第九章

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

中南大學湘雅醫(yī)學院醫(yī)學檢驗系李登清

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

概念：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。多為條件致病菌。

近年，不發(fā)酵菌在革蘭陰性桿菌中所占的比例明顯增加，已達三分之一，其耐藥程度比較突出，已成為臨床抗菌治療的難點。不發(fā)酵革蘭陰性桿菌假單胞菌屬

(Pseudomonas)產(chǎn)堿桿菌屬

(Alcaligenes)不動桿菌屬

(Acinetobacter)莫拉菌屬

(Moraxella)無色桿菌屬

(Achromobacter)金氏桿菌屬

(Kingella)黃桿菌屬

(Flavobacterium)艾肯菌屬

(Eikenella)土壤桿菌屬

(Agrobacterium)黃單胞菌屬

(Xanthomonas)叢毛單胞菌屬

(Comamonas)腸道桿菌、不發(fā)酵菌、弧菌科鑒別鑒定試驗?zāi)c桿菌科不發(fā)酵菌弧菌科氧化酶－＋＋葡萄糖氧化/發(fā)酵（O/F）FO／－F鞭毛周鞭毛單、叢、周單、叢表9-1常見不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定試驗假單胞菌屬無色桿菌屬黃桿菌屬不動桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬叢毛菌屬莫拉菌屬氧化酶+++/--+++/-O/F試驗O/-OOO/----動力+/-+/-+/--++-注：+：90%以上陽性；-：10%以下的陽性；+/-：約70%為陽性；

O：為氧化;F：為發(fā)酵不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

不發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動力+OXOX－不動桿菌屬+葡萄糖產(chǎn)酸黃色素莫拉氏菌屬黃桿菌屬－－－++端鞭毛－+－++產(chǎn)堿桿菌屬尿素－+常見不發(fā)酵菌的鑒定雙岐索引

第一節(jié)假單胞菌屬(Pseudomonas)

一、概述

1.分類

2.臨床意義

3.微生物特性

4.微生物檢驗

(1)檢驗程序

(2)鑒定

(3)藥物敏感性試驗(AntibacterialSusceptibilityTest)1.分類伯杰分類手冊，假單菌屬按rRNA同源性分為5群及末確定rRNA同源群有關(guān)的種。現(xiàn)把馬勒伯克霍爾德菌（Ⅱ

群）等7個菌種，嗜麥芽窄食單胞菌（Ⅴ

群）等64個菌種從假單菌屬中分出，獨立為伯克霍爾德菌屬和窄食單胞菌屬。

按rRNA同源性分五個rRNA同源群：銅綠假單胞菌熒光假單胞菌DNA同源群斯氏假單胞菌DNA同源群產(chǎn)堿假單胞菌DNA同源群

I群：12個菌種

Ⅱ群：已從假單胞菌屬中分出。

屬于伯克霍爾德菌屬（Burkhokderia），７個菌種。其中類鼻疽伯克霍爾德菌、洋蔥伯克霍爾德菌、唐菖蒲伯克霍爾德菌和皮氏伯克霍爾德菌與人類疾病相關(guān)。

鼻疽伯克菌是動物專性寄生菌，在極少數(shù)情況下可傳播給人（通常通過皮膚的磨損），是本菌屬中唯一無動力的種，本屬其他菌種與植物有關(guān)而與人類疾病無關(guān)。

Ⅲ群：屬于叢毛單胞菌科（Comamonadaceae），本科包括兩個菌屬：叢毛單胞菌屬（Comamonas）和食酸叢毛菌屬（Acidovorax），前者包括土生叢毛單胞菌等和后者包括敏捷食酸叢毛菌等共7個菌種。

Ⅳ群：屬于短波單胞菌屬（Brevundimonas），包括微小假單胞菌等8個菌種。缺陷短波單胞菌和泡囊短波單胞菌。

Ⅴ群：已從假單胞菌屬中分出。

屬于窄食單胞菌屬（Stenotrophomonas），包括嗜麥芽窄食單胞菌等64個菌種。2.臨床意義假單胞菌屬分布廣泛，在人類不發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，是醫(yī)院感染的主要病原菌。還有：熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌，也是醫(yī)院感染的常見病原菌。

內(nèi)毒素脂多糖

H抗原抗原構(gòu)造：原內(nèi)毒素蛋白（OEP）

O抗原抵抗力：較其他G－菌強，對多種消毒劑、抗生素不敏感，對多種抗生素耐藥。

56oC，1hr，可殺死。致病性

分布：自然界分布廣泛（醫(yī)院、人體皮膚、腸道）人體的正常菌群，人體抵抗力下降感染，主要致病物質(zhì)：內(nèi)毒素、莢膜、菌毛、胞外酶、外毒素，感染后：產(chǎn)生特異性抗體，

IgA：局部粘膜表面抗感染中性粒細胞：在抗銅綠假單胞菌感染中的吞噬作用

假單胞菌廣泛存在環(huán)境中，加之多種傳播途徑和污染，因此易感染，特別在由各種原因所致的人體抵抗力低下時引起皮膚感染、呼吸道感染、泌尿道感染、燒傷感染等，亦可導(dǎo)致菌血癥、心內(nèi)膜炎、囊性纖維變性，該菌引起的慢性肺部感染占有較大的比例；在AIDS病中，常發(fā)生感染。感染眼部的銅綠假單胞菌，可以合成膠原酶，以致引起角膜穿孔而失明。在假單胞菌屬的感染中銅綠假單胞菌的感染占70％。防治原則：

