實(shí)驗(yàn)須知和分光光計(jì)的使用第1頁/共21頁實(shí)驗(yàn)須知和分光光度計(jì)的使用生化與分子生物學(xué)教研室第2頁/共21頁一、學(xué)生實(shí)驗(yàn)守則實(shí)驗(yàn)前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、步驟，回答老師的提問。

進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須保持安靜，不準(zhǔn)高聲談笑，注意環(huán)境衛(wèi)生，不準(zhǔn)吸煙，不隨地吐痰，不亂拋紙屑雜物，愛護(hù)公物。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)肅認(rèn)真，專心細(xì)致，要準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，節(jié)約水電和試劑，注意安全，愛護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，如發(fā)生事故時(shí)，應(yīng)迅速停止實(shí)驗(yàn)，設(shè)法制止事態(tài)的擴(kuò)大，并立即向指導(dǎo)老師報(bào)告。第3頁/共21頁

使用精密、貴重儀器，應(yīng)先了解性能和操作方法，未經(jīng)老師同意，不得任意操作，違者按有關(guān)規(guī)定處理。

實(shí)驗(yàn)中不準(zhǔn)動(dòng)用與本實(shí)驗(yàn)無關(guān)及他人使用的儀器設(shè)備、材料和元件。如損壞丟失儀器、配件、工具等，均應(yīng)查清原因，及時(shí)上報(bào)，按已定的賠償辦法辦理；如隱瞞事故不報(bào)者，從重處理。

實(shí)驗(yàn)后要認(rèn)真填寫好實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果、精確處理數(shù)據(jù)、圖表)，如不符合要求的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，應(yīng)退給學(xué)生重做。

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實(shí)驗(yàn)完畢，由指導(dǎo)教師負(fù)責(zé)檢查清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)用的儀器、工具。學(xué)生應(yīng)辦好交接手續(xù)，做好清潔衛(wèi)生，及時(shí)切斷電源、關(guān)好水龍頭，經(jīng)指導(dǎo)教師同意后方可離開實(shí)驗(yàn)室。

本守則由指導(dǎo)教師和參加實(shí)驗(yàn)的人員共同監(jiān)督，嚴(yán)格執(zhí)行。

第5頁/共21頁二、實(shí)驗(yàn)課平時(shí)成績(jī)?cè)u(píng)分標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)課占期末總評(píng)的20%，其中操作考試和平時(shí)成績(jī)各占10%。

平時(shí)成績(jī)的得分包括以下六項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)態(tài)度、實(shí)驗(yàn)紀(jì)律、實(shí)驗(yàn)操作、儀器愛護(hù)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及實(shí)驗(yàn)后清洗。

曠課者當(dāng)次無實(shí)驗(yàn)成績(jī)及得分。

請(qǐng)假一次扣除40分，二次及以上者每次扣70分，直至平時(shí)成績(jī)扣完為止。第6頁/共21頁

遲到或早退一次者扣除10分，二次及以上者每次扣除15分，直至平時(shí)成績(jī)扣完為止。

將實(shí)驗(yàn)物品帶離實(shí)驗(yàn)室者，除處以適當(dāng)罰款外，扣除20分。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告不按時(shí)完成者，扣除10分。每次實(shí)驗(yàn)課后由帶教老師評(píng)出該次平時(shí)成績(jī)。第7頁/共21頁三、酸、堿及苯酚的急救處理（一）酸強(qiáng)酸如硫酸、硝酸、鹽酸、王水（是硝酸與鹽酸的混合物）等（其中硫酸作用最強(qiáng)，鹽酸居末），對(duì)皮膚、粘膜的刺激和腐蝕作用極強(qiáng)。皮膚損傷可用大量清水沖洗，或用4％碳酸氫鈉溶液沖洗，再以生理鹽水冼凈，并按灼傷治療。若吸收了強(qiáng)酸立即選服2.5％氧化鎂溶液或鎂乳（75％氫氧化鎂混懸液）、石灰水的上清液（含0.17氫氧化鈣）、極稀的肥皂水、氫氧化鋁凝膠、生蛋清、牛奶等。忌用碳酸氫鈉及碳酸鈉（因可產(chǎn)生大量氣體導(dǎo)致胃穿孔）。第8頁/共21頁（二）堿強(qiáng)堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、次氯酸鈉、氧化鈉、氧化鉀以及腐蝕作用較弱的碳酸鈉、碳酸鉀、氫氧化鈣、氧化鈣、氫氧化銨等，具有腐蝕性。皮膚損傷可用大量清水沖洗。若誤吸收了強(qiáng)堿立即內(nèi)服弱酸溶液如食用醋第9頁/共21頁（三）苯酚不慎粘在皮膚上，以10%～4O%乙醇或聚乙二醇擦洗受染皮膚，再用清水沖洗至無苯酚味為止。也可用甘油、植物油擦洗皮膚，肥皂水、溫水洗滌，灼傷部用飽和硫酸鈉溶液或5％碳酸氫鈉濕敷。第10頁/共21頁四、生化四大技術(shù)的介紹分光光度法電泳技術(shù)層析技術(shù)

離心技術(shù)第11頁/共21頁五、分光光度計(jì)原理LII0T＝I/I0

透光率A：吸光度、消光度、光密度第12頁/共21頁任何物質(zhì)對(duì)光線都有吸收，而且每種物質(zhì)都有其特有的吸收光譜。相同物質(zhì)在同一條件下，其吸收光譜的強(qiáng)度－吸光度（Aabsorb）與該物質(zhì)的含量成正比例關(guān)系。因此把根據(jù)物質(zhì)吸收光譜的特性進(jìn)行定性或定量分析的方法稱為吸收光譜法或分光光度法。第13頁/共21頁朗伯－比爾（Lambert-Beer）定律：A＝-logI/I0=-logT=KCLA：光密度，吸光度，消光度。

I：透過光強(qiáng)度。

I0：入射光強(qiáng)度。

T：透光度

K：消光系數(shù)。

C：溶液濃度。

L：溶液厚度。吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比LII0第14頁/共21頁標(biāo)準(zhǔn)液：已知的待測(cè)物質(zhì)濃度。A=KLCA標(biāo)/A測(cè)=KLC標(biāo)/KLC測(cè)C測(cè)=C標(biāo)ⅹA/A標(biāo)第15頁/共21頁空白液溶劑空白液：欲測(cè)物有色其他無色。試劑空白液：試劑不加樣品。樣品空白液：不加顯色劑。平行操作空白液：無欲測(cè)物。不顯色空白液：控制操作不發(fā)生顯色反應(yīng)褪色空白液：加褪色劑。第16頁/共21頁光源單色器狹縫比色杯檢測(cè)系統(tǒng)分光光度計(jì)構(gòu)造第17頁/共21頁７２１-Ｅ型分光光度計(jì)使用步驟2.調(diào)到指定波長(zhǎng)4.放入黑體對(duì)光，調(diào)Ｔ＝０，拿出黑體5.將空白液、標(biāo)準(zhǔn)液、待測(cè)液按順序放入比色杯架，空白液置于光路中。6.T=100%；A=07.按Ｍｏｄｅ至Ａ，關(guān)蓋，拉動(dòng)比色槽，進(jìn)行記錄8.取出比色杯，清洗9.調(diào)Ｍｏｄｅ至Ｔ，比色槽歸位第18頁/共21頁分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)分光光度計(jì)屬精密儀器，應(yīng)精心愛護(hù)使用。防震、防潮、防腐蝕。比色杯里的液體要在2/3～3/4之間，不易過多。放在比色箱里之前要擦干表面液體，以防腐