藥物的雜質(zhì)檢查授課人：趙丹2基本內(nèi)容第一節(jié)概述第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法基本要求練習(xí)與思考3

一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計(jì)算。二、熟悉特殊雜質(zhì)檢查的方法和原理。三、了解熱分析在藥物分析中的應(yīng)用。返回基本要求41．藥物的雜質(zhì)：藥物中存在的無(wú)治療作用，或影響藥物穩(wěn)定性和療效甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。藥物的純度：藥物的純度是指藥物的純潔程度。藥物純度的要求是不斷提高基本方法：對(duì)照法靈敏度法比較法生物學(xué)方法第一節(jié)概述5雜質(zhì)的來(lái)源來(lái)源類型生產(chǎn)過(guò)程藥物的合成過(guò)程：未反應(yīng)的原料、中間體、副產(chǎn)物制劑過(guò)程：輔料、添加劑藥物生產(chǎn)過(guò)程：試劑、溶劑殘留貯藏過(guò)程降解6雜質(zhì)的種類分類依據(jù)種類雜質(zhì)來(lái)源一般雜質(zhì)：主要在生產(chǎn)中引入特殊雜質(zhì)：生產(chǎn)、貯藏中引入雜質(zhì)毒性有毒雜質(zhì)：如重金屬、砷鹽信號(hào)雜質(zhì)：氯化物、硫酸鹽等理化性質(zhì)有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)、殘留溶劑7第三節(jié)雜質(zhì)的限量檢查方法特點(diǎn)對(duì)照法與一定量被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)照靈敏度法加入一定量的試劑，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)比較法測(cè)定待檢雜質(zhì)的參數(shù)（如吸光度）與規(guī)定限量比較

1．定義：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。通常用百分之幾或百萬(wàn)分之幾（ppm）來(lái)表示。8

一、氯化物的檢查第四節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法1.原理：2.反應(yīng)條件：氯化物濃度以50ml含有50－80ug為宜，即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5－8ml。酸度：50ml中含10ml稀硝酸溫度：30-40℃3.干擾的排除供試品液混濁：可用含硝酸的蒸餾水洗凈氯紙中氯化物后過(guò)濾來(lái)消除混濁對(duì)氯化物檢查的干擾。9二、硫酸鹽的檢查1.原理：

與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液（硫酸根離子濃度100ug/ml）在相同條件下產(chǎn)生渾濁程度比較。10

（一）硫氰酸鹽法

1．原理Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

紅色

2．條件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1～5ml。酸度稀鹽酸4ml/50ml，作用是防止三價(jià)鐵水解。

HCl三、鐵鹽檢查法113．干擾的排除（1）當(dāng)有Fe2+存在時(shí)，加氧化劑過(guò)硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+。（2）當(dāng)供試液管與對(duì)照溶液管色調(diào)不一致，或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時(shí)，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。12四、重金屬檢查法

重金屬是指在實(shí)驗(yàn)室條件下與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，由于藥品生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)比較多，鉛在體內(nèi)友易積蓄中毒，故檢查時(shí)以鉛作為代表。

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四、重金屬檢查法檢查方法適用范圍硫代乙酰胺法溶于水、稀酸和乙醇的藥物（最常用）合理pH值：3.0~3.5，有利于沉淀較完全熾灼后的硫代乙酰胺法芳環(huán)雜環(huán)藥物，或難溶于以上溶劑的藥物硫化鈉法溶于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸析出沉淀的藥物微孔濾膜法限量較低的重金屬藥物14五、砷鹽檢查法檢查方法藥典古蔡氏法中國(guó)藥典、日本藥局方、英國(guó)藥典二乙基二硫代氨基甲酸銀法中國(guó)藥典、日本藥局方、美國(guó)藥典次磷酸法

英國(guó)藥典白田道夫法151.古蔡氏法原理：新生態(tài)氫與砷鹽反應(yīng)生成砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑注意事項(xiàng)：中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)砷斑制備：2ml的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（2ug）加入KI和SnCl2的作用：將五價(jià)砷還原成三價(jià)砷；抑制銻化氫的生成（銻化氫也能與溴化汞生成砷斑）。醋酸鉛棉花的作用：吸收硫化氫，防止后者與溴化汞生成硫化汞。對(duì)于S2-、SO32-、S2O32-等砷鹽：應(yīng)該加硝酸處理氧化成SO42-除去干擾。對(duì)于Fe3＋：需要先還原成低價(jià)的鐵離子，否則能消耗KI和SnCl2含銻藥物：改用白田道夫法AsH3生成162.二乙基二硫代氨基甲酸銀法Ag(DDC)法原理：新生態(tài)氫與砷鹽反應(yīng)生成砷化氫，還原Ag(DDC)產(chǎn)生紅色膠態(tài)銀，與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同法操作進(jìn)行比較。注意事項(xiàng)：砷濃度為1-10ug/40ml范圍線性良好。3.次磷酸法原理：在鹽酸酸性溶液中，能將砷鹽還原成棕色游離砷。適用于：

