CDESFDA注射劑的無菌保證

與工藝研究

國家食品藥品監(jiān)督管理局

藥品審評中心黃曉龍

2008.10CDESFDA藥品管理法與藥品生產(chǎn)2001年2月28日修訂的《藥品管理法》第十條，經(jīng)修訂后明確要求：“藥品必須按照（原法規(guī)：工藝規(guī)程）國家藥品標準和國務院藥品監(jiān)督管理部門批準的生產(chǎn)工藝進行生產(chǎn)，…。改變影響藥品質量的生產(chǎn)工藝的，必須報原批準部門審核批準?！鄙a(chǎn)工藝的源頭：藥品研發(fā)中經(jīng)工藝研究與驗證獲得的申報工藝CDESFDA目錄一、注射劑的特點二、注射劑的無菌三、相關知識簡介四、注射劑的無菌保證工藝研究五、總結CDESFDA一、注射劑的特點不通過人體固有的保護屏障，直接進入血液起效快、安全性要求高。無菌嚴格控制熱原及雜質CDESFDA二、注射劑的無菌歷史的教訓：1970-1975年，美國因輸液污染導致敗血癥400多起，但問題產(chǎn)品全部通過了無菌檢查。2006年，安徽華源的“欣氟”事件：滅菌工藝與無菌檢查CDESFDA方法本身是否經(jīng)過充分驗證——05版藥典的新要求。檢測結果有無代表性。抽檢，樣本數(shù)一般為20/批。樣本數(shù)、污染率及通過無菌檢查（取不到污染樣）的概率遵循二項式定律（泊松分布）通過無菌檢查的概率P=(1-q)n式中：q為批產(chǎn)品污染率

n為樣本數(shù)無菌檢查的局限性CDESFDA計算實例假設當某批藥品的實際染菌率為5%時，如果根據(jù)通常取樣的數(shù)量為20支，則該批藥品通過無菌檢查的概率P=(1-q)n=（1-0.05）20=0.359

即有35.9%的可能性，該批藥品將會被判定為無菌。

CDESFDA無菌檢查特性數(shù)據(jù)表編號污染率通過無菌檢查的概率n=1n=2n=4n=10n=15n=20n=30001595908160463621090816635211231585725220944208064411141577.6422.36560.1%5%中國藥典現(xiàn)取樣數(shù)為：20，如污染率為5%，從曲線得，檢出概率為64%。CDESFDA如何保證注射劑無菌合格呢？CDESFDA質量控制的三種模式檢驗控制質量（QualitybyTest）不夠全面生產(chǎn)控制質量（QualitybyManufacture）將質控延伸到生產(chǎn)環(huán)節(jié)設計控制質量（QualitybyDesign，QbD）

全方位的控制、發(fā)展的方向三者互為補充，后者包括前者

CDESFDA保證注射劑無菌的措施研究階段研究設計出符合無菌要求的產(chǎn)品（包括合適的劑型、滅菌工藝、包裝材料）——前提與源頭生產(chǎn)階段批產(chǎn)后應嚴格按照研究驗證后的工藝進行生產(chǎn)CDESFDA三、相關知識簡介D值（微生物的耐熱參數(shù)）：在一定溫度下，將微生物殺滅90%所需的時間，以分鐘為單位。一般小于1分鐘。F0值：產(chǎn)品在121℃下的標準滅菌時間。滅菌率L：某溫度下滅菌1分鐘所對應的F0值。CDESFDAZ=10℃時，不同溫度下的滅菌率和所相當?shù)臏缇鷷r間溫度（℃）滅菌率L滅菌時間（分鐘）1211.001.001200.7941.2591150.2513.9841100.07912.6001050.02540.0001000.008125.00CDESFDA濕熱滅菌法：將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。濕熱滅菌法通常分為過度殺滅法和殘存概率法兩種。CDESFDA過度殺滅法F0不低于12適用于熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以徹底殺滅任何污染的微生物為實現(xiàn)無菌的手段無菌保證值不小于6CDESFDA殘存概率法滅菌過程8≤F0<12分鐘適用于熱穩(wěn)定性不很好的產(chǎn)品通過控制工藝過程的微生物污染和滅菌工藝參數(shù)使產(chǎn)品無菌無菌保證值不小于6CDESFDA其它濕熱滅菌工藝F0值低于8的滅菌工藝熱穩(wěn)定性很差的產(chǎn)品以無菌生產(chǎn)工藝為基礎，滅菌是提高無菌保證水平的輔助手段不計算F0值，污染概率不大于0.1%除血液制品外，發(fā)達國家的大容量注射劑很少采用此類工藝小容量注射劑也較少采用CDESFDASAL