主要傳播途徑：污染醫(yī)院器械、帶菌醫(yī)護人員。

OEP疫苗：保護范圍廣、不受菌型限制、毒性低治療：多粘菌素、慶大霉素等。3.微生物特性200多種，自然界分布廣泛，革蘭陰性小桿菌、長短不一，形態(tài)各異，無芽胞、有端鞭毛或叢鞭毛一群需氧、營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上均能生長，最適生長溫度為35℃，產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿玉紅素、熒光素、膿褐素能氧化分解葡萄糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、麥芽糖、甘露醇觸酶陽性、氧化酶陽性，吲哚、甲基紅、VP均（--）多數(shù)為條件致病菌，與人類致病有關(guān)的有：銅綠假單胞菌，最常見熒光假單胞菌，較常見惡臭假單胞菌，較常見產(chǎn)堿假單胞菌，較常見

4．微生物檢驗

(1)檢驗程序

(2)形態(tài)染色與培養(yǎng)鑒定革蘭陰性、較細長、直或微彎、散在排列、無芽胞。有端鞭毛或叢鞭毛。專性需氧，生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35℃。產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿玉紅素、熒光素、膿褐素。見P135表9-3(3)藥物敏感性試驗按

CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）推薦，分為4組：A、B、C、Ｄ／Ｕ。假單胞菌Polarflagellae

A組：首選頭孢他定、美洛西林、替卡西林、哌拉西林等。B組：有頭孢吡肟、頭孢哌酮、氨曲南、亞胺培南、阿米卡星、妥布霉素、環(huán)丙沙星等。C組：頭孢噻肟、頭孢曲松等。D組：用于尿感藥有羧芐西林、頭孢噻肟、諾氟沙星、CoSMZ等。42℃生長明膠液化鞭毛++極單鞭毛···銅綠假單胞菌-+極多鞭毛···熒光假單胞菌--極多鞭毛···惡臭假單胞菌OF試驗：O氧化酶：+精氨酸水解：+葡萄糖酸氧化：+氮氣：+醫(yī)院環(huán)境及用品、臨床標本分離培養(yǎng)基涂片檢查肉湯培養(yǎng)基血瓊脂平板SS、麥康凱瓊脂平板挑選可疑菌落（37℃培養(yǎng)18－24h觀察有無色素產(chǎn)生，色素鑒別接種金氏A、B培養(yǎng)基）無色素菌株-42℃+綠膿素+綠膿菌熒光素銅綠假單胞菌假單胞菌鑒定程序假單胞菌鑒定

本屬：形態(tài)染色：1.革蘭陰性、無芽胞、較細長、直或微彎、散在排列，無芽胞。

2.無芽胞。有端鞭毛或叢鞭毛。

3.專性需氧，產(chǎn)生各種水溶性色素。生化鑒定：1.能分解葡萄糖、產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣,2.觸酶和氧化酶陽性。

3.吲哚、甲基紅、VP反應(yīng)陰性?，F(xiàn)自動化鑒定儀可在4—12小時做出鑒定。二、銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）原稱綠膿桿菌。在自然界分布廣泛，易生存，為土壤中存在的最常見的細菌之一。各種水、空氣、正常人的皮膚、呼吸道和腸道等都有本菌存在。本菌存在的重要條件是潮濕的環(huán)境。抵抗力強，因此很容易污染器械而造成感染機會。醫(yī)院感染的主要病原菌之一條件致病菌。1、臨床意義：

本菌為條件致病菌，是醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一。

銅綠假單胞菌可從醫(yī)院內(nèi)許多消毒不嚴的器皿和溶液中分離出來，常見為水溶液，包括洗滌水、消毒液和液體藥物等，因此，要強調(diào)嚴格無菌操作，以預(yù)防控制感染。醫(yī)院內(nèi)銅綠假單胞菌所致的肺部感染常見的入侵途徑是霧化吸入、氧氣吸入，各種侵襲性檢查和治療，如纖維支氣管鏡、導(dǎo)管、膽道、手術(shù)后引流等，破壞了機體皮膚或黏膜屏障，常引起本菌侵襲。

嚴重的銅綠假單胞菌感染：常發(fā)生在局部組織損傷或抵抗力降低的患者，如燒傷病人、各種癌腫和患多種慢性疾病老年患者和應(yīng)用廣譜抗生素、激素、抗腫瘤藥及免疫抑制劑等患者；早產(chǎn)、先天畸形兒童和囊性纖維化等疾病患者，也易發(fā)生嚴重的銅綠假單胞菌感染，肺部感染常見。2.致病機制

粘附素：菌毛分解上皮細胞神經(jīng)氨酸酶，致細菌侵入粘附作用。結(jié)構(gòu)成分多糖莢膜樣物質(zhì)：抗吞噬細胞吞噬，粘附損傷細胞，與呼吸道感染有關(guān)。

內(nèi)毒素：脂質(zhì)A有多種生物學效應(yīng)。毒力因子毒素外毒素：A阻止真核細胞蛋白質(zhì)合成。

S干擾吞噬殺菌作用。綠膿菌素：具有氧化還原活性，催化超氧化物和過氧化氫產(chǎn)生有毒氧基團，致組織損傷。彈性蛋白酶:絲氨酸蛋白酶（Las-A）降解彈性蛋白，酶類鋅金屬蛋白酶（Las-B）肺損傷、出血。磷脂酶C:分解脂質(zhì)和卵磷脂，損傷組織細胞。侵襲方式：（1）黏附和定植