S2-、SO32-以及含銻的砷鹽檢查，但靈敏度比古蔡氏法低。17六、溶液顏色檢查法

溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。中國(guó)藥典（2010年版）收載有三種方法：K2Cr2O7黃、綠

1.標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法標(biāo)準(zhǔn)比色液CoCl2橙黃,橙紅

2.分光光度法CuSO4棕紅

3.色差計(jì)法通過(guò)測(cè)定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液或水之間的色差值18七、易炭化物檢查法

是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法進(jìn)行檢查。(標(biāo)準(zhǔn)比色液為CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4)

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是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的方法進(jìn)行檢查。濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理：

(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混濁

不同級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液

級(jí)號(hào)0.51234濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml）2.55.010.030.050.0

水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度檢查法20九、熾灼殘?jiān)鼨z查法BP稱硫酸灰分是檢查有機(jī)藥物中混入的各種無(wú)機(jī)雜質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。

殘?jiān)佰釄逯亍?/p>

坩堝重

殘?jiān)?=×100%

供試品重21十、干燥失重檢查法

主要檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性的物質(zhì)。常采用重量方法進(jìn)行檢查。常用的方法有四種：（一）常壓恒溫干燥法

（二）干燥劑干燥法

（三）

減壓干燥法22熱分析法物理性質(zhì)技術(shù)名稱簡(jiǎn)稱質(zhì)量熱重分析法TGA溫度差熱分析法DTA焓差示掃描量熱法DSC定義：在程序控溫條件下，測(cè)定物質(zhì)的理化性質(zhì)與溫度之間關(guān)系的一類技術(shù)。原理：物質(zhì)在溫度改變過(guò)程中會(huì)發(fā)生融化、升華、相轉(zhuǎn)變、晶型改變、脫水、脫氫或分解等反應(yīng)，從而造成理化性質(zhì)（溫度、能量或質(zhì)量）的改變。分類：231.熱重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升溫下，測(cè)量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系，研究物質(zhì)在加熱同時(shí)失重的情況下，所發(fā)生的質(zhì)的變化，常用于藥物穩(wěn)定性的研究；貴重和易氧化藥物的干燥失重測(cè)定。(長(zhǎng)春堿)熱分析法242.差熱分析法（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升溫下，測(cè)量被測(cè)物質(zhì)和參比物之間的溫差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過(guò)程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化。因此溫差(△T)只與被測(cè)物質(zhì)的量質(zhì)變化有關(guān)?！鱐=0被測(cè)物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng);△T=-為吸熱峰;△T=+為放熱峰.25差熱分析法定義：是在程序控制溫度下，測(cè)量物質(zhì)與參比物之間的溫度差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)?？捎脺y(cè)溫檢流計(jì)代替