（無菌保證水平）：產(chǎn)品經(jīng)滅菌后微生物殘存概率的負對數(shù)。國際上規(guī)定，濕熱滅菌法的SAL不得低于6。SAL＝F0/D121–lgN0N0：滅菌前的染菌量

SAL除了和F0有關，還與染菌量（N0）及所染菌的耐熱參數(shù)（D121）有關。CDESFDAF0和SAL的關系：

F0=8N0=100SAL＝8/1–lg100

=6D121=1時注意：污染菌在不同的產(chǎn)品中的耐熱性可能不同，故驗證時應采用實際的藥液。

eg:嗜熱脂肪芽孢桿菌（常規(guī)D值在1.5-3.0分鐘）在復方氨基酸注射液中的D值為0.8分鐘左右，在30％的葡萄糖溶液中的D值為2.2分鐘。CDESFDA無菌保證水平應用實例1假定N0為100cfu/瓶，D值為1分鐘，要達到SAL不小于6，滅菌F0值應達到多少？相當于115℃下滅菌多少分鐘？F0=（SAL＋lgN0）×D=（6+lg100）×1=8分鐘。換算成115℃下的F0/L115=8/0.25=32分鐘。殘存概率法有效的基礎：N0≤100，D≤1。CDESFDA某輸液采用110℃，30分鐘的滅菌程序，起始污染微生物仍為100cfu/瓶，D值為0.5分鐘，經(jīng)計算此時的無菌保證值和殘存微生物污染的概率為：SAL=F0/D-lgN0=L110×t/D-lg100=0.08×30/0.5-2=2.8殘存微生物的概率為10-2.8＝0.158％通過無菌檢查的概率為(1-0.158％)20=96.9%。無菌檢查的結果不能保證產(chǎn)品的SAL符合要求（

≤6）。無菌保證水平應用實例2CDESFDA四、注射劑的無菌保證工藝研究無菌保證理化指標滅菌和化學指標的平衡點？CDESFDA工藝選擇的考慮要點無菌產(chǎn)品必須達到規(guī)定的無菌保證水平。不得以理化性質等硬指標來壓無菌的軟指標?？勺罱K滅菌產(chǎn)品一定要首選最終滅菌方式，以保證產(chǎn)品的無菌特性。無菌制造工藝的基本特征是：低安全+高成本。應盡可能避免采用。當滅菌可能會造成副產(chǎn)物等問題時，盡可能從工藝上創(chuàng)造條件，使滅菌成為可行。CDESFDA國食藥監(jiān)注[2008]7號通知

08年1月10日國家局發(fā)布了化學藥品注射劑基本技術要求。國家局已受理但尚未批準注冊的化學藥品注射劑應參照《技術要求》進行研究。已經(jīng)批準注冊的化學藥品注射劑也應參照《技術要求》進行相關研究（完善滅菌工藝等），并在申報再注冊時提供相關研究資料。CDESFDA劑型選擇的合理性要權衡考慮各劑型的無菌保證水平、雜質的控制水平、工藝的可行性、臨床使用的方便等。首先要考慮被選劑型可采用的滅菌工藝的無菌保證水平的高低。原則上首選劑型應能采用終端滅菌工藝，并保證SAL不小于6。對于有充分的依據(jù)證明不適宜采用終端滅菌工藝且臨床必需注射給藥的品種，可考慮選擇采用無菌生產(chǎn)工藝的劑型。通常無菌生產(chǎn)工藝僅限于粉針劑或部分小容量注射劑。