形成黏附的條件包括：①銅綠假單胞菌表面的莢膜多糖物質(zhì)：阻止白細胞和吞噬細胞的吞噬作用；②細菌表面的黏附素（菌毛）：菌毛的神經(jīng)氨酸酶分解上皮細胞表面的神經(jīng)氨酸酶，以促進細菌侵入和黏附作用；③宿主防御機制異常：粘膜、組織損傷，使細菌得以定植，并保持和上皮細胞長時間的接觸。如人體抵抗力降低或細菌毒力強，數(shù)量多，就可在血中生長繁殖，發(fā)生敗血癥。入侵門戶：完整的皮膚黏膜是天然的屏障，故銅綠假單胞菌很少成為健康人的原發(fā)病原菌，但改變或損傷宿主正常的防御機制，如皮膚黏膜破壞、留置導(dǎo)尿管、氣管切開插管或免疫機制缺損如粒細胞缺乏、低蛋白血癥、各種腫瘤患者、應(yīng)用激素和廣譜抗生素的患者，?？蓪?dǎo)致感染。燒傷焦痂、嬰兒或兒童的皮膚、臍帶和腸道、老年人的尿道則是較常見的原發(fā)病灶或入侵門戶。（2）外毒素A

：為主要毒力因子，是銅綠假單胞菌產(chǎn)生的最強有力毒素，可抑制蛋白質(zhì)合成，對皮膚黏膜有壞死作用，約90%菌株產(chǎn)生外毒素A，在燒傷病人，其致死作用特別突出。（3）其他：有蛋白酶、胞外酶S、溶血素、腸毒素、色素、殺白細胞素、內(nèi)毒素等。銅綠假單胞菌對外界環(huán)境抵抗力較強，在潮濕處能長期生存，對紫外線不敏感，濕熱55℃1小時才被殺滅?？乖裕篐抗原

O抗原外膜蛋白保護性Ag

脂多糖特異性多重耐藥性：初代敏感菌株耐藥治療3～4天

耐藥機制：為多重耐藥①產(chǎn)酶：蛋白酶、磷脂酶、金屬酶，毒素和ADP糖基轉(zhuǎn)移酶等破壞組織、細胞。②外膜、胞質(zhì)及內(nèi)膜所含的致病因素：如B內(nèi)酰胺酶、外膜蛋白及青霉素結(jié)合蛋白（PBPs）。外膜蛋白（Outermembraneproteins，OMP）的改變?yōu)橹饕獧C制。③生物膜障礙及主動泵出機制：對喹諾酮類，阻止藥物到達靶位點。藥物泵出菌體外而耐藥。

④該菌所表達的藻酸鹽為主要成分的粘液性脂多糖基質(zhì)，還有鞭毛、菌毛等，可起粘附作用。⑤整合子：1類，3類。為移動的DNA序列，可捕獲外源基因并使之轉(zhuǎn)變?yōu)楣δ苄曰虻谋磉_單位。可通過整合子的位點發(fā)生特異性基因重組。治療

對銅綠假單胞菌作用較強的抗菌藥物有：半合成青霉素，如：阿洛西林和哌拉西林，其中以哌拉西林為最常用。第三代頭孢菌素中以頭孢他啶、頭孢哌酮的作用較強。其他β-內(nèi)酰胺類藥物中亞胺培南及氨曲南;氨基糖苷類如：慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星和異帕米星;氟喹酮類如：氧氟沙星、環(huán)丙沙星及氟羅沙星等。

形態(tài)染色：革蘭染色陰性，為球桿狀或長絲狀，大小不一，成雙或短鏈排列，大小0.5～1.0μm×1.5～5.0μm。單端有1～3根鞭毛，有動力，運動活潑，無芽胞，臨床分離的菌株常有菌毛和微莢膜。

3.微生物學特性培養(yǎng)特點：專性需氧菌、營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好，

25℃~42℃能生長。氧化分解葡萄糖、木糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣

氧化酶（十）、明膠液化（十），硝酸鹽還原（十）產(chǎn)生氮氣、精氨酸雙水解酶（十）、利用枸櫞酸鹽。吲哚（一）。

1.肉浸湯2.胰化酪蛋白大豆肉湯37℃培養(yǎng)18－24h挑選菌落鑒定分型血清學噬菌體綠膿素初步鑒定菌落特征、色素、綠膿素：+涂片、革蘭染色、氧化酶：+最后鑒定生化反應(yīng)腦脊液、胸（腹）水、膿液、分泌物、痰、尿液、十二指腸引流液血液、環(huán)境用品增菌分離培養(yǎng)：直接涂片革蘭染色糞便血瓊脂平板SS、麥康凱分離培養(yǎng)：37℃如生長4.微生物檢驗

銅綠假單胞菌檢驗程序：（1）標本采集

按疾病和檢查目的分別采取不同的臨床標本，如傷口分泌物、尿液、膿及穿刺液、血液、腦脊液、胸腹水、關(guān)節(jié)液等。醫(yī)院環(huán)境檢測可從空氣、水、物體表面等處采樣。（2）標本直接檢查1）顯微鏡涂片染色革蘭陰性，長短不一，為球桿狀或長絲狀，大小不一，成雙或短鏈排列。單鞭毛，有動力，運動活潑，無芽胞。銅綠假單胞菌革蘭染色2）抗原檢測：

血清學分型：根據(jù)細菌的菌體0抗原及鞭毛H抗原分型，其中菌體0抗原有兩種成分，一為內(nèi)毒素蛋白，是一種保護性抗原，另一為酯多糖，具有特異性，根據(jù)其抗原結(jié)構(gòu)可將銅綠假單胞菌分為20個血清型。

