原料藥中雜質(zhì)的控制與案例分析中國(guó)藥品生物制品檢定所第1頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷ImpurityProfile

（雜質(zhì)譜）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.對(duì)存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。第一次飛躍第二次飛躍第2頁(yè)/共111頁(yè)頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+△3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙酰基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B雜質(zhì)譜控制與雜質(zhì)控制的區(qū)別？第3頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)譜控制的整體解決方案第4頁(yè)/共111頁(yè)原料藥雜質(zhì)控制的相關(guān)法規(guī)Q3A：新原料藥中的雜質(zhì)Q3B：新藥制劑中的雜質(zhì)Q3C：殘留溶劑化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則第5頁(yè)/共111頁(yè)對(duì)新原料藥中的雜質(zhì)如何進(jìn)行闡述？化學(xué)方面分類與鑒定報(bào)告雜質(zhì)的控制（檢查項(xiàng)目、限度）分析方法安全性方面對(duì)安全性研究及臨床研究中存在的潛在雜質(zhì)（在當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)樣品中不存在或含量極低的雜質(zhì)）的安全性評(píng)估第6頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)的分類有機(jī)雜質(zhì)反應(yīng)起始物、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物、試劑、配位體、催化劑等無(wú)機(jī)雜質(zhì)試劑、配位體、催化劑、重金屬、無(wú)機(jī)鹽及過(guò)濾介質(zhì)、活性炭等殘留溶劑常用的有69種第7頁(yè)/共111頁(yè)基本術(shù)語(yǔ)Qualification(界定)：是獲得和評(píng)價(jià)與研發(fā)新藥相關(guān)的雜質(zhì)的數(shù)據(jù)的過(guò)程，這些數(shù)據(jù)用于建立新藥的安全閾值（水平），單個(gè)的或一些已確定的雜質(zhì)的含量在這個(gè)閾值下可以確保藥品的生物安全性。Reportingthreshold或Reportinglevel(報(bào)告閾值或報(bào)告水平）：新藥注冊(cè)時(shí)雜質(zhì)應(yīng)被報(bào)告的限度。Identifiedthreshold(鑒別閾值）：新藥注冊(cè)時(shí)雜質(zhì)應(yīng)被鑒別的限度。Qualificatedthreshold(界定閾值）：新藥注冊(cè)時(shí)雜質(zhì)應(yīng)被界定的限度。第8頁(yè)/共111頁(yè)新藥原料藥的雜質(zhì)限度

最大日劑量報(bào)告閾值鑒定閾值界定閾值≤2g0.05%0.10%或1.0mg(取最小值)0.15%或1.0mg(取最小值)>2g0.03%0.05%0.05%（以原料藥的響應(yīng)因子計(jì)）第9頁(yè)/共111頁(yè)如何合理的對(duì)原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行報(bào)告和控制？第10頁(yè)/共111頁(yè)研究報(bào)告中對(duì)有機(jī)雜質(zhì)的基本要求對(duì)新原料藥在合成、精制和儲(chǔ)存過(guò)程中最可能產(chǎn)生的那些實(shí)際存在的雜質(zhì)和潛在的雜質(zhì)進(jìn)行綜述。根據(jù)合成工藝中化學(xué)反應(yīng)的原理，結(jié)合反應(yīng)條件等，闡述合成工藝中可能產(chǎn)生的副產(chǎn)物；根據(jù)起始原料的結(jié)構(gòu)及來(lái)源，闡述可能由起始原料引入的有關(guān)物質(zhì)；根據(jù)起始原料、中間體、產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，產(chǎn)生合成中可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物；根據(jù)產(chǎn)物及雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，結(jié)合純化精制工藝，闡述去除雜質(zhì)的關(guān)鍵工藝。第11頁(yè)/共111頁(yè)頭孢噻肟鈉（CefotaximeSodium）雜質(zhì)的控制以頭孢菌素C為起始物，先經(jīng)化學(xué)或酶催化反應(yīng)生成7-氨基頭孢烯酸（7-ACA），然后進(jìn)行酰化反應(yīng)生成頭孢噻肟酸（CTAX），最后生成頭孢噻肟鈉（CTAX-Na）。第12頁(yè)/共111頁(yè)頭孢菌素的各種可能的降解反應(yīng)類型