CDESFDA輸液產(chǎn)品滅菌工藝的選擇原則

應采取終端滅菌工藝，建議首選過度殺滅法（F0≥12）。例如：氯化鈉大輸液。如產(chǎn)品不能耐受，可采用殘存概率法(8≤F0<12)，但均應保證產(chǎn)品滅菌后的SAL不小于6。采用其它F0值小于8的終端滅菌條件的工藝，原則上不予認可。如產(chǎn)品不能耐受終端滅菌工藝條件，應盡量優(yōu)化處方工藝，以改善制劑的耐熱性。如確實無法耐受，則應考慮選擇其他劑型，而非大容量注射劑。

CDESFDA工藝驗證要求主要包括以下試驗：滅菌前微生物污染水平測定，包括滅菌前產(chǎn)品中的污染菌及其耐熱性；熱穿透試驗；微生物挑戰(zhàn)試驗：生物指示劑的耐熱性及數(shù)量應對滅菌工藝構成必要的挑戰(zhàn)。過度殺滅法（F0≥12）不要求此項驗證

CDESFDA粉針劑的工藝與驗證粉針劑的無菌保證水平應能保證SAL不大于10-3。常規(guī)的工藝驗證試驗包括：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗：至少在線灌裝三批，每批的批量詳見附表，每瓶產(chǎn)品均應進行無菌檢查。除菌過濾系統(tǒng)適應性驗證：包括過濾系統(tǒng)相容性測試、過濾前后濾膜完整性測試，必要時尚需進行濾膜的微生物截留量測試。

CDESFDA附表：培養(yǎng)基灌裝試驗的批量與判斷合格的標準批量（瓶）3000475063007760允許染菌的數(shù)量（瓶）0123CDESFDA小容量注射劑的工藝與驗證應首選終端滅菌工藝，相關技術要求同大容量注射劑。如有充分的依據(jù)證明不能采用終端滅菌工藝，且為臨床必需注射給藥的品種，可考慮采用無菌生產(chǎn)工藝，相關技術要求同凍干粉針劑。

CDESFDA歐盟1999年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹決策樹的作用是在考慮各種復雜因素的情況下，輔助選擇最佳的滅菌方法歐盟滅菌方法選擇的決策樹CDESFDACDESFDA決策樹越往下，風險越大需要提供的研究與驗證的證據(jù)也越多CDESFDA工藝選擇的基本原則:無菌產(chǎn)品應在灌裝到最終容器后進行最終滅菌（首選）如因產(chǎn)品對熱不穩(wěn)定不能進行最終滅菌時，可采用最終滅菌方法的替代方法--過濾除菌和/或無菌生產(chǎn)工藝（退而求其次）CDESFDA四、研究中的常見問題劑型選擇不合理無菌保證工藝選擇不合理無菌保證工藝研究不夠全面與細致驗證不充分或未經(jīng)驗證CDESFDA五、總結無菌檢查是有局限性的。質量源于設計、過程控制質量對于保證注射劑的無菌至關重要。CDESFDA謝謝不當之處歡迎批評指正！附錄資料：不需要的自行刪除胸腔穿刺適應證1.明確胸腔積液性質及病原學檢測，以協(xié)助診斷與治療。2.治療用，積液量大產(chǎn)生壓迫癥狀者，胸穿抽液可立即緩解癥狀，膿胸者行抽膿、清洗、注藥。3.氣胸的急癥處理。胸腔穿刺禁忌癥：局部皮膚感染出凝血障礙全身衰竭、休克胸腔穿刺---術前注意事項術前談話（檢查的意義及注意事項），家長簽字；器械及藥品準備：穿刺包及手套，培養(yǎng)基，1～2％普魯卡因（需皮試）或2％利多卡因,消毒液;生命體征評估;胸片、B超或體檢叩診定位。

胸腔穿刺---術中注意事項穿刺點的選擇

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根據(jù)胸片或B超選擇叩診實音且位置偏低部位為穿刺點?！ご罅糠e液時，穿刺點在腋后線第7-9肋間或腋中線第6-7肋間隙；·氣胸穿刺點為鎖骨中線外側第2-3肋間隙；