噬菌體分型：目前有24種，分型率可達90％3）核酸檢測：質(zhì)粒指紋圖分析：質(zhì)子分子量大小及數(shù)量，確定菌株來源;脈沖場凝膠電泳分析（PFGEpulsedfieldgelelectrophoresis）：細菌來源、突變、耐藥性;基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA分型鑒定分子生物學快速鑒定技術(shù)應(yīng)用。

（3）分離培養(yǎng)與鑒定：營養(yǎng)無特殊要求，普通培養(yǎng)基上均能生長。生長溫度25℃～42℃，最適為25℃～30℃。生化鑒定：氧化分解葡萄糖、木糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，氧化酶陽性、明膠液化（十），硝酸鹽還原（十）并產(chǎn)生氮氣、精氨酸雙水解酶（十）、利用枸櫞酸鹽。吲哚（一）。

血瓊脂平板培養(yǎng)基：18~24小時可見扁平、濕潤、有金屬光澤、有特色氣味的灰綠色或藍綠色菌落，周圍有透明溶血環(huán)。普通瓊脂平板培養(yǎng)基：生長良好，18~24小時可見園形、大小不一、邊緣不齊、扁平、隆起、光滑、濕潤、有金屬光澤、常呈融合狀態(tài)的菌落。

麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：18~24小時可見微小無光澤、半透明菌落。48小時后菌落中心常呈棕綠色。

SS瓊脂培養(yǎng)基：可見類似沙門氏菌落。

在血平板、麥康凱平板上，均可形成5種不同形態(tài)的菌落：①典型型，菌落呈灰綠色，大小不一，扁平濕潤，邊緣不規(guī)則，呈傘狀伸展，表面?？梢娊饘俟鉂?；②大腸菌樣型，菌落圓形凸起，灰白色半透明，似大腸埃希菌菌落；③黏液型，菌落光滑凸起，呈黏液狀；④侏儒型，細小，無光澤半透明菌落；⑤粗糙型，菌落中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)

綠膿素銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)綠膿素銅綠假單胞菌（P.aeruginosa)

（4）檢驗結(jié)果分析與報告：

診斷一定要結(jié)合臨床，血、尿、體液分離到菌，并反復(fù)檢測來確定。小兒可腹瀉：與霍亂或沙門菌區(qū)別。兒童正常皮膚帶菌率高。治療過程中，3－4天后重復(fù)藥敏試驗。為多重耐藥菌。其他假單胞菌熒光假單胞菌1．細菌特性

革蘭陰性桿菌，呈單個或成對排列，一端叢毛菌，運動活潑，偶見無鞭毛無動力的菌株。

專性需氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上可生長，在麥康凱和SS平板上亦可生長，最適生長溫度為25℃~30℃，大多數(shù)菌株在4℃生長，37℃或42℃不生長。

約94%的菌株產(chǎn)生水溶性熒光素（青膿素），在紫外線（360nm）照射下呈黃綠色熒光，有些菌株產(chǎn)生藍色色素，不擴散。

氧化酶陽性，氧化葡萄糖、木糖產(chǎn)酸，對麥芽糖多不分解，水解精氨酸，多能液化明膠，卵磷酯酶陽性。本菌對卡那霉素敏感。2．臨床意義

熒光假單胞菌（P.fluorescens）存在于土壤和水等環(huán)境中，常與食物（雞蛋、血、牛乳等）腐敗有關(guān)，可作為咽部的正常菌群存在，是人類少見的條件致病菌，偶從泌尿道感染病人尿中分離出。

由于具有嗜冷性，可在冰箱儲存血液中繁殖，若輸入含有此菌的血庫血液，可導(dǎo)致病人不可逆性的休克而死亡。3．微生物學檢驗

尿、分泌物等臨床標本可直接接種在血平板上;

血液標本可先于20℃~30℃進行增菌后，再接種血平板分離。不能在35℃或37℃進行培養(yǎng)，以免發(fā)生假陰性。

本菌鞭毛3根以上，42℃不能生長，可產(chǎn)生熒光素，不產(chǎn)生綠膿素，可以與銅綠假單胞菌相區(qū)別。

本菌的最低鑒定特征有：單端鞭毛3根以上，動力陽性；氧化分解葡萄糖，不分解麥芽糖，氧化酶陽性，精氨酸水解陽性，明膠液化陽性；可產(chǎn)生熒光素，不產(chǎn)生綠膿素，4℃生長，42℃不生長。惡臭假單胞菌1．細菌特性

革蘭陰性桿菌，有些菌株為卵圓形，單端叢毛菌，運動活潑。

專性需氧，最適生長溫度25℃~30℃，42℃不生長，4℃生長不定，菌落與銅綠假單胞菌相似，但只產(chǎn)生熒光素（青膿素），不產(chǎn)生綠膿素，借此可與銅綠假單胞菌相區(qū)別，

其陳舊培養(yǎng)物有腥臭味。2．臨床意義

惡臭假單胞菌（P.putica）為魚的一種致病菌，常從腐敗的魚中檢出，可作為人類咽部的正常菌群，是人類少見的條件致病菌，偶從人類尿道感染、皮膚感染和骨髓炎標本中分離出，分泌物有腥臭味。3．微生物學檢驗

鑒定中注意與其他假單胞菌相區(qū)別，只產(chǎn)生熒光素不產(chǎn)生綠膿素，42℃不生長可與銅綠假單胞菌區(qū)別；

不液化明膠、不產(chǎn)生卵磷酯酶、陳舊培養(yǎng)物上有腥臭味，有別于熒光假單胞菌。斯氏假單胞菌1．細菌特性

革蘭陰性桿菌，一端單鞭毛，運動活潑；

最適生長溫度35℃，4℃不生長，大部分菌株在42℃生長，氧化葡萄糖產(chǎn)酸，在6.5%高鹽培養(yǎng)基中可生長；營養(yǎng)要求不高，普通平板可生長，新分離菌株在培養(yǎng)基上可形成特征性干燥、皺縮樣菌落，黏附于瓊脂表面難以移動;

