直鏈淀粉和支鏈淀粉的測定(雙波長法)一、目的淀粉一般都是直鏈淀粉和支鏈淀粉的混合物雙波長測定谷物中直鏈淀粉和支鏈淀粉的含量。二、原理溶質(zhì)濃度成正比。分別與碘反響，然后在同一個坐標系里進展掃描〔400-960mm〕或做吸取曲線，可以得到圖所示結(jié)果。圖作圖法選擇淀粉的測定波長圖中1為直鏈淀粉的吸取曲線，2為支鏈淀粉的吸取曲線對含有直鏈淀粉和支鏈淀粉的未知樣品，與碘顯色后，只要在選定的波λ1，λ 2，λ 3，λ 4，處作4次比色，利用直鏈淀粉和支鏈淀粉標準曲線即可分別求出樣品中兩類淀粉的含量。三、儀器、試劑和材料儀器〔1〕電子分析天平〔2〕索氏脂肪抽提器1套〔3〕分光光度計1臺〔4〕pH計〔5〕容量瓶100mlX2，50mlX16〔6〕吸管0.5mlX1，2mlX1，5mlX1試劑〔1〕乙醚或石油醚〔沸程30-60℃〕〔2〕無水乙醇〔3〕0.5ml/LKOH溶液〔4〕0.1mol/LHCl溶液碘試劑：稱取碘化鉀2.0g，溶于少量蒸餾水，再加碘0.2g，待溶解后用蒸餾水稀l00ml.0.1000g，放在100ml0.5mol/LKOH10ml，在熱水中待溶解后，取出加蒸餾水定容至100ml，即為1mg/ml直鏈淀粉標準溶液。0.1000g〔6〕法制備成1mg/ml支鏈淀粉標準溶液。材料供試谷物粉。四、操作步驟.選擇直鏈、支鏈淀粉測定波長、參比波長。直鏈淀粉：取1mg/ml直鏈淀粉標準液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸餾水30ml，以0.1mol/LHCl溶液調(diào)至pH3.50.5ml20min，吸取曲線。1mg/ml支鏈淀粉標準液1ml50ml在同一坐標內(nèi)獲得支鏈淀粉可見光波段吸取曲線。依據(jù)原理局部介紹的方法，確定直鏈淀粉和支鏈淀粉的測定波長、參比波λ 2、λ 1、λ4和λ3。.制作雙波長直鏈淀粉標準曲線：吸取1mg/ml直鏈淀粉標準溶液0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3ml分別放入6只不同的50ml30ml0.1mol/LHCl溶液調(diào)至pH3.50.5ml20min，以蒸1cm比色杯在λ1、λ2Aλ1，Aλ2即得△A直=Aλ1-Aλ2以△A直為縱坐標，直鏈淀粉含量〔mg〕為橫坐標，制備雙波長直鏈淀粉標準曲線。.1mg/ml支鏈淀粉標準溶液2.02.5、3.0、3.5、4.04.5分別放入6只不同的50ml用1cm比色杯在λ3，λ4Aλ3，Aλ4A=Aλ4-Aλ 3。以△A支為縱坐標，支鏈淀粉含量〔mg〕為橫坐標，制備雙波長支鏈淀粉標準曲線。樣品中始終鏈淀粉、支鏈淀粉及總淀粉的測定：樣品粉碎過60目篩，用乙醚脫脂，稱取脫脂樣品0.1g左右〔準確至1mg，置于50ml容量瓶中。加0.5mol/LKOH溶液10m，在沸水浴中加熱10mi，取出，以蒸餾水定容至50ml假設(shè)有泡沫承受乙醇消退，靜置。吸取樣品液 2.5ml兩份〔即樣品測定液和空白液〕，均加蒸餾水30ml，以0.1mol/LHCI溶液調(diào)至pH3.5左右，樣品中參加碘試劑0.5ml，空白液不加碘試劑然后均定容至50ml靜置20min以樣品空白液為比照用1cm比色杯分別測定λ 2，λ1，λ 4，λ 3的吸取值A(chǔ)λ 2，Aλ 1，Aλ 4，Aλ 3。得到△A直=Aλ2-Aλ 1，△A支=Aλ 4-Aλ 3。