-內(nèi)酰胺環(huán)的降解氫化噻嗪環(huán)的雙鍵異構(gòu)（Δ-異構(gòu)）第13頁(yè)/共111頁(yè)3.6、7位氫的反向異構(gòu)第14頁(yè)/共111頁(yè)4.7位碳相連的側(cè)鏈反應(yīng)分子結(jié)構(gòu)中7位碳側(cè)鏈上有α-氨基的頭孢菌素，如頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢來(lái)星、頭孢克羅等藥物，還可發(fā)生分子內(nèi)親核反應(yīng)，生成哌嗪二酮衍生物的降解物

第15頁(yè)/共111頁(yè)具有苯苷氨酸側(cè)鏈的-內(nèi)酰胺抗生素可以降解為2-羥基-3-苯基吡嗪衍生物，這種化合物具有熒光特性，頭孢克洛、氯碳頭孢均會(huì)產(chǎn)生這種降解產(chǎn)物。

第16頁(yè)/共111頁(yè)5.發(fā)生在R3取代基的反應(yīng)當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙酰基，形成脫乙酰基降解物。在加熱、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。

第17頁(yè)/共111頁(yè)6.雙鍵順?lè)词疆悩?gòu)（E-異構(gòu)）7.酯的水解

8.聚合反應(yīng)9.其它反應(yīng)頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢它啶、頭孢地尼等有甲氧亞氨鍵的頭孢菌素均會(huì)產(chǎn)生E-異構(gòu)體，多數(shù)在光照的情況易發(fā)生此類反應(yīng)。第18頁(yè)/共111頁(yè)基于降解反應(yīng)的雜質(zhì)分析發(fā)生在頭孢菌素R3取代基的降解反應(yīng)當(dāng)3位碳上的取代基為乙酰氧甲基時(shí)，易脫去乙?；纬擅撘阴；到馕铩Ｔ诩訜?、酸性等條件下，可進(jìn)一步進(jìn)行分子內(nèi)部環(huán)和，此時(shí)生成的主要降解產(chǎn)物為內(nèi)酯。

雜質(zhì)B、雜質(zhì)E可以源于頭孢噻肟的降解第19頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)譜分析頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)第20頁(yè)/共111頁(yè)頭孢噻肟鈉的合成工藝第21頁(yè)/共111頁(yè)由于起始物頭孢菌素C含有DAO-CC、DA-CC和CC-LT等雜質(zhì)，在半合成步驟中發(fā)生相同的反應(yīng)，分別生成DAO-ACA、DA-ACA和ACA-LT，進(jìn)而生成DAO-CTAX、DA-CTAX和CTAX-LT等雜質(zhì)。雜質(zhì)E可以源于起始原料雜質(zhì)E可以源于合成中的任一中間過(guò)程第22頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)譜分析頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)典型色譜圖（235nm）第23頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)譜分析頭孢噻肟有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)B含量最大，雜質(zhì)C含量最低合成副產(chǎn)物：雜質(zhì)A、雜質(zhì)E和雜質(zhì)G降解雜質(zhì)：雜質(zhì)F第24頁(yè)/共111頁(yè)生產(chǎn)工藝中產(chǎn)生的雜質(zhì)第25頁(yè)/共111頁(yè)闡述清楚產(chǎn)品中可能存在那些雜質(zhì)雜質(zhì)的來(lái)源生產(chǎn)工藝中通過(guò)何種手段去除或控制這些雜質(zhì)的產(chǎn)生實(shí)際產(chǎn)品中這些的雜質(zhì)水平及變化第26頁(yè)/共111頁(yè)加替沙星及其十種雜質(zhì)對(duì)照品的色譜圖加替沙星注射液雜質(zhì)譜分析

色譜條件：以三乙胺磷酸溶液[三乙胺溶液（1→100），用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.3±0.05]-乙腈（87：13）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm，柱溫為30℃，流速為每分鐘1ml。

色譜柱:SHISEIDOCAPCELLPAKC18第27頁(yè)/共111頁(yè)加替沙星及10個(gè)已知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式

第28頁(yè)/共111頁(yè)主要雜質(zhì)是雜質(zhì)3和雜質(zhì)8生產(chǎn)工藝雜質(zhì)原料的雜質(zhì)譜分析第29頁(yè)/共111頁(yè)光照穩(wěn)定性評(píng)價(jià)比較光照前后各雜質(zhì)含量的變化