可產(chǎn)生黃色色素，無熒光。2．臨床意義

斯氏假單胞菌(P.stutizeri)存在于土壤和水中，在醫(yī)院設(shè)備及各種臨床標本中亦有發(fā)現(xiàn)，本菌引起的感染并不多見，偶可引起抵抗力低下患者傷口、泌尿道、肺部感染等。3.微生物學檢驗

注意與曼多辛假單胞菌相鑒別，其特征性菌落，革蘭陰性桿菌，一端單鞭毛，運動活潑；

精氨酸雙水解試驗陽性、不分解麥芽糖和甘露醇，有別于曼多辛假單胞菌。第二節(jié)伯克霍爾德菌屬屬于rRNA第II群。洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacepacia)馬勒伯克霍爾德菌(Burkholderiamallei)偽馬勒伯克霍爾德菌(Burrkholderiapseudomeuei)

克霍爾德菌屬一、臨床意義1．洋蔥伯克霍爾德菌醫(yī)院感染的常見病原菌之一；引起敗血癥、肺炎、傷口感染、膿腫等；囊性纖維化和慢性肉芽腫患者呼吸道感染的機會致病菌。為人獸共患病原菌?？嘶魻柕戮鷮?/p>

2．馬勒伯與偽馬勒伯克霍爾德菌鼻疽病與類鼻疽病的病原體；（肺鼻疽病、皮膚鼻疽病、內(nèi)臟膿腫、菌血癥、膿毒血癥）。人類感染是經(jīng)傷口、黏膜、呼吸道。急性患者可有高熱、衰竭等全身癥狀。為人獸共患病原菌；可能成為生物恐怖的細菌。伯克霍爾德菌屬

二、微生物檢驗1．顯微鏡涂片染色用熒光直接法染色快速特異。革蘭陰性桿菌，細長稍彎、兩端鈍圓、單個或成對排列;無芽胞、無莢膜;馬勒伯克霍爾德菌無鞭毛無動力，偽馬勒伯克霍爾德菌有端叢鞭毛1-4根。洋蔥伯克霍爾德菌革蘭染色伯克霍爾德菌

2．抗原檢測

馬勒伯克霍爾德菌與偽馬勒伯克霍爾德菌

熒光直接法染色鏡檢，可快速診斷且特異。伯克霍爾德菌屬

3．分離培養(yǎng)與鑒定

需氧菌；生長溫度35℃。（血瓊脂、麥康凱）洋蔥伯克霍爾德菌生長較緩慢；菌落點狀和粘著性，多數(shù)不產(chǎn)生色素，在含鐵培養(yǎng)基上可產(chǎn)生亮黃色色素馬勒鼻伯克霍爾德菌無鞭毛無動力，42℃不生長，營養(yǎng)要求高，不能在普通培養(yǎng)基上生長，不產(chǎn)生綠膿素和熒光素。偽馬勒鼻伯克霍爾德菌一端有叢鞭毛(1~4根)，有動力，4℃不能生長，營養(yǎng)要求低，在普通培養(yǎng)基、血瓊脂、麥康凱上均能生長。多數(shù)在普通培養(yǎng)基上形成圓形、突起、透明、有光澤，1-2mm菌落。生化鑒定：見P141表9-5

。第三節(jié)窄食單胞菌屬

一、分類

窄食單胞菌屬屬于rRNA同源群Ⅴ。有兩個菌種：嗜麥芽窄食單胞菌（S.maltophilia）和S.africana。臨床常見前者。

二、臨床意義

為條件致病菌呼吸道、泌尿道、傷口等部位感染，菌血癥及心內(nèi)膜炎。在不發(fā)酵菌引起的感染中，僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌，居臨床分離陽性率的第三位。嗜麥芽窄食單胞菌

三、微生物檢驗1．顯微鏡涂片染色革蘭陰性，端鞭毛，(1~8)根，有動力、無芽孢、無莢膜。嗜麥芽窄食單胞菌革蘭染色

嗜麥芽窄食單胞菌2．分離培養(yǎng)與鑒定（１）分離培養(yǎng)：血標本先增菌后分離培養(yǎng)，其他標本可直接接種到血瓊脂及選擇培養(yǎng)基。生長溫度為35℃，4℃不長，血瓊脂、普通培養(yǎng)基。菌落中等大小、圓形、光滑、濕潤、產(chǎn)生不溶血的黃色色素。嗜麥芽窄食單胞菌麥康凱培養(yǎng)基菌落

嗜麥芽窄食單胞菌

（２）生化鑒定

氧化酶陰性；液化明膠、水解七葉苷；賴氨酸脫羧酶陽性、氧化分解麥芽糖。四、藥物敏感試驗及結(jié)果解釋治療首選磺胺類：TMP/SMZ；喹锘酮類：環(huán)丙氟派酸或替卡西林/棒酸泰能(亞胺培南Imipenem)天然耐藥藥敏試驗紙片法僅有三種抗生素：頭孢他啶、米諾環(huán)素、復(fù)方磺胺有折點。其他藥敏試驗應(yīng)選用肉湯、瓊脂稀釋法作MIC，或采用E-TEST的方法。第四節(jié)不動桿菌屬

