微生物的培養(yǎng)與利用培養(yǎng)與分離某種微生物數量的測定培養(yǎng)基對微生物的選擇作用利用微生物進行發(fā)酵來生產特定的產物發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的測定微生物

原核生物界

原生生物界真菌界病毒界一、微生物的類群(細菌、放線菌、藍藻)(酵母菌、霉菌、大型真菌)(草履蟲、變形蟲、衣藻)(噬菌體、艾滋病毒)特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.類群結構特點遺傳物質繁殖方式舉例病毒原核生物界真菌界原生生物界無細胞結構原核(細胞壁、膜、質)真核(細胞壁、膜、質、核)真核(細胞膜、質、核)噬菌體煙草花葉病毒流感病毒細菌(形狀菌)放線菌霉菌、蘑菇、酵母菌衣藻、草履蟲、變形蟲DNA或RNADNADNADNA增殖：吸附→注入→合成→裝配→釋放分裂生殖(二分裂)孢子生殖出芽生殖分裂生殖有性生殖細菌的代謝自養(yǎng)硝化細菌、鐵細菌、硫細菌等。異養(yǎng)大腸桿菌、乳酸菌、枯草桿菌等?？莶輻U菌、硝化細菌、鐵細菌、根瘤菌等。破傷風桿菌、乳酸菌等。需氧型：厭氧型：二、培養(yǎng)基：培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。１、概念：２、營養(yǎng)成份：營養(yǎng)成份：水、碳源、氮源、無機鹽其它：ＰＨ、特殊營養(yǎng)物質、氧氣（Ｐ15）3、培養(yǎng)基的類型和用途（1）按物理狀態(tài)來分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。

其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。（2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1、伊紅美藍培養(yǎng)基為常用鑒別培養(yǎng)基

2、剛果紅與纖維素等多糖類物質反應形成紅色復合物，添加剛果紅的培養(yǎng)基呈紅色，接種的微生物若能夠分解纖維素，就會在其菌落的周圍形成透明圈

（5）鑒別培養(yǎng)基4、培養(yǎng)基配制的操作步驟：三、無菌技術操作

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。四、微生物的純化培養(yǎng)：自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純化培養(yǎng)，首先要將單個細胞與其他細胞分離開，進而培養(yǎng)成可見的群體。包括培養(yǎng)基的制備和純化微生物兩個階段，純化微生物時常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（一）.微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算稱量溶化滅菌倒平板（1）、溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中，減少誤差。（2）、加瓊脂的目的是什么?作為凝固劑（二）、純化大腸桿菌5、倒平板（二）純化大腸桿菌（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基三、純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌1、接種最常用方法有：（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基三、純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌1、接種最常用方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法2、平板劃線法（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基三、純化大腸桿菌劃線接種的基本步驟和說明:序列

操作步驟

分析說明1將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅將接種環(huán)滅菌，避免污染菌種2在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔除盛有菌液的試管棉塞避免雜菌污染菌種3將試管口通過火焰灼燒滅菌，防止試管口菌體污染培養(yǎng)基4將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取菌液冷卻接種環(huán)可避免殺死菌種5將試管口通過火焰，并塞上棉塞避免試管口雜菌污染菌種6左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基初步接種。劃破培養(yǎng)基不利于后續(xù)的繼續(xù)劃線，長出的菌落不標準7灼燒接種環(huán)，冷卻后從第一區(qū)劃線的末端向第二區(qū)劃線。重復以上操作，在第三、四、五區(qū)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連從上個區(qū)域的末端向下個區(qū)域劃線,可逐步分離出單個菌體，從而實現(xiàn)微生物的純化8將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)倒置平板防止水分蒸發(fā)，也方便拿放（1）系列稀釋操作：1、接種最常用方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法2、平板劃線法3、稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：（二）純化大腸桿菌（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基三、純化大腸桿菌（2）涂布平板操作四、菌種的保藏1.斜面保藏臨時保存2.甘油保藏長期保存3、某種微生物數量的測定生長：個體體積的增加繁殖：個體生長到一定階段，通過特定方式產生新個體，即引起生命個體數量增加的生物學過程。在微生物學中提到的“生長”，一般均指群體生長，這一點與研究大生物時有所不同。細菌太小，往往討論其群體生長。（一）微生物生長概述

