PFU:plaqueformingunit,空斑形成單位。感染性滴度的單位一般表示為PFU/ml。由于測定pfu往往重復(fù)性較差，因此近些年許多研究又開始采用TCID50方法來計(jì)算病毒的感染單位。因此建議也可使用TCID50法。MOI:multiplicityofinfection，感染復(fù)數(shù)。傳統(tǒng)的MOI概念起源于噬菌體感染細(xì)菌的研究。其含義是感染時噬菌體與細(xì)菌的數(shù)量比值，也就是平均每個細(xì)菌感染噬菌體的數(shù)量。噬菌體的數(shù)量單位為pfu。一般認(rèn)為MOI是一個比值，沒有單位，其實(shí)其隱含的單位是pfunumber/cell。后來MOI被普遍用于病毒感染細(xì)胞的研究中，含義是感染時病毒與細(xì)胞數(shù)量的比值。然而，由于病毒的數(shù)量單位有不同的表示方式，從而使MOI產(chǎn)生了不同的含義。能產(chǎn)生細(xì)胞裂解效應(yīng)的病毒例如單純皰疹病毒等習(xí)慣上仍用pfu表示病毒數(shù)量，因此其MOI的含義與傳統(tǒng)的概念相同。傳統(tǒng)意義上的MOI的測定，其原理是基于病毒感染細(xì)胞是一種隨機(jī)事件，遵循Poisson分布規(guī)律，可計(jì)算出感染一定比例的培養(yǎng)細(xì)胞所需的感染復(fù)麴OI)。其公式為：P=1-P(0),P(0)=e-或m=TnP(0)。其中：P為被感染細(xì)胞的百分率P(0)為未被感染細(xì)胞的百分率m為MOI值例如，如果要感染培養(yǎng)皿中99%的培養(yǎng)細(xì)胞，則：P(0)=1%=m=-In=pfu/ceLlTCID50Protoco：l1：制備96孔板單層細(xì)胞2：將病毒做系列稀釋，橫向接種單層細(xì)胞板，每稀釋度重3復(fù)孔3：每日觀察細(xì)胞病變，記錄高于50和低于50％病變孔的病毒稀釋度，4：計(jì)算比距，獲得^1口50計(jì)算比距：(高于50%的病變率-50%)/(高于50%病變率一小于50%病變率)=比距；比距與接近50%病變率的病毒的稀釋度的指數(shù)相加，就獲得了指數(shù)。比如：比色計(jì)算或者顯微鏡觀察病毒的TCID50在10的負(fù)7和8次方之間，那么，指數(shù)一8與比距相加，獲得的新的指數(shù)，就是TCID50的指數(shù)，TCID50=10的-7.幾次方病毒感染力的滴定(TCID50的測定)一、測定病毒感染力的方法半數(shù)致死量LD50(50%lethaldose)半數(shù)雞胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量TCID50(50%tissuecultureinfectivedose)蝕斑形成單位(plaqueformingunit,PFU)PFU/mL=TCID50/mLX二、TCID50的操作步驟1、在離心管中用維持液將病毒液作連續(xù)10倍的稀釋，從10-1到10-10,每一次稀釋后都需要更換槍頭進(jìn)行下一步稀釋。2、將稀釋好的病毒接種到已經(jīng)鋪好單層細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板中，每一稀釋度接種一縱排共8孔，每孔接種100µl；設(shè)正常細(xì)胞對照(兩縱排)，只加維持液100µl。4、逐日觀察并記錄結(jié)果,按Reed-Muench兩氏法計(jì)算TCID50病毒感染力的滴定(TCID50的測定)一、測定病毒感染力的方法半數(shù)致死量LD50(50%lethaldose)半數(shù)雞胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量TCID50(50%tissuecultureinfectivedose)蝕斑形成單位(plaqueformingunit,PFU)PFU/mL=TCID50/mLX二、TCID50的操作步驟1、在離心管中用維持液將病毒液作連續(xù)10倍的稀釋,從10-1到10-10,每一次稀釋后都需要更換槍頭進(jìn)行下一步稀釋。