按隨機(jī)取19批樣品UV燈下照射10天

雜質(zhì)2、雜質(zhì)4是與光照穩(wěn)定性密切相關(guān)的雜質(zhì)大多數(shù)喹喏酮類抗生素對(duì)光不穩(wěn)定，什么是光降解雜質(zhì)？第30頁(yè)/共111頁(yè)如何合理的對(duì)原料藥中的雜質(zhì)進(jìn)行報(bào)告和控制？依據(jù)合成/降解反應(yīng)機(jī)理，鑒別可能雜質(zhì)！

全過(guò)程跟蹤雜質(zhì)在合成工藝中的變化！第31頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)控制方法直接測(cè)定色譜法HPLCTLCHPCEGC間接測(cè)定溶液的顏色檢查第32頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)分析方法的選擇方法互補(bǔ)原則了解不同方法間的相關(guān)性所有的分析方法必須進(jìn)行驗(yàn)證（validation)第33頁(yè)/共111頁(yè)藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對(duì)象第34頁(yè)/共111頁(yè)所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保留？是否所檢測(cè)到的色譜峰存在共出峰？第35頁(yè)/共111頁(yè)新方法分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國(guó)抗生素雜志，2009，34：734在對(duì)各國(guó)藥典方法比較的基礎(chǔ)上確定分析方法第36頁(yè)/共111頁(yè)所有的雜質(zhì)在所選擇的RP-HPLC系統(tǒng)中被有效的檢出了嗎？是否有雜質(zhì)吸附到色譜柱上未被洗脫？是否有雜質(zhì)在色譜柱上未被保留？是否所檢測(cè)到的色譜峰存在共出峰？如何驗(yàn)證？采用HPCE/HPTLC方法驗(yàn)證RP-HPLC方法的有效性第37頁(yè)/共111頁(yè)HPCE分析-內(nèi)酰胺抗生素雜質(zhì)譜

最佳分離模式的選擇JCPS，2010，19（4）：285–292頭孢菌素有關(guān)物質(zhì)測(cè)定中MEKC是HPLC分析的最有效驗(yàn)證方法第38頁(yè)/共111頁(yè)MEKC與HPLC測(cè)定頭孢菌素有關(guān)物質(zhì)的互補(bǔ)性分析

MEKC具有較強(qiáng)的雜質(zhì)分離能力，但其檢測(cè)限（LOD）較高。借助于加速實(shí)驗(yàn)，將MEKC分離出的雜質(zhì)峰數(shù)目與HPLC分離出的含量大于MEKCLOD的雜質(zhì)峰數(shù)目進(jìn)行比較，當(dāng)兩者基本相對(duì)時(shí)，可以認(rèn)為HPLC方法具有較滿意的分離能力。第39頁(yè)/共111頁(yè)第40頁(yè)/共111頁(yè)藥物分析雜志，待發(fā)表第41頁(yè)/共111頁(yè)HPLC與HPTLC分析慶大霉素的比較HPTLC中的9號(hào)和10號(hào)斑點(diǎn)在HPLC中被檢出了嗎？慶大霉素供試品HPTLC色譜圖及對(duì)應(yīng)的UV掃描圖譜1.UK12.UK23.UK34.UK45.C1a6.UK57.C2a+C28.C1第42頁(yè)/共111頁(yè)藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對(duì)象第43頁(yè)/共111頁(yè)基于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)理念的HPLC方法優(yōu)化理論JPBA，2009,49(5):1192–1202第44頁(yè)/共111頁(yè)洛伐他定和辛伐他定有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法的優(yōu)化第45頁(yè)/共111頁(yè)

新優(yōu)化出的方法比USP的分離度更好，比EP分離出的雜質(zhì)峰更多，比ChP所用的分離時(shí)間更短，并達(dá)到了更好的分離效果

第46頁(yè)/共111頁(yè)藥品質(zhì)控RP-HPLC方法上市后（仿制）藥品分析方法的有效性分析方法的最優(yōu)化分析方法的耐用性新藥研發(fā)如何確定分離對(duì)象第47頁(yè)/共111頁(yè)基于QbD理念的雜質(zhì)控制策略JPBA，2008,46(3):431-441第48頁(yè)/共111頁(yè)藥物雜質(zhì)的可能來(lái)源第49頁(yè)/共111頁(yè)阿奇霉素的合成途經(jīng)第50頁(yè)/共111頁(yè)1.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉素E、紅霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺

