液相色譜維護基礎知識第1頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日內(nèi)容介紹時間內(nèi)容負責人8:30-9:00簽到9:00-9:10開場致辭內(nèi)容介紹陳有新9:10-10:00氣相色譜基礎理論及氣相色譜分析方法改善王妍10:05-10:15休息茶歇抽獎10:15-10:45氣相色譜柱的維護與選擇鄒敏10:45-11:30液相色譜柱實用技術及液相色譜維護保養(yǎng)陳有新11:30-11:50島津公司最新UFMS產(chǎn)品介紹陳有新11:50-12:00抽獎答疑郭志遠12:00-13:30精美中餐中聯(lián)大酒店第2頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜實用技術2013年12月17日丹東第3頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日內(nèi)容介紹液相色譜基礎介紹液相色譜柱種類介紹液相色譜柱常見問題解決液相色譜柱的保養(yǎng)第4頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日HPLC工作流程圖

第5頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱

在一個圓筒型管子里，填裝細微顆粒的填料，是整個分析過程的心臟。有各種類型的填料（分離模式），要根據(jù)分析的目的成分的不同，進行合理的選擇與使用。第6頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱橫截面（單位：mm）HPLC色譜柱（一般情況,20～300mm×1～4.6mmI.D.)

（材質：SUS、PEEK）填料（單位：μm）?硅膠?聚合物擴大擴大無數(shù)的細孔（單位：10nm）官能基色譜柱和填料7第7頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日正相填料（固定相極性>流動相極性）反相填料（固定相極性<流動相極性）離子交換型填料尺寸排阻型填料其他不同填料對應不同的分離模式用途不同的填料分類8第8頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日液相色譜柱鍵合相選擇參考名稱

別名

功能基團

正相

反相

離子對

應用

Silica

-OH√

極性和中等極性以及非離子性有機化合物

Bμtyl

C4

-C4H9

√

√

分離肽和蛋白質，保留時間比C8和C18短。

MOS

C8,Octyl

-C8H17

√

√

中等極性到強極性化合物，小肽和蛋白質，極性藥物、甾族環(huán)境樣品。

ODS

C18

-C18H37

√

√

烷基鍵合相中對中等極性化合物保留最強。廣泛用于藥物、甾族化合物、脂肪酸和環(huán)境樣品。

CPS

CN,Cyano(Propylnitrile)-(CH2)3CN

√

√

對極性化合物有獨特的選擇性，適合正相分離；當用于反相系統(tǒng)時，其選擇性與C8和C18不同。在藥學領域和復雜混合物的分離中應用廣泛。

APS

NH2(Aminopropy)-(CH2)3NH2

√

√

反相中分析糖類和其他極性化合物；弱陰離子交換分析，陰離子和有機酸則應用緩沖劑和有機改性劑做流動相；正相中與硅膠的選擇性不同。

Phenyl

-(CH2)3C6H5

√

√

苯環(huán)及芳香族化合物

Diol

-(CH2)3OCH2CHOHCH2OH√

√

反相時，分離肽和蛋白質。正相時，與硅膠選擇性相似，但極性較弱

SCX

強陽離子次換

-(CH2)2C6H4SO3H-

√

有機堿

SAX

強陰離子交換

-(CH2)3N+（(CH3)3

√

有機酸、核苷和核苷酸

9第9頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱常見問題解決第10頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱是液相色譜儀的心臟

現(xiàn)代高效液相色譜中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇.但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認識和了解。不要總是首先埋怨色譜柱!!!第11頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日

3.1.1譜峰分叉首先判斷柱頭是否柱頭塌陷?(按色譜柱評價報告的條件評價色譜柱)色譜柱使用過程中易出現(xiàn)的問題及解決辦法第12頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日修補前后現(xiàn)象

第13頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日原因:

a.柱頭塌陷

b.柱外死體積

c.柱頭填料污染

d.進樣閥密封問題

e.樣品分解

f.色譜柱填充不實

g.色譜柱受到強烈振動第14頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日

樣品分解第15頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日解決辦法：a.流動相含鹽時,沖洗系統(tǒng)要用20%的甲醇／水，不要用純水沖柱,修補色譜柱；b.檢查進樣閥→色譜柱→檢測器的管路連接有無死體積,更換密封環(huán)(刃環(huán))；c.嚴格過濾流動相和樣品,修補色譜柱；d.檢修進樣閥。