不動桿菌屬（Acinetobacter）歸于奈瑟菌科，1986年巴斯德研究所的Bouvet等根據(jù)DNA-DNA雜交和營養(yǎng)特征將不動桿菌屬分成19個基因種，但只有10個基因種有菌名。模式菌是醋酸鈣不動桿菌。

最常見的是鮑曼不動桿菌，它僅次于銅綠假單胞菌而居臨床分離陽性率第二位的不發(fā)酵菌。細菌特性

不動桿菌屬為一群：氧化酶陰性、硝酸鹽還原陰性、動力陰性。（三項試驗均為陰性者在革蘭陰性桿菌中極為罕見）。

革蘭染色陰性菌，多為球桿狀，常成雙排列，看似雙球菌，有時成絲狀或鏈狀。無芽胞、無鞭毛、無動力，黏液型菌株有莢膜。

專性需氧菌，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好，最適生長溫度35℃，可在麥康凱培養(yǎng)基上生長，菌落呈無色或淡粉紅色，但在SS上有些菌株生長不良。

一、分類：臨床常見：醋酸鈣不動桿菌(A.calcoaceticus)洛菲不動桿菌(A.lwoffi)溶血不動桿菌(A.haemolgticus)鮑曼不動桿菌(A.baumannii)瓊氏不動桿菌(A.junii)約翰遜不動桿菌(A.johnsonii)

二、臨床意義為條件致病菌，廣泛分布于自然界、醫(yī)院環(huán)境和健康人的皮膚。其感染率近年呈上升趨勢。

在臨床標本中，最常見的是鮑曼不動桿菌，它僅次于銅綠假單胞菌而居臨床分離陽性率第二位的不發(fā)酵菌。

醫(yī)院內(nèi)感染最常見的部位是呼吸道、尿道和傷口，如肺炎、尿路感染、皮膚和傷口感染、心內(nèi)膜炎、腦膜炎和腹膜炎等；

感染條件有抗生素治療、手術(shù)、應(yīng)用器械、ICU病房等；耐藥性不發(fā)酵菌中，僅本菌屬細菌與銅綠假單胞菌可采用Kirby-Bauer法做藥敏試驗。不動桿菌均對青霉素、氨芐西林和頭孢拉啶耐藥；大多數(shù)菌株對氯霉素耐藥，不同菌株對二代和三代頭孢菌素的耐藥性不同，所以，每個分離菌株均應(yīng)進行藥敏試驗。多重耐藥：最多見于鮑曼不動桿菌、醋酸鈣不動桿菌和溶血不動桿菌。

鮑曼氏不動桿菌，對全部氨基青霉素、一代二代頭孢菌素和一代喹諾酮類抗生素天然耐藥。三、生物學特性革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，常見成對排列，有時成絲狀或鏈狀，無芽胞，無鞭毛，無動力，專性需氧菌，生長溫度為35℃，普通培養(yǎng)基，麥康凱、血平板均生長，氧化酶陰性，動力陰性，硝酸鹽試驗陰性，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，有菌體和莢膜抗原。膿汁、分泌物、尿液腦脊液、血液直接涂片革蘭染色分離培養(yǎng)血液瓊脂平板麥康凱瓊脂平板增菌培養(yǎng)挑選可疑菌落最后鑒定生化反應(yīng)

初步鑒定KIA：底層斜面不變色氧化酶陰性硝酸鹽還原陰性動力陰性35℃－37℃18h-24h四、微生物檢驗1.不動桿菌屬檢驗程序

2．顯微鏡涂片染色

革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，絲狀或鏈狀，常成對排列，無芽胞，無鞭毛，無動力，可有吞噬細胞吞噬現(xiàn)象。鮑曼不動桿菌革蘭染色3．分離培養(yǎng)與鑒定

在血平板和麥康凱平板上經(jīng)35℃~37℃培養(yǎng)18h~24h后，可形成圓形、灰白色、光滑、濕潤、邊緣整齊、直徑2~3mm的菌落，無色素形成；洛菲不動桿菌菌落較小，直徑為1~1.5mm；

溶血不動桿菌在血平板上可產(chǎn)生β溶血；

有些菌株苛養(yǎng)，在血平板上呈針尖樣菌落，在營養(yǎng)肉湯中不生長；某些氧化葡萄糖的不動桿菌可使血平板呈獨特的棕色。

氧化酶陰性，動力陰性，硝酸鹽還原試驗陰性。

4、抗原檢測與分型：

抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，用血清學技術(shù)分型：醋酸鈣不動桿菌有30個血清型，洛菲不動桿菌有10個血清型，約瀚遜不動桿菌有26個血清型，鮑曼不動桿菌有34個血清型，但臨床不常用此分型。常用免疫熒光抗體試驗及DNA雜交試驗分型。

鑒定

6種不動桿菌見P135表96

培養(yǎng)物經(jīng)涂片、染色，如為革蘭陰性成雙排列的球桿菌，形態(tài)似奈瑟菌；

氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗陰性、動力陰性，可初步確定為不動桿菌屬的細菌（三項試驗均為陰性者在革蘭陰性桿菌中極為罕見）。

糞產(chǎn)堿桿菌(A.faecalis)皮喬特產(chǎn)堿桿菌(A.Piechaudii)糞產(chǎn)堿桿菌亞型(A.faecalistypeⅡ)木糖氧化產(chǎn)堿桿菌(A.xylosoxidans)脫硝亞種(Subsp.denitrificans)木糖氧化亞種(Subsp

xylosoxidans)

一、分類第五節(jié)產(chǎn)堿桿菌屬細菌特性

革蘭陰性短桿菌，常成單、雙或成鏈狀排列，有周鞭毛，有動力。無芽胞，多數(shù)菌株無莢膜。專性需氧，最適生長溫度25℃~37℃，部分菌株42℃能生長，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好，麥康凱和SS平板亦可生長。