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包裹性積液，需在X線透視或B超下定位。胸腔穿刺---術中注意事項麻醉：局部麻醉應充分、注意回抽。夾管：夾緊乳膠管避免氣體進入胸腔。速度：抽吸液體時不可過快、過多，以免引起縱隔突然移動。每次總量：嬰幼兒不超過150～200ml、年長兒不超過300～500ml,約20ml/kg。胸腔穿刺---術中注意事項胸膜反應：穿刺過程中患者出現(xiàn)頭暈、面色蒼白、出汗、心悸、氣短時立即停止操作,吸氧、觀察生命體征，必要時給予皮下注射0.1％腎上腺素0.3~0.5ml。穿刺過程中如有咳嗽、胸痛、面色轉變或有嚴重出血即終止抽液，嚴密觀察并對癥處理。胸腔穿刺術后注意事項:

注意觀察有無氣胸等并發(fā)癥,并作相應處理。胸腔穿刺---操作步驟體位：患兒取坐位，患側手臂舉過頭；或反坐于靠背椅上，交叉兩臂在椅背上，重病者可臥床，床頭抬高，作側胸穿刺。定位：術者站在患兒患側，選擇叩診實音且位置偏低的部位，必要時用龍膽紫做記號。3.消毒：按常規(guī)用碘酒與酒精進行局部皮膚消毒。局麻：1%普魯卡因或2％利多卡因局部麻醉皮內、皮下及肋間肌，按照進針、回抽（無回血）、注藥，直至回抽有液體為止，無菌紗布壓迫撤麻藥針。胸腔穿刺---操作步驟5.穿刺：

1）左手食指將準備進針的肋骨上緣皮膚繃緊，

2）右手持尾部連有橡皮管的穿刺針，

3）先用止血鉗夾緊橡皮管，在肋間隙下一肋骨的上緣垂直穿刺進針2-3cm，有阻力消失感表示已達胸腔。胸腔穿刺---操作步驟6.抽液：

1）將橡皮管尾端再接一50ml空針筒，放開止血鉗緩緩抽吸液體。

2）抽滿液體后先用止血鉗夾住橡皮管再移去注射器，將液體送檢或注入器皿中，如此反復抽吸計量。

3）穿刺完畢后，無菌紗布緊壓針眼，在負壓狀態(tài)下連同注射器將針迅速拔出。

4）用消毒紗布蓋住針孔，以膠布固定。胸腔穿刺---相關知識要點胸膜炎分類：干性、漿液纖維素性、化膿性。胸膜炎常見病因：

1）原發(fā)胸膜的疾病：腫瘤、創(chuàng)傷。

2）鄰近組織的疾?。悍尾扛腥?、胸壁或橫膈下感染、縱隔感染或腫瘤。

3）全身性疾?。簲⊙Y、惡性疾病、血管阻塞、結締組織或膠原病、肉芽腫病。滲出液和漏出液的鑒別（見表）。

滲出液和漏出液的鑒別

漏出液滲出液外觀清亮草黃色、稍渾濁比重<1.016~1.018>1.018細胞<100×106/L>500×106/L細胞分類以淋巴細胞與間皮細胞為主急性炎癥，中性粒為主；結核性，淋巴為主蛋白<30g/L,以白蛋白為主>30g/L葡萄糖正常正?；蚪档?/p>

骨髓腔穿刺適應癥：

1)血液病、神經(jīng)母細胞瘤。

2)脂質代謝病、網(wǎng)狀內皮細胞增生癥。

3)骨髓培養(yǎng)。

4)某些寄生蟲病的診斷。

5)緊急輸液骨髓腔穿刺禁忌癥嚴重出血患兒。局部皮膚感染。骨髓腔穿刺術前準備

1)術前談話，家長簽字。

2)骨髓穿刺包一個，普魯卡因一支。2%碘酒，75%酒精，消毒棉簽，無菌棉球，玻片數(shù)張。骨髓腔穿刺-髂后上棘穿刺適用于任何年齡的患兒。操作步驟：

1）患兒側臥位，助手固定下肢及軀干。

2）術者站于同側，常規(guī)消毒鋪巾，穿刺點位于骶椎兩側、臀部上方突出部位,觸摸為棱狀邊緣。

3）術者右手持針與骨面垂直，在穿刺點用普魯卡因作皮內、皮下及骨膜局部麻醉。骨髓腔穿刺-髂