李斯特氏菌特征格氏李斯特氏菌英諾克李斯特氏菌綿羊李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌默氏李斯特氏菌西爾李斯特氏菌威爾斯李斯特氏菌β-溶血－－＋＋－＋－CAMP(Staphylococcusaureus)－－－＋－＋－CAMP(Rhodococcusequi)－－＋－－－－甘露醇＋－－－＋－－α甲基-D－甘露糖苷ND＋－＋ND－＋L-鼠李糖－d－＋d－d可溶性淀粉＋－－－＋NDNDD-木糖－－＋－－＋＋馬尿酸鹽水解－＋＋＋－NDND硝酸鹽還原－－－－＋NDND小鼠致病力－－＋＋－－－當(dāng)前1頁，總共25頁。樣品的存放與制備冷凍樣品：應(yīng)于2℃～5℃解凍，且不超過18小時；若不能及時檢驗，應(yīng)置于－15℃保存。非冷凍的易腐樣品：盡可能及時檢驗，若不能及時檢驗，應(yīng)置于4℃冰箱保存，在24h之內(nèi)檢驗。無菌取樣品25g(mL)放入滅菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋中加225mLFB1增菌液中，充分均質(zhì)。當(dāng)前2頁，總共25頁。增菌培養(yǎng)225mLFB130℃±1℃培養(yǎng)25h±1h，吸取1mL，加入10mLFB2增菌液中30℃±1℃二次增菌25h±1h。當(dāng)前3頁，總共25頁。VIDAS快速篩選（可選）FB2增菌液進(jìn)行VIDAS快速篩選。篩選為陰性的結(jié)果可直接報告未檢出。篩選為陽性的結(jié)果繼續(xù)分離培養(yǎng)和鑒定。當(dāng)前4頁，總共25頁。分離培養(yǎng)取增菌液一環(huán)，劃線分離于選擇性培養(yǎng)基OXA、PALCAM上，35℃±1℃培養(yǎng)24h～48h。菌落形態(tài)：24h后菌落呈現(xiàn)黑色，直徑為1mm，在其周圍形成一個黑色環(huán)。培養(yǎng)48h，菌落仍成黑色，直徑2mm～3mm，除在菌落周圍有一環(huán)外，在菌落中心部位的深層也形成黑點(diǎn)。挑取5個或更多的可疑菌落，接種于TSA-YE。當(dāng)前5頁，總共25頁。鑒定藍(lán)色菌落檢驗用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈現(xiàn)藍(lán)灰色到藍(lán)色。（設(shè)標(biāo)準(zhǔn)菌株對照）當(dāng)前6頁，總共25頁。鑒定典型運(yùn)動鏡檢李斯特氏菌為短棒狀桿菌，可見輕微的旋轉(zhuǎn)翻滾。（設(shè)標(biāo)準(zhǔn)菌株對照）注：壓片法或懸滴法暗光當(dāng)前7頁，總共25頁。鑒定革蘭氏染色短桿狀革蘭氏陽性反應(yīng)注：陳舊培養(yǎng)物多轉(zhuǎn)為陰性。當(dāng)前8頁，總共25頁。鑒定過氧化氫酶試驗挑取TSA-YE平板上的菌落于潔凈載玻片上，滴加1滴3％的過氧化氫溶液，李斯特氏菌呈過氧化氫酶陽性反應(yīng)。當(dāng)前9頁，總共25頁。鑒定溶血試驗刺種7％羊血瓊脂平板，并刺種陽性對照菌（單核細(xì)胞增生李斯特氏菌和綿羊李斯特氏菌）和陰性對照菌（英諾克李斯特氏菌），30℃培養(yǎng)24h～48h。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌窄小的β溶血環(huán)

西爾李斯特氏菌窄小的β溶血環(huán)

綿羊李斯特氏菌大的β溶血環(huán)