分別查兩類淀粉的雙波長標準曲線，即可計算出脫脂樣品中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量。二者之和等于總淀粉含量。五、結(jié)果處理式中，X1一查雙波長直鏈淀粉標準曲線得樣品液中直鏈淀粉含量〔mg〕X2一查雙波長支鏈淀粉標準曲線得樣品液中支鏈淀粉含量〔mg〕m一樣品質(zhì)量〔g〕總淀粉〔%〕=直鏈淀粉〔%〕+支鏈淀粉〔%〕六、留意事項定的谷物類型選擇不同支鏈淀粉純品〔蠟質(zhì)或非蠟質(zhì)型。七、思考題雙波長法測定谷物中直鏈、支鏈淀粉的原理是什么？除了雙波長法外，比色法〔620nm〕其原理，比較不同方法的優(yōu)缺點。直鏈淀粉,支鏈淀粉測定試劑盒(doc11)的資料簡介：淀粉測定試劑盒用于測定淀粉中的直鏈淀粉和支鏈淀粉含量AMYL11/99簡介:打算谷物淀粉最終的特別用途取決于淀粉眾多特性中的直鏈淀粉/支鏈淀粉比率，因此，對于淀粉加工企業(yè)，淀粉中直鏈淀粉含量是一項格外重要的指標。通過測定碘與直鏈淀粉結(jié)合生成直鏈淀粉-碘復(fù)合物的方法來評估直鏈淀粉含量，然而由于支鏈淀粉-碘復(fù)合物在此過程中同樣會形成，因此這些方法的準確Gibsonetal11。A(ConA)沉降支鏈淀粉，然后測定直鏈淀粉含量的方法，在特定的溫度、pH，ConA可以特定的連接含吡喃葡萄糖基[a-D-glucosepyranosyl]或吡喃甘露基淀復(fù)合物。原理:參加二甲基亞砜(DMSO)的淀粉樣品通過加熱被完全溶解，乙醇洗脫樣品中的油脂，回收洗滌后的淀粉樣品，并用醋酸/ConA//鈉鹽溶液中的總淀粉同樣可以被水解成葡萄糖，并利用萄糖氧化酶/過氧化物酶測定葡AGOPOD直鏈淀粉的濃度，同樣道理可計算出總淀粉濃度。此方法適用于全部的純潔淀粉樣品和谷物面粉。對于純潔淀粉和~10%的谷物面粉，批內(nèi)偏差<5%試劑盒內(nèi)供給有足夠50-100次試驗用的試劑分析方法ConA(200mg)淀粉葡萄糖苷酶/真菌α-淀粉酶懸浮液葡萄糖測定液葡萄糖反響緩沖液葡萄糖標準液〔含有特定的直鏈淀粉〕安全手冊:水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉測定法GB7648—87適用范圍本標準適用于水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉含量的測定。參考標準GB5006—85《谷物籽粒粗淀粉測定法》GB3523—83《谷類、油料作物種子水分測定法》測定原理淀粉與碘形成碘-淀粉復(fù)合物，并具有特別的顏色反響。支鏈淀粉與碘生成與直鏈淀粉濃度呈線性關(guān)系，可用分光光度計測定。儀器、設(shè)備粉碎機〔試驗室用旋風(fēng)磨〕。分光光度計：721分析天平：感量0.0001g。玻璃儀器：50ml，100ml試劑配制除注明者外均為分析純，水為蒸餾水。氫氧化鈉〔GB629—81〕，1mol·L-1、0.09mol·L-1水溶液，準確標定。冰乙酸〔GB676—78〕，1mol·L-1水溶液，準確標定?！睪B1272—77〕用蒸餾水溶10ml1mg/ml，取烘干〔55～56℃真空枯燥〕的馬鈴0.1000g100ml快速冷卻后，用水定容。1mg/ml稱取重量相當于含100ml1ml9ml1mol·L-1氫10min，快速冷卻后，用水定容。5.6石油醚〔HG3—1003—76〕，60～90℃。樣品的選取和制備將樣品選擇干凈〔谷子脫殼、稻谷制成精米〕，按四分法取樣20g。