本文格式為Word版，下載可任意編輯——生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)講義(DOC)

生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)

試驗(yàn)講義

中藥藥劑學(xué)教研室編寫

2023年12月

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目錄

試驗(yàn)一片劑溶出度試驗(yàn)······································································4試驗(yàn)二尿藥法測(cè)定水楊酸鈉片劑的生物利用度·······································7試驗(yàn)三撲熱息痛血管外給藥的藥物動(dòng)力學(xué)研究······································10試驗(yàn)四大鼠在體小腸吸收試驗(yàn)····························································13試驗(yàn)五氨茶堿藥物動(dòng)力學(xué)的研究·························································

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15生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)須知

生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)屬于藥物臨床應(yīng)用學(xué)科的范疇，具有綜合性強(qiáng)、應(yīng)用性強(qiáng)、創(chuàng)新性強(qiáng)等特點(diǎn)。生物藥劑學(xué)與藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)是教學(xué)的重要組成部分，是理論與實(shí)踐結(jié)合的主要方式之一。通過試驗(yàn)課不僅能印證、穩(wěn)定和擴(kuò)展教學(xué)內(nèi)容，還能訓(xùn)練基本操作技能，培養(yǎng)良好的試驗(yàn)作風(fēng)。

為保證明驗(yàn)課順利進(jìn)行，并達(dá)到預(yù)期的目的，試驗(yàn)中必需做到以下六個(gè)方面：

1．預(yù)習(xí)試驗(yàn)內(nèi)容通過預(yù)習(xí)，明確試驗(yàn)?zāi)康呐c要求，對(duì)試驗(yàn)內(nèi)容做到心中有數(shù)，并能合理安排試驗(yàn)順序與時(shí)間。要明確每個(gè)處方中藥物與輔料的用途。

2．遵守試驗(yàn)紀(jì)律不遲到，不早退，不曠課，保持試驗(yàn)嚴(yán)肅，未經(jīng)許可，不得將試驗(yàn)室物品帶離試驗(yàn)室。

3．重視藥劑衛(wèi)生進(jìn)入試驗(yàn)室必需穿整齊的白工作服。先將工作臺(tái)面擦洗清白再開始做試驗(yàn)。試驗(yàn)過程中應(yīng)始終注意臺(tái)面、地面的整齊，各種廢棄物應(yīng)投入指定位置，不能順手亂丟，更不能棄入水槽內(nèi)。完成試驗(yàn)后，應(yīng)將容器、儀器清潔，擺放整齊，臺(tái)面擦凈，經(jīng)教師同意后方能離開。值日生負(fù)責(zé)整理公用器材，清掃試驗(yàn)室，關(guān)好水、電、門、窗。

4.細(xì)心操作、勤于思考稱量藥品、試劑時(shí)，要在稱量前（拿取時(shí)）、稱量時(shí)和稱量后（放回時(shí)）進(jìn)行三次核對(duì)。稱量完畢應(yīng)馬上蓋好瓶塞，放回原處。對(duì)劇毒藥品更要細(xì)心核對(duì)名稱與劑量，并確鑿稱取。試驗(yàn)中要嚴(yán)格控制好試驗(yàn)條件，認(rèn)真操作每一道工序，以保證成品質(zhì)量。試驗(yàn)成品應(yīng)標(biāo)明名稱、規(guī)格、配制者、配制時(shí)間，并交教師驗(yàn)收。試驗(yàn)中遇到問題應(yīng)先獨(dú)立思考，再請(qǐng)教他人。在試驗(yàn)中逐步形成整齊、細(xì)致、嚴(yán)謹(jǐn)、冷靜、擅長(zhǎng)觀測(cè)、擅長(zhǎng)思考、勤于動(dòng)手的試驗(yàn)風(fēng)格。

5．正確使用儀器、注意安全使用儀器時(shí)要按使用方法正確操作，不熟悉操作方法時(shí)，應(yīng)在教師指導(dǎo)下使用。各種儀器、容器使用時(shí)要注意輕拿、輕放，用畢要清潔后放回規(guī)定位置。

6.寫好試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告是考察學(xué)生分析總厚試驗(yàn)資料能力和寫作能力的重要方面，亦是評(píng)定試驗(yàn)成績(jī)的重要依據(jù)。試驗(yàn)報(bào)告的格式如下所示：

寫出試驗(yàn)?zāi)康募霸?。寫出具體試驗(yàn)步驟和試驗(yàn)條件。

記錄各采樣時(shí)間點(diǎn)及采樣的狀態(tài)，按要求對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并將全班數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合，求其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

闡述試驗(yàn)原理、試驗(yàn)收獲與教訓(xùn)、建議等。回復(fù)試驗(yàn)思考題。

每一試驗(yàn)內(nèi)容逐一按以上順序書寫試驗(yàn)報(bào)告。

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試驗(yàn)一片劑溶出度試驗(yàn)

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.把握片劑溶出度測(cè)定方法及數(shù)據(jù)處理方法；2.了解溶出度測(cè)定的重要意義及其應(yīng)用。