其他不溶血當(dāng)前10頁，總共25頁。鑒定動力試驗穿刺SIM半固體培養(yǎng)基，于室溫（20℃～25℃）培養(yǎng)48h。李斯特氏菌有動力，呈典型的傘狀生長。當(dāng)前11頁，總共25頁。鑒定硝酸鹽還原試驗接種于硝酸鹽肉湯，于35℃培養(yǎng)5d。李斯特氏菌為陰性。當(dāng)前12頁，總共25頁。鑒定MR－VP試驗接種于MR－VP肉湯中，于35℃培養(yǎng)48h。李斯特氏菌為陽性反應(yīng)。當(dāng)前13頁，總共25頁。鑒定三糖鐵試驗接種于TSI，35℃培養(yǎng)5d。李斯特氏菌斜面和底層產(chǎn)酸，不產(chǎn)硫化氫。當(dāng)前14頁，總共25頁。鑒定尿素酶試驗穿刺尿素瓊脂斜面，于35℃培養(yǎng)5d。李斯特氏菌尿素酶試驗陰性。當(dāng)前15頁，總共25頁。鑒定糖發(fā)酵試驗接種0.5%葡萄糖、麥芽糖、七葉苷、甘露醇、鼠李糖、木糖發(fā)酵管內(nèi)，35℃培養(yǎng)24h～48h，陰性繼續(xù)培養(yǎng)到第5天。當(dāng)前16頁，總共25頁。李斯特氏菌菌種鑒別特征中文菌名學(xué)名藍(lán)色菌落典型運(yùn)動過氧化氫酶革蘭氏染色溶血試驗動力試驗?zāi)蛩孛冈囼炏跛猁}還原MR∣VP試驗三糖鐵試驗糖發(fā)酵利用葡萄糖麥芽糖七葉苷甘露醇鼠李糖木糖單核細(xì)胞增生李斯特氏菌L.monocytogenes＋＋＋＋＋＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋－＋－綿羊李斯特氏菌L.ivanovii＋＋＋＋＋＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋－－＋英諾克李斯特氏菌L.innocua＋＋＋＋－＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋－V－威爾斯李斯特氏菌L.welshimeri＋＋＋＋－＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋－V＋西爾李斯特氏菌L.seeligeri＋＋＋＋＋＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋－－＋格氏李斯特氏菌L.grayi＋＋＋＋－＋－－＋/＋產(chǎn)酸，不產(chǎn)H2S＋＋＋＋－－當(dāng)前17頁，總共25頁。鑒定協(xié)同溶血試驗（cAMP）在羊血瓊脂平板上各劃一直線，使兩線平行，在平行線上分別接種金黃色葡萄球菌ATCC49444和馬紅球菌ATCC6939，在兩線之間垂直接種，與兩線相近但不相交，于35℃培養(yǎng)24h～48h后，觀察相交處溶血情況。L.monocytogenesL.innocuaL.ivanovii窄的β溶血帶不溶血寬的β溶血帶當(dāng)前18頁，總共25頁。CAMP(Staphylococcusaureus)

StaphylococcusaureusListeriamonocytogenes當(dāng)前19頁，總共25頁。鑒定API鑒定試驗可代替硝酸鹽還原、MR-VP、三糖鐵、糖發(fā)酵、尿素酶和CAMP等試驗。當(dāng)前20頁，總共25頁。鑒定血清學(xué)檢驗菌懸液于80℃水域中加熱1h，離心棄上清，剩余液與沉淀混勻制成菌懸液，進(jìn)行血清學(xué)玻片凝集試驗。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B，1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C，4D，4E，7當(dāng)前21頁，總共25頁。質(zhì)量控制每次檢驗均需用標(biāo)準(zhǔn)陽性菌株和陰性菌株進(jìn)行質(zhì)量控制。樣品制備的同時，在空白對照FB1增菌液中加入新鮮配制的每毫升含有10個～100個單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的稀釋液1mL和陰性培養(yǎng)物，按檢驗程序進(jìn)行同步檢驗。當(dāng)前22頁，總共25頁。報告結(jié)果協(xié)同溶血試驗、血清學(xué)試驗可根據(jù)需要進(jìn)行，常規(guī)檢驗可不進(jìn)行這些試驗。報告陽性結(jié)果：檢出單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。報告陰性結(jié)果：未檢出單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。當(dāng)前23頁，總共25頁。新舊標(biāo)準(zhǔn)的主要不同增菌培養(yǎng)基