第16頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.2柱壓過高不要認為壓力高就是色譜柱的問題首先判斷是否是色譜系統(tǒng)管路阻塞?方法:(分段檢查泵→在線過濾器→進樣閥→色譜柱→檢測器→排液管)第17頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日原因:

a.在線過濾器阻塞

b.進樣閥定量管阻塞

c.管路阻塞

d.保護柱阻塞

e.壓力傳感器不準確

f.泵流量偏大

e.色譜柱的問題第18頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱問題

微粒堵塞流動相改變造成粘度變化柱床膨脹樣品在色譜柱上不可逆吸附細菌滋生聯(lián)系色譜柱生產(chǎn)廠家尋求幫助。

第19頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.3

重復性差實驗的重復性差色譜柱被污染流動相pH值及組成不合適造成鍵合相流失，如通常的硅膠基質色譜柱在堿性條件下使用樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定進樣技術問題第20頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日原因：色譜柱被污染官能團坍塌色譜柱內(nèi)的死體積流動相pH值及組成不合適造成固定相流失流速急劇變化造成固定相物理損壞機械震動造成固定相產(chǎn)生裂縫柱床收縮或干涸3.1.4柱效降低第21頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.5鬼峰或假峰進樣閥或注射器污染樣品溶劑與流動相不同樣品中有空氣流動相中雜質引起20%到100%甲醇梯度第22頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.6柱外效應小于3mm內(nèi)徑的色譜柱進樣閥和色譜柱、色譜柱和檢測器之間用短的細內(nèi)徑的連接管用無死體積接頭用較小體積的檢測池進樣體積減小第23頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.7色譜峰分裂柱外死體積柱頭填料污染部分阻塞進樣閥密封問題化合物一起洗脫第24頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.8色譜峰展寬所有的色譜峰展寬柱效降低進樣體積太大部分色譜峰展寬上次進樣洗脫的色譜峰蛋白或聚合物等高分子量化合物第25頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.9色譜峰拖尾部分色譜峰拖尾次級保留效應–殘留硅醇基的作用在大峰的尾部有小峰所有色譜峰拖尾柱外效應柱頭污染重金屬離子色譜柱填充不理想第26頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日3.1.10峰前伸色譜柱沒有充分平衡在主峰前有小色譜峰流動相的溶劑強度低于溶解樣品的溶劑第27頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日色譜柱篩板問題強保留的樣品組分色譜柱填充不良壓力影響化學影響通常的硅膠基質色譜柱，其pH使用范圍為2～83.1.12色譜柱壽命色譜柱作為消耗品具有一定的使用壽命，應在日常使用過程中注意以上事項，盡量延長色譜柱的壽命。第28頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日養(yǎng)成良好的色譜實驗習慣拿到一根新色譜柱時，請先檢測柱效；保存新色譜柱所得結果及實驗條件；定期檢測柱效。2.色譜柱的使用及保養(yǎng)第29頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日2.1

色譜柱的使用及操作流動相的轉換

特別是正、反相互換，及使用GPC柱溫度的變化

常規(guī)色譜柱溫度不超過60℃流速(壓力)的變化幅度

避免流速(壓力)突然變化特殊色譜柱∶樣品及溶劑的要求切記∶拿到一支新色譜柱時，

一定要先看其使用說明！第30頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日2.2色譜柱的保養(yǎng)流動相樣品其它方面第31頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日流動相：使用色譜純?nèi)軇⑴c填料相匹配超純水或二次蒸餾水若使用緩沖液作流動相緩沖液的pH值，在填料的允許范圍內(nèi)緩沖液(鹽)的濃度緩沖鹽過濾流動相對樣品的溶解度第32頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日樣品：除去樣品中的微粒及雜質SPE或過濾等方法了解樣品在流動相中的溶解度如樣品溶劑不是流動相，一定要用流動相試溶解度，防止其在流動相中析出了解樣品與色譜柱的基質/填料是否相互作用第33頁，共35頁，2023年，2月20日，星期日其它方面