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文檔簡介
光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)早期復(fù)式鏡
利用可見光(380~760納米波長)照明,使微小物體放大成像的儀器。這種放大像可用肉眼觀察、攝影或用光電管以及其他接受器進(jìn)行探測。(見圖R.虎克在17世紀(jì)中期制做的復(fù)式顯微鏡、19世紀(jì)中期的顯微鏡、20世紀(jì)初期的顯微鏡,數(shù)值孔徑達(dá)、帶自動照相機(jī)的光學(xué)顯微鏡、裝有場發(fā)射槍的掃描電子顯微鏡,分辨率為2nm、超高壓透射電子顯微鏡,加速電壓可達(dá)2000kV)
基本結(jié)構(gòu)可分為簡單和復(fù)式兩種類型。簡單顯微鏡即放大鏡,放置于物體和肉眼之間,使微小物體放大成虛像。復(fù)式顯微鏡由兩組透鏡或透鏡系統(tǒng)組成。第一組透鏡(即物鏡)形成物體的放大像,第二組透鏡(即目鏡)放大第一組透鏡形成的像。典型的復(fù)式光學(xué)顯微鏡由支架、反光鏡、聚光鏡、載物臺、鏡筒、物鏡、目鏡、以及調(diào)節(jié)鏡筒或載物臺移動的機(jī)械裝置組成。反光鏡的作用是使光線通過反射面進(jìn)入儀器;載物臺下的聚光鏡,可增強(qiáng)對樣品的照明能力;物鏡在鏡筒中形成一個中間的實像;目鏡則放大中間像,在接近樣品平面處形成一個虛像(當(dāng)用肉眼觀察時),或在目鏡上方的照相底片平面上形成一個實像。
性能除了能放大物體外,還應(yīng)具有良好的分辯力以及形成好的反差像。
分辨力指能夠分辨出兩個相距最近的物點的能力。可由下式表示:
兩物點的最小分辨距離=K·λ/n·sinαλ為成像光線的波長,n為樣品周圍介質(zhì)的折射率,α是進(jìn)入物鏡光錐的半角,K為常數(shù),約在~之間,n·sinα為物鏡的數(shù)值孔徑(常用.表示),用于測定物鏡的分辨力。數(shù)值孔徑越大,能夠分辨出二物點之間的距離則越小,因而分辨力就越強(qiáng)。光學(xué)顯微鏡的最小分辨距離為微米,如果小于這個距離就不能分辨。
幾種特殊類型的光學(xué)顯微鏡
暗視場顯微鏡
使用特殊的暗視場聚光鏡使照明光線偏移而不進(jìn)入物鏡,只有樣品的散射光進(jìn)入物鏡。因而在暗背景上得到亮的像,與暗視場照明相反,照明的光線直接到達(dá)成像平面的,稱明視場照明。
暗視場顯微鏡主要用于觀察結(jié)構(gòu)和折射率變化有關(guān)的物體,如硅藻、放射蟲類、細(xì)菌等具有規(guī)律結(jié)構(gòu)的單細(xì)胞生物以及細(xì)胞中的線狀結(jié)構(gòu),如鞭毛、纖維等。用暗視場顯微鏡還可觀察到物鏡分辨極限以下的質(zhì)點,但不適用于觀察染色的標(biāo)本。
相差顯微鏡利用物體不同結(jié)構(gòu)成分之間的折射率和厚度的差別,把通過物體不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹ü鈴?qiáng)度)的差別,經(jīng)過帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實現(xiàn)觀測的顯微鏡。主要用于觀察活細(xì)胞或不染色的組織切片,有時也可用于觀察缺少反差的染色樣品。
干涉顯微鏡
采用通過樣品內(nèi)和樣品外的相干光束產(chǎn)生干涉的方法,把相位差(或光程差)轉(zhuǎn)換為振幅(光強(qiáng)度)變化的顯微鏡,根據(jù)干涉圖形可分辨出樣品中的結(jié)構(gòu)(圖2f人口腔上皮細(xì)胞顯微攝影圖像),并可測定樣品中一定區(qū)域內(nèi)的相位差或光程差。由于分開光束的方法不同,有不同類型的干涉顯微鏡,以及用于測定非均勻樣品的積分顯微鏡干涉儀。干涉顯微鏡主要用于測定活的或未固定的相互分散的細(xì)胞或組織的厚度或折射率。熒光顯微鏡
用激發(fā)光照射樣品,根據(jù)樣品產(chǎn)生的熒光進(jìn)行觀察的顯微鏡(圖2e人口腔上皮細(xì)胞顯微攝影圖像)。生物學(xué)、醫(yī)學(xué)中應(yīng)用的熒光有自發(fā)熒光、誘發(fā)熒光(包括酶或化學(xué)誘發(fā))、熒光著色、免疫熒光等。熒光顯微鏡激發(fā)光照射的方式,有透射和落射兩種。
顯微鏡可根據(jù)不同用途對各種結(jié)構(gòu)作適當(dāng)?shù)母淖儯纬稍S多其他類型。如比較顯微鏡、倒置顯微鏡、解剖體視顯微鏡、毛細(xì)管顯微鏡以及離心顯微鏡等。近年來在光學(xué)顯微術(shù)的重大進(jìn)展是共焦激光掃描顯微鏡(Confocallaserscanningmicroc
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