纖維母細(xì)胞生長因子(bFGF)

干擾素(INF-α,β)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)

轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-α)血小板因子4TNFαPAI

PATIMPsPDEGFMMPs

IL-8

抑制因子第121頁/共183頁低氧誘導(dǎo)VEGFmRNA表達(dá)(RT-PCR)IsoformsFoldss

VEGF1892.67±0.30(P>0.05)VEGF1652.05±0.03(P<0.01)VEGF1452.73±0.15(P<0.05)VEGF1211.65±0.01(P<0.05)第122頁/共183頁低氧誘導(dǎo)VEGF蛋白表達(dá)(Western-Blot)VEGFinhypoxiccellswas(2.20±0.07)-foldofthatinnormoxiccells.*IndependentSamplesT-Test:t=8.944,P<0.05第123頁/共183頁（四）蛋白水解酶與腫瘤轉(zhuǎn)移1.纖維蛋白溶解酶原激活劑及其抑制劑(PAandPAI)(1)PA的分類與功能

?分組織型(t-PA)和尿激酶型

(u-PA)第124頁/共183頁為不同的基因產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)相似，單鏈絲氨酸蛋白酶。參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程，包括細(xì)胞分化、血管生成、細(xì)胞遷移、基質(zhì)降解等。第125頁/共183頁luPAmRNA246bpMCNE-2ZCNE-2Z-H5CNE-2Z-H5-9圖1uPA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)第126頁/共183頁圖2各鼻咽癌細(xì)胞RT-PCR結(jié)果uPAmRNA與GAPDHmRNA灰度比值第127頁/共183頁?包括PAI-1,2,3

?PAI-1為糖蛋白，52KD,PAI-2分子量46.6KD,

為u-PA抑制劑

?在多數(shù)腫瘤中高表達(dá)，提示預(yù)后好。(2)PAI的分類與功能第128頁/共183頁圖5PAI-1mRNA在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)第129頁/共183頁圖6各鼻咽癌細(xì)胞RT-PCR結(jié)果PAI-1mRNA與GAPDHmRNA灰度比值第130頁/共183頁(1)分類與結(jié)構(gòu)

?為Zn依賴的內(nèi)肽酶，包括膠原酶(collagenase)

明膠酶(gelatinase)

基質(zhì)溶素(tromitysinase)

膜型MMP(MT-MMPs)2.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑(MMPs/TIMPs)第131頁/共183頁?能降解ECM中所有成份。?誘導(dǎo)和促進(jìn)新生血管形成。?調(diào)節(jié)瘤細(xì)胞的粘附。第132頁/共183頁免疫組化檢測(cè)鼻咽癌組織中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表達(dá)情況慢性鼻咽炎鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌第133頁/共183頁MMP-2MMP-9第134頁/共183頁（五）機(jī)體免疫與轉(zhuǎn)移（1）NK細(xì)胞為第一道防線，無需抗原刺激可殺傷瘤細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)依據(jù)：1、參與控制轉(zhuǎn)移的免疫細(xì)胞第135頁/共183頁清除NK細(xì)胞小鼠環(huán)磷酰胺移植腫瘤于小鼠轉(zhuǎn)移早裸小鼠T細(xì)胞缺陷，NK細(xì)胞存在移植腫瘤于小鼠轉(zhuǎn)移率正常先天無NKBejge小鼠轉(zhuǎn)移早第136頁/共183頁（2）巨噬細(xì)胞其活性與轉(zhuǎn)移抑制能力呈正相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明：巨噬細(xì)胞抑制劑促進(jìn)轉(zhuǎn)移巨噬細(xì)胞激活劑減少轉(zhuǎn)移第137頁/共183頁（3）T細(xì)胞Ts細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移Th細(xì)胞增強(qiáng)殺傷T細(xì)胞的作用殺傷T細(xì)胞抑制和殺傷瘤細(xì)胞第138頁/共183頁問題與展望：轉(zhuǎn)移各步驟和不同微環(huán)境中癌細(xì)胞基因表達(dá)譜變化尚難確定。腫瘤臨床診斷、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷的敏感標(biāo)記物有待確定。高通量技術(shù)平臺(tái)的建立將為腫瘤轉(zhuǎn)移研究帶來新的希望。第139頁/共183頁策略針對(duì)腫瘤細(xì)胞（嚴(yán)打：應(yīng)用各種細(xì)胞毒藥物）針對(duì)瘤細(xì)胞生存微環(huán)境（整治環(huán)境）二、抗轉(zhuǎn)移治療的新策略第140頁/共183頁抗轉(zhuǎn)移治療的新方法1.抑制腫瘤血管生成即針對(duì)腫瘤血管形成的某些因子及其關(guān)鍵步驟進(jìn)行干預(yù)⑴抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞活化類藥物，如RhuMAbVEGF，F(xiàn)LK-1(DC101)第141頁/共183頁(2)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂與遷移,如Angiostatin(血管抑素），endostatin（內(nèi)皮抑素），