氧化酶陽性，觸酶陽性，不分解任何糖類，葡萄糖OF培養(yǎng)基中產(chǎn)堿，脲素酶陰性，不液化明膠。

本屬細菌除部分菌株能還原硝酸鹽、丙二酸鹽陽性外，多數(shù)生化反應(yīng)為陰性。二、臨床意義人體的正常菌群，大部分感染是條件致病，與假單胞菌相同，分布廣泛，本屬中臨床分離最常見的是糞產(chǎn)堿桿菌，主要來自潮濕環(huán)境，如霧化器、呼吸機和灌洗液等，血、痰、尿、腦脊液等是常見的發(fā)現(xiàn)部位，是醫(yī)院感染的病原菌之一。耐藥性

藥物敏感試驗的藥物選擇與假單胞菌相同，臨床治療可以用哌拉西林及替卡西林/克拉維酸，其他根據(jù)藥敏試驗結(jié)果選藥。三、微生物學特性革蘭陰性桿菌、常成單、雙或成鏈狀排列周鞭毛、有動力最適生長溫度為

25~37℃，普通培養(yǎng)基生長氧化酶陽性，多數(shù)生化反應(yīng)為陰性，不分解任何糖類，葡萄糖OF培養(yǎng)基中產(chǎn)堿。四、微生物檢驗1．顯微鏡涂片染色革蘭氏陰性桿菌常成單、雙或成鏈狀排列周鞭毛、有動力多數(shù)菌株無莢膜糞產(chǎn)堿桿菌革蘭染色

2．分離培養(yǎng)與鑒定糞產(chǎn)堿桿菌麥康凱培養(yǎng)基菌落1）分離培養(yǎng)

血液、腦脊液標本需肉湯增菌后再轉(zhuǎn)種固體培養(yǎng)基，膿汁、分泌物、尿液可直接接種血平板和麥康凱平板。經(jīng)18h~24h培養(yǎng)后，在普通培養(yǎng)基上可形成大小不等菌落，脫礎(chǔ)產(chǎn)堿桿菌呈凸隆起、邊緣整齊、有光澤菌落;

在血平板上為灰色、扁平、邊緣稍薄、較大的濕潤菌落，糞產(chǎn)堿桿菌部分菌株有水果香味；在麥康凱、中國藍瓊脂和SS平板上形成無色透明菌落；在液體培養(yǎng)基中呈均勻混濁生長，表面形成菌膜，管底有粘性沉淀。

pH至8.6為本菌特點。2）鑒定pH至8.6為本菌特點氧化酶陽性觸酶陽性不分解任何糖類

O-F基礎(chǔ)培養(yǎng)呈堿性脲素酶陰性不液化明膠糞產(chǎn)堿桿菌O-F基礎(chǔ)培養(yǎng)呈堿性第六節(jié)黃桿菌屬

本屬是一群無動力、無芽胞，氧化酶陽性、觸酶陽性，磷酸酶陽性的革蘭陰性桿菌。

細菌特性

本屬細菌是一群無動力、無芽胞，氧化酶陽性、觸酶陽性，磷酸酶陽性的革蘭陰性桿菌。

專性需氧，最適生長溫度35℃，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上可生長，臨床可分離到的菌株（除動物傷口伯杰菌外）均可產(chǎn)生不溶性的黃色色素，在麥康凱培養(yǎng)基上生長較弱或完全不生長，粘液威克菌可形成黏液樣黏性菌落，難以從瓊脂上分離。

臨床可分離到的菌株一般均可產(chǎn)生吲哚；腦膜敗血金色桿菌DNA酶陽性，動物傷口伯杰菌脲酶強陽性。短黃桿菌

(F.breve)腦膜炎敗血性黃桿菌

(F.meningospticum)芳香黃桿菌

(F.odoratum)水田黃桿菌

(F.mizutaii)嗜糖黃桿菌

(F.multrivorum)嗜醇黃桿菌

(F.spiritivorum)嗜溫黃桿菌

(F.thalpophilum)藪內(nèi)黃桿菌

(F.gaduuchiae)IIb群黃桿菌

(F.groupIIb)IIe群黃桿菌

(F.groupIIe)IIh群黃桿菌

(F.groupIIh)IIi群黃桿菌

(F.groupIIi)一、分類常見：二、臨床意義是條件致病菌，醫(yī)院感染的常見菌之一本科細菌在醫(yī)院主要存在于有水的環(huán)境和潮濕的物體表面，對人致病的有腦膜敗血金色桿菌、產(chǎn)吲哚金色桿菌、短穩(wěn)桿菌、粘液威克菌、動物傷口伯杰菌等，其中腦膜敗血金色桿菌是使人類致病的最常見的菌種，對早產(chǎn)兒具有高度致病性，可引起新生兒及嬰幼兒的敗血癥、化膿性腦膜炎，且死亡率較高，也可引起免疫力低下成人肺炎。

藥物敏感試驗及結(jié)果解釋

臨床經(jīng)驗用藥可選磺胺及大環(huán)內(nèi)脂類的紅霉素。臨床上常見的腦膜炎敗血黃桿菌及芳香黃桿菌等對廣譜抗菌藥，如氨基糖苷類、β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、氯霉素等有耐藥性，所以最好根據(jù)藥敏試驗選擇用藥。三、生物學特性革蘭陰性桿菌無鞭毛、無動力、無莢膜、無芽胞需氧代謝氧化酶、觸酶、磷酸酶陽性四、微生物檢驗1．顯微鏡涂片染色革蘭陰性桿菌，菌體細長無鞭毛、無動力、無莢膜、無芽胞腦膜炎敗血性黃桿菌革蘭染色