3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾亍⑵婷顾豊-氧化物、3’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素、O-甲苯磺?；t霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8，

9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種第51頁(yè)/共111頁(yè)模擬色譜圖實(shí)際色譜圖第52頁(yè)/共111頁(yè)第53頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)名稱logP(8.3)logkkTR=T0（1+k）去克拉克定糖阿奇霉素A1.280.928.2613.89紅霉素A內(nèi)酰胺1.350.958.9414.90阿奇霉素C2.21.3723.2030.303’-N，N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A2.241.3924.2737.90紅霉素C肟（E）2.381.4528.4044.093’-去（二甲氨基）-3’,4’-去氫阿奇霉素2.791.6544.9968.98紅霉素A肟（Z）2.81.6645.5069.75紅霉素A肟（E）2.81.6645.5069.75丙基阿奇霉素3.161.8368.15103.73阿奇霉素E3.542.0270.40107.10N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾?.982.7275.40114.60第54頁(yè)/共111頁(yè)采用有效的方法證明雜質(zhì)不存在，

而不是陳述雜質(zhì)不存在！第55頁(yè)/共111頁(yè)-內(nèi)酰胺抗生素聚合物的控制第56頁(yè)/共111頁(yè)SephadexG-10凝膠色譜系統(tǒng)典型分離圖樣品對(duì)照Kav=0第57頁(yè)/共111頁(yè)高效凝膠色譜系統(tǒng)TSK高效凝膠色譜系統(tǒng)Superdexpipted高效凝膠色譜系統(tǒng)高效疏水凝膠色譜系統(tǒng)第58頁(yè)/共111頁(yè)高效疏水凝膠色譜系統(tǒng)TSKGelG2500HXL凝膠柱（填充劑為苯乙烯－二乙烯基苯共聚物）300×7.8mmi.d;流動(dòng)相:含0.26％溴化鋰的N,N-二甲基甲酰胺溶液；流速0.4ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。

第59頁(yè)/共111頁(yè)第60頁(yè)/共111頁(yè)-內(nèi)酰胺抗生素聚合物雜質(zhì)分析頭孢地嗪鈉

頭孢呋辛酯

TSKgelG2000HHR

頭孢丙烯

TSKgelG2500PWXL

法羅培南

TSKgelG2000HHR

TSKgelG2000SWXL

TSKgelG2000SWXL

第61頁(yè)/共111頁(yè)SephadexG10與TSK柱比較62G10柱結(jié)果與TSK柱結(jié)果的相關(guān)性SephadexG10TSK聚合物其他聚合物二聚物頭孢噻肟鈉聚合物分析第62頁(yè)/共111頁(yè)HPLC反相色譜系統(tǒng)控制高分子雜質(zhì)通過(guò)對(duì)指針性雜質(zhì)的測(cè)定，表征藥品中高分子雜質(zhì)總量。第63頁(yè)/共111頁(yè)頭孢泊肟酯有關(guān)物質(zhì)分析的HPLC色譜圖1=頭孢泊肟，2=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，3=頭孢泊肟酯異構(gòu)體A，4=去甲氧基頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+△3異構(gòu)體，5=頭孢泊肟酯異構(gòu)體B+反式頭孢泊肟酯A，6=反式頭孢泊肟酯B，7=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體A，8=NAC-CPOD-PRX異構(gòu)體A，9=N-甲?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，10=N-乙?；^孢泊肟酯異構(gòu)體B，11=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體A，12=頭孢泊肟酯開環(huán)二聚體B第64頁(yè)/共111頁(yè)

（A）阿莫西林鈉在SuperdexPeptide高效凝膠色譜系統(tǒng)中的色譜圖（B）各色譜峰切換到BP有關(guān)物質(zhì)HPLC分析系統(tǒng)后的色譜圖中國(guó)新藥雜志,2008,17(24):23第65頁(yè)/共111頁(yè)在溶液中（阿莫西林鈉易形成聚合物），阿莫西林閉環(huán)二聚體和二酮哌嗪阿莫西林（2－S）的含量與各類阿莫西林聚合物含量之和（主峰后雜質(zhì)總量）呈一定的相關(guān)性

