第一頁，共23頁。

緒論第二頁，共23頁。第一節(jié)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展第三頁，共23頁。一、什么是臨床分子生物學(xué)技術(shù)

臨床分子生物學(xué)=分子生物學(xué)+臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)第四頁，共23頁。什么是分子生物學(xué)？

分子生物學(xué)是以核酸和蛋白質(zhì)等生物大分子的結(jié)構(gòu)、功能及其在信號(hào)傳遞中的作用為研究對(duì)象，在分子水平研究生命現(xiàn)象及其規(guī)律的一門學(xué)科。CellNucleusChromosomeProteinGene(DNA)Gene(mRNA),singlestrand第五頁，共23頁。“第一代診斷技術(shù)”

——早期的細(xì)胞學(xué)檢查“第二代診斷技術(shù)”

——生化指標(biāo)分析（20世紀(jì)50年代）“第三代診斷技術(shù)”

——免疫學(xué)診斷（20世紀(jì)60年代）“第四代診斷技術(shù)”——臨床分子生物學(xué)診斷（20世紀(jì)70年代末）臨床診斷技術(shù)的發(fā)展臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展第六頁，共23頁。前三代技術(shù)·

以疾病的表型改變?yōu)橐罁?jù)·非特異性、滯后·難以早期診斷分子診斷·

以疾病基因及表型為探測(cè)對(duì)象·特異、敏感·早期診斷、預(yù)測(cè)第七頁，共23頁。窗口期：HBV56天（縮短6-15天）HCV70天（縮短41-60天）HIV22天（縮短10-15天）第八頁，共23頁。1、尋找分子生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)志物。2、建立實(shí)用、可靠的檢測(cè)技術(shù)方法。進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)和臨床意義評(píng)價(jià)3、建立分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的

質(zhì)量控制和質(zhì)量管理。臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的主要任務(wù)第九頁，共23頁。1978年，KanYuet-Wai首次應(yīng)用液相DNA分子雜交技術(shù)成功的進(jìn)行鐮狀細(xì)胞貧血的產(chǎn)前基因診斷，標(biāo)志著檢驗(yàn)診斷進(jìn)入基因診斷時(shí)代。

二、臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展第一階段：以DNA分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷方法。

-開展遺傳病的基因診斷第十頁，共23頁。簡悅威（美國科學(xué)院院士）：1936年生于香港，1958年畢業(yè)于香港大學(xué)醫(yī)學(xué)院，并于1980年取得香港大學(xué)理學(xué)博士學(xué)位。他于1972年前往加州大學(xué)舊金山分校工作，現(xiàn)為該校羅氏達(dá)蒙教授。KanYuet-WaiYuetWaiKanandAndreeM.Dozy.PolymorphismofDNASequenceAdjacenttoHuman?-globinStructuralGene:RelationshiptoSickleMutation.

Proc.Natl.Acad.Sci.USA1978,75：5631-5635.第十一頁，共23頁。第三階段：以生物芯片技術(shù)為代表的高通量密集型檢測(cè)技術(shù)。

-開展多基因多因素疾病的基因診斷第二階段：以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷方法。

-開展獲得性基因病（病原微生物）的基因診斷

第四階段：以DNA測(cè)序技術(shù)和生物質(zhì)譜技術(shù)為代表的檢測(cè)技術(shù)。第十二頁，共23頁。第二節(jié)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用第十三頁，共23頁?；蚪MDNA是目前最常用的分子靶標(biāo)

DHPLC技術(shù)第十四頁，共23頁。一、病原生物基因組1.菌種鑒定：測(cè)序和探針雜交鑒定結(jié)核桿菌。2.確定病毒感染和病毒載量：3.病毒分析：4.細(xì)菌耐藥性檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查：二、基因變異1.致病基因的分子缺陷：單基因致病基因檢測(cè)2.線粒體基因突變：3.腫瘤相關(guān)基因：4.DNA重排形成融合基因：第十五頁，共23頁。三、基因多態(tài)性1.基因定位和遺傳病相關(guān)性分析2.藥物代謝酶與血藥濃度3.疾病診斷和遺傳咨詢4.多基因病的研究5.器官移植配型和個(gè)體識(shí)別四、循環(huán)游離核酸腫瘤、產(chǎn)前診斷第十六頁，共23頁。第三節(jié)臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展與應(yīng)用第十七頁，共23頁。感染性疾病的分子診斷：病原微生物（病毒、病原菌、

衣原體、螺旋體等）遺傳性疾病的分子診斷：血友病、血紅蛋白病、產(chǎn)前嬰兒檢查腫瘤的分子診斷：個(gè)體化醫(yī)學(xué)：1、臨床應(yīng)用80年代以來，基因檢測(cè)在許多國家已成為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，主要用于感染性和遺傳性疾病等的診斷。第十八頁，共23頁。分子診斷技術(shù)在我國針對(duì)感染性疾病的病原體的分子診斷，有嚴(yán)格的管理-項(xiàng)目報(bào)批：衛(wèi)生部批準(zhǔn)-實(shí)驗(yàn)室：通過驗(yàn)收，定期校驗(yàn)儀器與器材-試劑：國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)

-工作人員：經(jīng)過培訓(xùn)，持證上崗-質(zhì)量控制：室內(nèi)質(zhì)量控制，室間質(zhì)量評(píng)價(jià)針對(duì)遺傳性疾病的分子診斷？！針對(duì)多基因（多因素）疾病的分子診斷？！

第十九頁，共23頁。2、存在的問題①假陽性和假陰性問題②重復(fù)性問題③檢測(cè)結(jié)果可比性差，難于質(zhì)控，使分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化和監(jiān)管體系問題已迫在眉睫④儀器設(shè)備要求苛刻、操作復(fù)雜、費(fèi)用高第二十頁，共23頁。分子診斷廣泛應(yīng)用于臨床的前提

——分子診斷技術(shù)方法的標(biāo)準(zhǔn)化建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化操作程序建立分子診斷的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)化建立分子診斷項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控和室間評(píng)價(jià)系統(tǒng)

第二十一頁，共23頁。①從單一病因診斷發(fā)展到綜合檢驗(yàn)診斷。3、發(fā)展趨勢(shì)②從利用分子雜交、PCR等單一技術(shù)的診斷發(fā)展到