0.177mm〔80〕，混勻裝入磨口瓶備用。測定步驟混合校準曲線繪制、1.00、1.50、2.00ml，1mg/ml5、4.75、4.54.003.503.00ml5ml1100ml氫氧化鈉溶液5ml作空白。然后于各瓶中依次參加約50ml水、1ml1mol·L-1乙1ml10min，620nm程。樣品測定GB3523—83《谷類、油料作物種子水分測定法》測定樣品的粗淀粉含量和水分。0.1000g〔如按樣品干重計算直鏈100ml1ml9ml1mol·L-110min，快速冷卻，用水定容。7～10ml10min15min，分層后用連接在水泵上的吸管抽吸，吸去上部石2～3〔精米脫脂二次，玉米、谷子須脫脂三次〕。100ml50ml，1mol·L-11ml1ml10min620nm處讀取吸光度。注：測定樣品與繪制校準曲線時的溫度相差不能超過±1℃。結(jié)果計算計算公式〔％，占淀粉總量〕按式〔1〕計算：〕=〔G×100/〔m×5〕〕1×100…………………〔1〕〔％，占樣品干重〕按式〔2〕計算：m×5×〔1-H〕〕2×100……………〔2〕mg；m100mg；1m，100mg；2結(jié)果表示GB1.1—81C。結(jié)果的允許誤差兩個平行測定值的相對誤差，不得超過2％。附錄A馬鈴薯直鏈淀粉純品制備方法〔參考件〕儀器、設(shè)備離心機〔4000r/min〕。電動攪拌器。冰箱。真空枯燥箱。磁力攪拌器。2322130～1.000V試劑除注明者外，均為分析純，水為蒸餾水。氫氧化鈉〔GB629—81〕，0.5mol·L-1水溶液。鹽酸〔GB622—77〕，1mol·L-1、1.5mol·L-1、2mol·L-1水溶液。A.2.3正丁醇〔HG3—1012—76〕。A.2.4異戊醇〔HG3—996—76〕。優(yōu)級純〕用水溶1000ml8.34×10-4mol·L-1?！睪B1272—77〕1000ml，0.4mol·L-1。制備方法10g350ml0.5mol·L-120min4000r/min離1.5mol·L-1pH6.5〔pH〕，然后參加冷卻至室溫。4000r/min15min，棄掉上清液，沉淀物即為粗直鏈淀粉。用飽和正丁醇水溶液洗滌沉淀物〔粗直鏈淀粉〕，4000r/min15min，200ml冷卻至室溫，放入冰箱內(nèi)〔2～4℃〕24h，4000r/min200ml得直鏈淀粉純品。純品質(zhì)量鑒定淀粉含量測定氫氧化鈉在沸水浴中加熱分散，再參加21.5ml2mol·L-12h，用費林氏液法〔GB5513—85〕0.9粉量，計算純品含量。碘-淀粉復(fù)合物吸取光譜測定2ml〔1mg/ml〕0.09mol·L-1氫氧化鈉溶液3ml加50ml1mol·L-11ml1mll10min，500～800nm碘結(jié)合量測定測定稱取重量相當于含0.1000g淀粉的烘干馬鈴薯直鏈淀粉純品于100ml容量0.5mol·L-110ml，置沸水浴5ml〔5mg〕200ml85ml水，5ml1mol·L-15ml0.4mol·L-1碘化鉀溶液，按電位滴定裝置要求，把燒杯置于電磁攪拌器上，將鉑電極及甘汞電極插入液面下，在5ml0.2m〔或1min計算，mg；碘酸鉀溶液滴定體積，ml；0.6346──8.34×10-4mol·L-1碘酸鉀溶液相當于碘的質(zhì)量，0.6346mg。馬鈴薯直鏈淀粉純品標準a.λc.19.5d.

640～650nm；b.85％max，λmax20℃340附錄B水稻、