1、稀釋平板計數法

對樣品進行適當稀釋→

單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長、繁殖→

肉眼可見的菌落→

對菌落數目的計數推測樣品中的微生物細胞數（二）以數量變化對微生物生長情況進行測定同一稀釋度三個以上重復,取平均值；每支移液管及涂布器只能接觸一個稀釋度的菌液；樣品充分混勻；每個平板上的菌落數目合適，便于準確計數；要求：每克樣品中的菌株數=（C/V）*M2.顯微鏡直接計數法采用細菌計數板或血球計數板，顯微鏡下直接計數（計算一定容積里樣品中微生物的數量）。取清潔無油的血球計數板，在計數室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數室內不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計數室移至視野中央。在10×鏡下計數：計數4個（或5個）中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出計數區(qū)總菌數，最后再換算到每mL菌液中的含菌數。注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半必修3P68顯微鏡直接計數法缺點：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；

課題名稱實驗儀器和設備

實驗試劑或藥品說明微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶、量筒、酒精燈、電子天秤、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、接種環(huán)、涂布器、恒溫箱、干熱滅菌箱、小鐵鏟等

牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、鹽酸、氫氧化鈉、瓊脂等干熱滅菌箱能夠迅速地將洗干凈的培養(yǎng)皿和試管烘干，小鐵鏟用于鏟土土壤中分解尿素的細菌的分離與計數除配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需物質外，增加KH2PO4

、NaHPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、酚紅等分解纖維素的微生物的分離除配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需物質外，增加纖維素、NaNO3、Na2HPO4·7H2O、KH2PO4、KCl、酵母膏、水解酪素、CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)、土豆汁、剛果紅等土壤取樣

選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應根據樣品中目的菌株數量的多少來確定）

梯度稀釋

將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上挑選單菌落發(fā)酵培養(yǎng)土壤中某樣品細菌的分離與計數流程圖表示如下：（09寧夏理綜）32．生物選考題A．[生物———選修I生物技術實踐]某小組同學為了調查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數。請回答與此實驗相關的問題。（1）培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了___和_____

。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是____和____。（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，應該采用的方法是_______。碳源氮源無機鹽高壓蒸汽滅菌水（09寧夏理綜）32．生物選考題（3）為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，應將接種了湖水樣品的平板置于______中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設定在37℃。要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種______作為對照進行實驗。（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有_____種細菌。一般說來，菌落總數越多，湖水遭受細菌污染的程度越_______。（5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐_______細菌，這種培養(yǎng)基被稱為____。恒溫培養(yǎng)箱無菌水多高鹽（或NaCl）選擇性培養(yǎng)基4、利用微生物進行發(fā)酵來生產特定的產物（1）果酒和果醋的制作（2）腐乳的制作（1）果酒和果醋的制作果酒制作的原理：酵母菌有氧呼吸無氧呼吸酶C6H12O6+6H2O+6O26CO2+12H2O+能量C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量酶最適溫度200C醋酸菌最適溫度300C—350C特性好氧細菌糖分醋酸醋酸菌醋酸菌死亡乙醇乙醛醋酸當氧氣、糖源充足時：當短時間中斷氧氣時：當缺少糖源時：C2H5OH+O2CH3COOH+H2O果醋制作的原理：實驗流程示意圖:挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵果醋果酒（1）毛霉菌（2）根霉菌（3）曲霉（4）青霉（5）酵母菌1、釀造腐乳的微生物（2）腐乳的制作2、腐乳制作的原理腐乳釀造是利用豆腐坯上培養(yǎng)的毛霉或根霉，培養(yǎng)及腌制期間由外界侵入微生物的繁殖，以及配料中加入的紅曲中的紅曲霉、面包曲中的米曲霉、酒類中的酵母等所分泌的酶類，在發(fā)酵期間，引起極其復雜的化學變化。蛋白質：水解成肽、氨基酸；淀粉：糖化，發(fā)酵成乙醇和其他醇類及有機酸；同時輔料中的酒類及添加的各種香辛料等也共同參與作用，合成復雜的酯類，最后形成腐乳所特有的色、香、味、體等，使成品細膩、柔糯而可口。3、腐乳制作的實驗流程讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制5、發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的測定（一）、泡菜的制作1、泡菜制作基礎知識（1）乳酸菌乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細菌，在無氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。（2）亞硝酸鹽亞硝酸鹽(包括亞硝酸鉀和亞硝酸鈉)為白色粉末，易溶于水。當人體攝入的亞硝酸鹽總量達到0.3～0.5g時，會引起中毒，達3g時會引起死亡。（3）腌制條件腌制過程中，要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。溫度過高、食鹽用量不足10％、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