中國(guó)藥學(xué)雜志,2009，44（23）：1821第66頁(yè)/共111頁(yè)柱切換技術(shù)反沖模式

(Backflushingmode)柱前富集模式(on-columnfocusing)第67頁(yè)/共111頁(yè)鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比較SephadexG-10系統(tǒng)TSK-GelG2000swxl系統(tǒng)

柱切換技術(shù)0.8ml/minTSK系統(tǒng)0.5ml/minC18系統(tǒng)第68頁(yè)/共111頁(yè)對(duì)-內(nèi)酰胺抗生素中的聚合物重點(diǎn)在于研究，證明所采用的工藝是否可能導(dǎo)致樣品聚合物變化！應(yīng)采用適宜的方法對(duì)-內(nèi)酰胺抗生素中的聚合物進(jìn)行控制，而不要僅局限于SephadexG10系統(tǒng)！第69頁(yè)/共111頁(yè)

樣品中雜質(zhì)含量的報(bào)告第70頁(yè)/共111頁(yè)批次及批量生產(chǎn)日期生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)工藝產(chǎn)品中單個(gè)雜質(zhì)含量及雜質(zhì)總量批次用途使用的分析方法第71頁(yè)/共111頁(yè)報(bào)告研制過(guò)程中所有批次樣品的檢驗(yàn)結(jié)果；檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用詳細(xì)記錄，而不是簡(jiǎn)單描述為“符合規(guī)定”；分別記錄單個(gè)雜質(zhì)（已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)）、總雜質(zhì)的含量；所有的雜質(zhì)應(yīng)編號(hào)，如根據(jù)保留時(shí)間等小于1.0%的雜質(zhì)，表示為兩位小數(shù)，如0.13%,0.06%大于1.0%的雜質(zhì)，表示為一位少數(shù)，如1.3％第72頁(yè)/共111頁(yè)在新藥研發(fā)過(guò)程中，采用統(tǒng)一的編號(hào)系統(tǒng)，表征雜質(zhì)的變化！第73頁(yè)/共111頁(yè)如果新藥研發(fā)過(guò)程中雜質(zhì)分析方法改變，應(yīng)分別給出其驗(yàn)證資料并對(duì)不同方法的相關(guān)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。色譜圖的相關(guān)性比較是必須的。第74頁(yè)/共111頁(yè)利用色譜相關(guān)光譜法追蹤色譜峰不同色譜系統(tǒng)中的位置第75頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)數(shù)據(jù)的積累是制定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要依據(jù)第76頁(yè)/共111頁(yè)國(guó)內(nèi)新藥研發(fā)中對(duì)有關(guān)物質(zhì)控制的誤區(qū)重指標(biāo)，輕方法方法的有效性與樣品的現(xiàn)狀對(duì)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的鑒別重視不夠第77頁(yè)/共111頁(yè)如何確定微量雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)？根據(jù)雜質(zhì)來(lái)源，產(chǎn)生條件，結(jié)合母核的質(zhì)譜裂解規(guī)律推斷雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)第78頁(yè)/共111頁(yè)頭孢菌素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律

青霉素類抗生素質(zhì)譜裂解的一般規(guī)律

第79頁(yè)/共111頁(yè)第80頁(yè)/共111頁(yè)第81頁(yè)/共111頁(yè)第82頁(yè)/共111頁(yè)鑒定未知同系物結(jié)構(gòu)的策略－1對(duì)于具有相同母核的化合物：紫外光譜圖可以得到有關(guān)母核結(jié)構(gòu)的信息；一級(jí)質(zhì)譜得到分子量信息；二級(jí)質(zhì)譜得到碎片峰信息,可以推測(cè)出有關(guān)各取代基的情況；利用色譜保留行為來(lái)驗(yàn)證推測(cè)結(jié)果是否正確。第83頁(yè)/共111頁(yè)ACA，535：89-99,2005分析化學(xué)，34（1）：95-99，2006藥學(xué)學(xué)報(bào)，41（5）：475-480，2006第84頁(yè)/共111頁(yè)鑒定未知降解雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的策略－2對(duì)于反應(yīng)機(jī)理已知的降解雜質(zhì)：

根據(jù)反應(yīng)原理設(shè)計(jì)加速實(shí)驗(yàn)；一級(jí)質(zhì)譜得到分子量信息；二級(jí)質(zhì)譜得到碎片峰信息,