2、分離培養(yǎng)與鑒定血瓊脂培養(yǎng)基需氧代謝菌落：經(jīng)35℃、18~24h培養(yǎng)后，在血瓊脂培養(yǎng)基上可形成直徑1~1.5mm的典型菌落：光滑、有光澤、邊緣整齊，淡黃色，也有的呈黃色或棕黃色。

氧化酶、觸酶、磷酸酶陽性

見P148表9-8腦膜炎敗血性黃桿菌菌落第七節(jié)莫拉菌屬

細菌特性

革蘭陰性球桿菌，菌體小，革蘭染色不易脫色，常成雙或短鏈狀排列，類似奈瑟菌，無鞭毛、無動力、無芽胞、多數(shù)菌株有莢膜。

專性需氧，大部分莫拉菌營養(yǎng)要求高，首次培養(yǎng)需加入兔血或其他動物血清及心胳浸液。最適生長溫度32℃～35℃，經(jīng)1-2天培養(yǎng)。

在血平板上生長為針尖大小、圓形、凸起、光滑濕潤、無色不溶血菌落。

氧化酶、觸酶陽性，無動力，不能分解任何糖類，吲哚（-）。一、分類莫拉菌屬(Moraxella)屬莫拉菌科（Moraxellaceae）醫(yī)學上重要的莫拉菌有：腔隙莫拉菌（M.lacunata）卡他莫拉菌（M.catarrhalis）非液化莫拉菌(M.nonliquefaciens)奧斯陸莫拉菌(M.osloensis)亞特蘭大莫拉菌(M.atlantae)狗莫拉菌(M.canis)林肯莫拉菌(M.lincolnii)二、臨床意義

莫拉菌是人體黏膜表面的正常菌群，致病性較低，通常位于呼吸道。引起眼結(jié)膜炎、角膜炎、慢性鼻竇炎、中耳炎、氣管炎、肺炎、腦膜炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、心包炎、心內(nèi)膜炎、腹膜炎及泌尿生殖系統(tǒng)炎癥，近幾年感染逐漸升高。藥物敏感試驗及結(jié)果解釋大多數(shù)對青霉素類敏感，但現(xiàn)在產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶的菌株也開始出現(xiàn)耐藥，要注意臨床分離株的β內(nèi)酰胺酶的檢測。對頭孢類、四環(huán)素類、喹諾酮類、氨基糖甙類藥物均為敏感。腦炎或腦膜炎、腦膿腫應(yīng)注意藥物通過血腦屏障的問題。

三、微生物檢驗1.顯微鏡涂片革蘭陰性球桿菌，呈成雙或短鏈狀排列，具有多形性，無鞭毛、無動力、無芽胞、菌體小，革蘭染色不易脫色。

非液化莫拉菌革蘭染色2.分離培養(yǎng)與鑒定營養(yǎng)要求較高。血平板上或含兔血清的瓊脂上生長良好。生長溫度32℃~35℃、24~48h后，出現(xiàn)針尖大小到直徑2mm之間的圓形、凸起、光滑、濕潤、邊緣整齊、無色不溶血的菌落。有的菌落培養(yǎng)數(shù)日后，菌落周圍出現(xiàn)綠變區(qū)，時間延長可見檸檬色素或黃色色素。

非液化莫拉菌血培養(yǎng)菌落微生物檢驗鑒定：呈雙短鏈狀排列，具有多形性，無鞭毛、無芽胞無動力。根據(jù)氧化酶陽性、觸酶陽性（可排除不動桿菌）、不分解任何糖類（可同大多數(shù)奈瑟菌相區(qū)別），首先確定其屬；然后進一步鑒定其種。吲哚試驗陰性。見P149表9-9第八節(jié)軍團菌屬

一、分類軍團菌屬(Legionella)屬于軍團菌科（Legionellaceae）。該菌屬較為復(fù)雜，時有新種發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已命名的菌種分別來自人體和環(huán)境，共有45種，64個血清型。嗜肺軍團菌按O抗原分為15個血清型，致病的常見1、4、6血清群。常見與人類疾病有關(guān)的軍團菌：嗜肺軍團菌（Legionellapneumophila）米克戴德軍團菌（L.micdadei）長灘軍團菌（L.longbeachae）杜莫夫軍團菌（L.dumoffii）波茲曼軍團菌（L.bozemanii）

二、臨床意義

軍團病在世界各地均有發(fā)病，但主要在經(jīng)濟發(fā)達國家流行，國內(nèi)多屬散發(fā)，據(jù)報道醫(yī)院感染可高達23%

。本菌廣泛存在于土壤及自然和人工的水環(huán)境中，尤其是在空調(diào)冷凝水中的檢出率最高。

85%病例是嗜肺軍團菌引起的，其中嗜肺軍團菌1、4血清型和6血清型占75%。高發(fā)夏秋季，經(jīng)空氣（空氣－乳膠微粒）傳播。

易侵犯患有慢性心、肺、腎病器質(zhì)性疾病、艾滋病、接受免疫抑制劑、免疫功能低下的患者，最常見的是肺炎型。肺炎型：肺部、多器官損害、消化道及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及體征，病死率高。非肺炎型(龐蒂亞克熱Pontiacfever)感染易發(fā)本病，且病死率高達45%。發(fā)病機制：①內(nèi)毒素和細胞產(chǎn)生的多種酶;②裂解紅細胞;③消化卵黃囊，可能與外毒素有關(guān)。抵