2、將稀釋好的病毒接種到已經(jīng)鋪好單層細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板中,每一稀釋度接種一縱排共8孔，每孔接種100µl；設(shè)正常細(xì)胞對照(兩縱排)，只加維持液100µl。4、逐日觀察并記錄結(jié)果,按Reed-Muench兩氏法計(jì)算TCID50TCID50與PFU換算：PFUs=XTCID50的滴度為什么病毒載體的感染單位有不同的表示方法不同的病毒載體，其表示感染單位的方式有所不同。早期的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一般用CFU,是“cloneformingunit”的簡稱，叫做“克隆形成單位”。感染性滴度的單位一般表示為CFU/ml。這是因?yàn)樽钤绲哪孓D(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)是Dr.DustyMiller建立的LN系列(包括LN，LXSN，LNSX，LXCN，LNCX等)，包裝細(xì)胞株是PA317,psi2，G&P86等。在這套載體中N代表了neo基因，X代表外源基因，S代表SV40啟動子，C代表CMV啟動子，L代表逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTR，具有啟動子功能。因此，早期的LN系列載體是雙表達(dá)載體，重組病毒中有neo基因的表達(dá)單位，滴度測定時用病毒感染NIH3T3細(xì)胞，用G418選擇培養(yǎng)，根據(jù)形成neo基因抗性克隆的多少來計(jì)算病毒滴度，因此滴度的單位就用cfu/ml來表示了。這種表示方法至今還很常用。腺病毒載體的感染單位一般用PFU表示，是“plaqueformingunit”的簡稱，叫做“空斑形成單位”。感染性滴度的單位一般表示為PFU/ml。由于測定pfu往往重復(fù)性較差，因此近些年許多研究又開始采用古老的TCID50方法來計(jì)算腺病毒的感染單位。什么是MOIMOI是multiplicityofinfection的縮寫，中文譯為感染復(fù)數(shù)。傳統(tǒng)的MOI概念起源于噬菌體感染細(xì)菌的研究。其含義是感染時噬菌體與細(xì)菌的數(shù)量比值，也就是平均每個細(xì)菌感染噬菌體的數(shù)量。噬菌體的數(shù)量單位為pfu。一般認(rèn)為MOI是一個比值，沒有單位，其實(shí)其隱含的單位是pfunumber/cell。后來MOI被普遍用于病毒感染細(xì)胞的研究中，含義是感染時病毒與細(xì)胞數(shù)量的比值。然而，由于病毒的數(shù)量單位有不同的表示方式，從而使MOI產(chǎn)生了不同的含義。能產(chǎn)生細(xì)胞裂解效應(yīng)的病毒例如腺病毒、單純皰疹病毒等習(xí)慣上仍用pfu表示病毒數(shù)量，因此其MOI的含義與傳統(tǒng)的概念相同。而對于某些病毒如AAV病毒，無法用pfu表示病毒的數(shù)量，而是采用TU、IU、病毒顆粒(viralparticles,)或基因組數(shù)量(vectorgenome,.)來表示病毒數(shù)量，因此其MOI就有了不同含義。采用TU或IU，MOI的含義便是TUnumber/cell或IUnumber/cell。采用.，MOI的含義便是.number/cell。采用，MOI的含義便是.number/cell?？梢詫⑸鲜霾煌腗OI表示方式分為2種：1)以活性單位表示病毒數(shù)量，如pfu,TU,IU。這時MOI的含義是指平均每個細(xì)胞感染病毒的活性單位數(shù)。2)以病毒顆?；蚧蚪M數(shù)表示病毒數(shù)量，如.或.。這時MOI的含義是指平均每個細(xì)胞感染病毒的病毒顆?；蚧蚪M數(shù)。值得一提的是，上述2種不同的MOI表示方式在含義和數(shù)值上都有所不同。前一種是傳統(tǒng)意義上的MOI,后一種MOI表示方式的含義更為簡化和直觀，也逐步被一些研究者采用。傳統(tǒng)意義上的MOI的測定，其原理是基于病毒感染細(xì)胞是一種隨機(jī)事件，遵循Poisson分布規(guī)律，可計(jì)算出感染一定比例的培養(yǎng)細(xì)胞所需的感染復(fù)麴OI)。其公式為:P(k)=1-P(0),P(0)=e-或m=TnP(0)。其中：P(k)為被感染細(xì)胞