TNP-470(3)抑制基底膜或細(xì)胞外基質(zhì)降解類藥物(4)封閉整合素功能類藥物第142頁/共183頁2.細(xì)胞粘附分子抑制劑與抗轉(zhuǎn)移（1）阻止粘附信號(hào)的傳遞蛋白酪氨酸激酶(PTK)

抑制劑（Genistein)（3）增強(qiáng)E-cadherin介導(dǎo)的同質(zhì)粘附（2）抑制Integrins依賴性的粘附如環(huán)孢霉素等第143頁/共183頁3.蛋白酶抑制劑的應(yīng)用（1）MMPs抑制劑

a.Batimastat

為人工合成的小分子MMP

抑制劑，能與MMP活性基團(tuán)結(jié)合，能抑制MMP-2,9等第144頁/共183頁b.Marimastas

為第二代人工合成MMP抑制劑，副作用小，病人耐受好等，能抑制多種MMP活性

（2）uPA抑制劑如抗uPA抗體及多肽第145頁/共183頁4.基因治療第146頁/共183頁1.定義基因治療將正常的外源基因?qū)肷矬w或人體靶細(xì)胞內(nèi)以彌補(bǔ)所缺失的基因、或關(guān)閉、降低異常表達(dá)的基因，以達(dá)到治療疾病的目的。第147頁/共183頁⑴增強(qiáng)宿主抗癌免疫⑵恢復(fù)或增強(qiáng)抑癌基因的功能⑶阻斷癌基因⑷增強(qiáng)化療和放療敏感性⑸細(xì)胞基因殺傷效應(yīng)2.腫瘤轉(zhuǎn)移基因治療的策略第148頁/共183頁3.基因治療的途徑1.exvivo

途徑:將人體細(xì)胞從體內(nèi)取出,基因改造,再移植到人體中.自體,同種異體,異種細(xì)胞,同種異體或異種組織和器官等.2.invivo

途徑:直接將基因轉(zhuǎn)移到人體中,如DNA注射,口服,噴霧等.有如普通治療藥物,商業(yè)化發(fā)展方向所在.第149頁/共183頁基因治療的exvivo

途徑第150頁/共183頁基因治療就與打針和吃藥一樣.

基因治療的invivo

途徑第151頁/共183頁舉例

nm23geneTIMPgene轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力降低第152頁/共183頁三、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移研究的基本策略與技術(shù)（一）研究策略整體水平：人癌動(dòng)物模型自發(fā)性癌癥動(dòng)物模型誘發(fā)性癌癥動(dòng)物模型可移植性癌癥動(dòng)物模型（裸鼠，SCID小鼠）轉(zhuǎn)基因癌癥動(dòng)物模型細(xì)胞水平（細(xì)胞培養(yǎng)、雜交瘤技術(shù)等）第153頁/共183頁裸小鼠特征：外觀無毛，裸體，皮膚薄，發(fā)育遲緩。無胸腺T細(xì)胞功能欠缺無細(xì)胞毒效應(yīng)，無移植排斥成年鼠NK細(xì)胞活性增加抵抗力低11號(hào)染色體突變第154頁/共183頁SCID小鼠特征(SevereCombinedImmuneDeficency)外觀正常16號(hào)染色體突變，T、B缺陷免疫學(xué)特征為T、B細(xì)胞明顯減少第155頁/共183頁細(xì)胞水平（細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等）組織水平研究分子水平研究染色體水平DNA水平RNA水平蛋白水平第156頁/共183頁（二）高通量技術(shù)在腫瘤研究中的應(yīng)用1.常用分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用重組DNA技術(shù)PCR,RT-PCR,PCR-SSCPSouthernblot,NorthernblotWesternblot第157頁/共183頁2.高通量技術(shù)的應(yīng)用染色體、DNA水平(Genomics):比較基因組雜交(CGH)RNA水平(Transcriptomics):差異顯示(DD-PCR),抑制消減雜交(SSH)，基因表達(dá)系列分析(SAGE),基因芯片(cDNAarray).蛋白質(zhì)水平(Proteomics):2-Dgels第158頁/共183頁比較基因組雜交(ComparativeGenomicHybridization,CGH)

CGH原理：將兩種不同熒光標(biāo)記的基因組DNA等比例與正常分裂中期染色體競(jìng)爭(zhēng)雜交，分析每條染色體上熒光強(qiáng)度比率，推測(cè)待檢DNA拷貝數(shù)變化。第159頁/共183頁基本方法：正常中期染色體制備基因組DNA分離DNA標(biāo)記雜交和染色熒光鏡檢和圖象分析第160頁/共183頁TissueMicrodissection

equipments第161頁/共183頁TissueMicrodissection

Analysisofsinglecellbyimmunohistochemicalstain(p53)V.

Sequenceanalysisto