26差示掃描熱分析差示掃描量熱法是在程序控制溫度下，測(cè)量輸給待測(cè)物質(zhì)和參比物的量熱差與溫度（或時(shí)間）關(guān)系的一種技術(shù)。熱分析法應(yīng)用1）多晶型機(jī)器轉(zhuǎn)變的表征2）藥物的純度測(cè)定27十一、殘留溶劑測(cè)定法1.定義：是指原輔料合成或制劑生產(chǎn)過(guò)程中使用的、但在工藝中未能完全除去的有機(jī)溶劑。2.分類：3類毒性較大、有致癌并對(duì)環(huán)境有害——避免使用；有一定毒性——限量使用；毒性較小——推薦使用。3.檢查方法：GC法色譜柱：填充柱、毛細(xì)管柱檢測(cè)器：常用FID，對(duì)含鹵素元素的用ECD（電子捕獲檢測(cè)器）28氣相色譜載氣減壓閥凈化器氣流調(diào)節(jié)閥轉(zhuǎn)子流量計(jì)氣化室色譜柱檢測(cè)器29色譜柱填充柱：內(nèi)徑4-6mm，長(zhǎng)度2-4m毛細(xì)管柱：內(nèi)徑0.1-0.5mm，長(zhǎng)度幾十米分配柱：固定液（高沸點(diǎn)液體）作固定相吸附柱：吸附劑（高分子多孔小球）按柱粗細(xì)分按分離原理固定液：高沸點(diǎn)液體，在操作溫度下為液態(tài)，在室溫時(shí)為固態(tài)或液態(tài)。30GC法測(cè)定溶劑殘留1.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)：填充柱>1000，毛細(xì)管柱>5000。分離度：>1.5重現(xiàn)性：內(nèi)標(biāo)法<5%，外標(biāo)法<10%拖尾因子：>2，含量就不準(zhǔn)確2.測(cè)定方法：毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣等溫法（第一法）：殘留溶劑種類少，而且極性差異較小毛細(xì)管柱頂空進(jìn)樣程序升溫法（第二法）：有機(jī)溶劑種類多，且極性差異較大;溶液直接進(jìn)樣法：多用于填充柱31頂空進(jìn)樣頂空進(jìn)樣技術(shù)：是將待測(cè)樣品置入一密閉的容器中，通過(guò)加熱升溫使揮發(fā)性組分從樣品基體中揮發(fā)出來(lái)，在氣-液(或氣-固)兩相中達(dá)到平衡，抽取頂部氣體進(jìn)行色譜分析，從而檢驗(yàn)樣品中揮發(fā)性組分的成分和含量。

VgVs適用對(duì)象：樣品中痕量高揮發(fā)性物質(zhì)的測(cè)定3233第五節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查方法有關(guān)物質(zhì)：指藥物中可能存在的原料、中間體、副產(chǎn)物、異構(gòu)體、聚合體和降解產(chǎn)物等與藥物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)的一類物質(zhì)的總稱。檢查方法：一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異1、臭味及揮發(fā)性的差異2、顏色3、溶解行為4、旋光性質(zhì)5、對(duì)光吸收性質(zhì)6、吸附和分配性質(zhì)的差異34光譜分析法一、紫外分光光度法如果藥物在雜質(zhì)的λmax處無(wú)吸收，則可以在此波長(zhǎng)測(cè)定樣品溶液的A值，從而通過(guò)樣品溶液的A值來(lái)控制雜質(zhì)的量。例子見(jiàn)P74。二、紅外分光光度法主要用于藥物中無(wú)效或低效晶型的檢查。三、原子吸收分光光度法主要用于（超）微量元素的分析，金屬雜質(zhì)四、熒光分析法35薄層色譜法雜質(zhì)對(duì)照品法：適合有雜質(zhì)對(duì)照品供試品溶液自身稀釋對(duì)照法：沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品，而且雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色與主成分的相同或相近。雜質(zhì)對(duì)照法與自身稀釋對(duì)照法并用：對(duì)照藥物法：無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品，而且雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分的差異較大。S1S2雜質(zhì)5ug/ml123C1S40C22ug/ml123C20.2C15ug/ml123對(duì)照品5ug/ml1036高效液相色譜法外標(biāo)測(cè)定法：適合有對(duì)照品的雜質(zhì)，而且能夠準(zhǔn)確進(jìn)樣加校正因子的主成分自身對(duì)照測(cè)定法：沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品，而且雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色與主成分的相同或相近。不加校正因子的主成分自身對(duì)照測(cè)定法：面積歸一法：粗略估計(jì)雜質(zhì)含量。37氣相色譜法內(nèi)標(biāo)加校正因子測(cè)定法：適合有對(duì)照品的雜質(zhì)，并能夠測(cè)定雜質(zhì)的校正因子的情況。外標(biāo)測(cè)定法：適合有對(duì)照品的雜質(zhì)，而且能夠準(zhǔn)確進(jìn)樣面積歸一法：粗略估計(jì)雜質(zhì)含量。標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：將一定量的雜質(zhì)對(duì)照品溶液精密加入供試品溶液中；根據(jù)外標(biāo)或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定總雜質(zhì)含量，再扣除加入的雜質(zhì)對(duì)照品的含量，即得到供試品中雜質(zhì)的含量：38色譜法1、薄層色譜法2、高效液相色譜法3、氣相色譜法4、毛細(xì)管電泳法39二、化學(xué)方法1、酸堿性的差異2、氧化還原性的差異3、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀4、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色5、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體6、藥物經(jīng)有機(jī)破壞后檢查雜質(zhì)4041練習(xí)與思考

[A型題]1．含銻藥物的砷鹽檢查方法為A.古蔡法B.碘量法C.白田道夫法D.Ag-DDCE.契列夫法