進(jìn)一步推測(cè)降解物的結(jié)構(gòu)；利用UV特征和色譜保留行為來(lái)驗(yàn)證推測(cè)結(jié)果是否正確。第85頁(yè)/共111頁(yè)第86頁(yè)/共111頁(yè)第87頁(yè)/共111頁(yè)第88頁(yè)/共111頁(yè)確定未知雜質(zhì)的策略－3推測(cè)雜質(zhì)的可能結(jié)構(gòu)反合成推測(cè)的可能雜質(zhì)LC/MS通過(guò)質(zhì)譜裂解規(guī)律和色譜保留時(shí)間確定所推測(cè)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確性第89頁(yè)/共111頁(yè)微量組分的毒性評(píng)價(jià)第90頁(yè)/共111頁(yè)毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)斑馬魚毒性快速評(píng)價(jià)平臺(tái)，對(duì)雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。優(yōu)點(diǎn)：雜質(zhì)用量少無(wú)需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)周期短（3－4天一個(gè)周期）第91頁(yè)/共111頁(yè)第92頁(yè)/共111頁(yè)第93頁(yè)/共111頁(yè)Figure4.EffectsofMMTDandTDAonthezebrafishembryonicdevelopment(3-dpf).

A-D:TheembryostreatedwithMMTDat10g/ml(A),100g/ml(B),300g/ml(C)andat500g/ml(D).E-H:theembryostreatedwithTDAat100g/ml(E,F),300g/ml(G)andat500g/ml(H);I,J:normalembryosascontrolsatalateralview(I)andadorsalview(J).Hemorrhageofbrainareasisindicatedbywhitearrow,opaqueyolkandYEbyredarrow,deficienteyesarebyslight-bluearrows,colorlessandcord-likeheartsandenlargedpericardialsacsbyyellowarrows,ripple-likenotochordsbyorangearrows.第94頁(yè)/共111頁(yè)雌二醇對(duì)斑馬魚胚胎的心臟毒性第95頁(yè)/共111頁(yè)第96頁(yè)/共111頁(yè)斑馬魚作為藥物耳毒性檢測(cè)模型斑馬魚側(cè)線神經(jīng)丘毛細(xì)胞:(A)5－dpf幼體頭部側(cè)面，示眼窩上(SO1andSO2),耳囊(O1)和枕部的(OC1)的神經(jīng)丘；(B)O1神經(jīng)丘毛細(xì)胞雙染色－FM1-43(紅)和Yo-Pro-1(綠).(C)FM1-43染色；(D).Yo-Pro-1染色。Scalebar=50um(A);10um(B–D).HearingResearch213(2006)25–33第97頁(yè)/共111頁(yè)藥物耳毒性檢測(cè)利用一種特殊染料對(duì)斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測(cè)毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來(lái)判斷檢測(cè)物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示給藥后1神經(jīng)丘消失。給藥后系統(tǒng)對(duì)照組（正常幼體）第98頁(yè)/共111頁(yè)雜質(zhì)安全性的界定（評(píng)估）第99頁(yè)/共111頁(yè)申報(bào)者應(yīng)對(duì)所制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)限度提供安全性方面的理由。對(duì)于一個(gè)通過(guò)充分的安全性研究和臨床研究的新原料藥，其中任何一個(gè)雜質(zhì)的水平被認(rèn)為是已經(jīng)經(jīng)過(guò)評(píng)價(jià)的；對(duì)于與動(dòng)物和/或人體內(nèi)的重要代謝物結(jié)構(gòu)相同的雜質(zhì)，被認(rèn)為是經(jīng)過(guò)評(píng)價(jià)的；雜質(zhì)的實(shí)際含量如果低于雜質(zhì)的界定閾值，也被認(rèn)為是合理的。第100頁(yè)/共111頁(yè)對(duì)結(jié)構(gòu)已知但含量大于界定限的雜質(zhì)；結(jié)構(gòu)未知且含量大于鑒別限的雜質(zhì)，如對(duì)雜質(zhì)的安全性不確定，均需要對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行界定。第101頁(yè)/共111頁(yè)頭孢西酮鈉雜質(zhì)限度的評(píng)估頭孢西酮鈉雜質(zhì)限度定為