二、試驗(yàn)提醒

片劑溶出度是指片劑主藥在體外協(xié)助適當(dāng)裝置于適合介質(zhì)中溶出的速度和程度。

測(cè)定溶出度的依據(jù)是Noyes-Whitney的擴(kuò)散理論，近年生物藥劑學(xué)的研究說明，難溶性藥物的片劑，崩解時(shí)限不能作為判斷難溶性藥物片劑吸收的指示，由于片劑崩解后的粉粒還不能直接被機(jī)體所吸收，溶解是吸收的主要過程，溶解度小于0.1～1mg／mL的藥物，其體內(nèi)吸收常受其溶出速度的影響。溶出速度除與藥物的晶型、粒經(jīng)大小有關(guān)外，還與制劑的生產(chǎn)工藝、輔料、儲(chǔ)存條件等有關(guān)。所以為了控制這些片劑的質(zhì)量，需測(cè)定血藥濃度或尿藥濃度，對(duì)于一些體外溶出度與體內(nèi)血藥濃度有相關(guān)性的藥物，則可測(cè)定其主藥成分的體外溶出度作為控制該片劑質(zhì)量的一項(xiàng)指標(biāo)。

本試驗(yàn)以對(duì)乙酰氨基酚片為樣品，測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的溶出度。原理：對(duì)乙酰氨基酚在溶出介質(zhì)中，在257nm波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收，因此可用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定其在257nm的吸收度（A），用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算其對(duì)應(yīng)濃度。

三、試驗(yàn)內(nèi)容

1.測(cè)出比較法的A值，用AW表示，作對(duì)照品。

取樣品10片，縝密稱定，計(jì)算平均片重W，將稱定的片子研細(xì)，再縝密稱取相當(dāng)于W的量，加約600mL溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL），水浴（40℃～50℃）中攪伴溶解，冷至室溫，移入1000mL容量瓶中，參與介質(zhì)至足量，搖勻，過濾，縝密吸取濾液1mL置50mL容量瓶中，參與0.04％氫氧化鈉溶液稀釋至50mL，搖勻，照分光光度法（中國藥典2023年版二部附錄IVA），在257nm的波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度A值，用A-W表示。2.對(duì)乙酰氨基酚片溶出度的測(cè)定

A．儀器準(zhǔn)備轉(zhuǎn)籃是用40目不銹鋼制成的圓筒，高3.66cm，直徑2.5cm，頂部通過金屬棒連接于變速小馬達(dá)上。轉(zhuǎn)籃懸吊于盛有溶媒的容器中，距溶出杯底2.5cm，使用前安裝就緒，開動(dòng)電機(jī)空轉(zhuǎn)，檢查電路是否暢通，有無異常噪音，轉(zhuǎn)籃的轉(zhuǎn)動(dòng)是否平穩(wěn)，加熱恒溫裝置及變速裝置是否正常，如一切符合要求，就可以開始測(cè)定樣品。

B.測(cè)定方法取溶出介質(zhì)（稀鹽酸24mL加水至1000mL）1000mL，加熱至37℃，置溶出杯中，調(diào)理轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100轉(zhuǎn)／分，將縝密稱定重量的藥片一片（W）放在轉(zhuǎn)籃內(nèi)，以溶出介質(zhì)接觸藥片時(shí)為零時(shí)刻開始計(jì)時(shí)，然后按2、5、10、15、20、30分鐘定時(shí)取樣，取樣位置固定在轉(zhuǎn)籃上端液面中間、距離杯壁1cm處，每次取樣5mL，將樣品液過濾，吸取濾液1mL，余按試驗(yàn)內(nèi)容1，測(cè)出比較法A值項(xiàng)下，自“置50mL容量瓶……〞始，依法測(cè)定規(guī)定時(shí)間藥片溶出的A值，以As表示。注：

（1）對(duì)所用的溶出度測(cè)定儀，應(yīng)預(yù)先檢查其是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常，并檢查溫度的控制，轉(zhuǎn)速等是否確切、升降轉(zhuǎn)籃是否靈活等。

（2）溶出方法分轉(zhuǎn)籃法、槳法和小杯法三種。本試驗(yàn)選用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)籃的尺寸和結(jié)構(gòu)應(yīng)符合藥典規(guī)定。

（3）每次取出樣品液后，應(yīng)同時(shí)補(bǔ)充一致體積的空白溶液。

（4）根據(jù)藥典規(guī)定，應(yīng)同時(shí)測(cè)定6片的溶出度，鑒于試驗(yàn)時(shí)間限制，每試驗(yàn)組僅要求完成1片的測(cè)試。

-

四、測(cè)定結(jié)果與數(shù)據(jù)處理

1.每片測(cè)定結(jié)果記錄

4

No.

取樣時(shí)間（min）

AsAw累計(jì)溶出5

12

25

310

415

520

630

Aw=

溶出度的計(jì)算

累計(jì)溶出%=?????

2.用普通坐標(biāo)紙作圖求t50

以累計(jì)溶出百分比對(duì)溶出時(shí)間逐一描點(diǎn),用圖估法擬合-平滑曲線,過累計(jì)溶出百分比50%處引一與t軸平行的直線,與溶出曲線相交于A,過A點(diǎn)向t軸引垂線交于t1，此t1即為t50，此值供方差分析用。

3.用威布爾分布概率求t50，td和m三個(gè)參數(shù)

從上面所作溶出曲線所見，累計(jì)溶出百分比對(duì)相應(yīng)時(shí)間各數(shù)據(jù)在一般直角坐標(biāo)紙上作圖，并不成直線關(guān)系，但可將累計(jì)溶出百分比與時(shí)間的關(guān)系看作統(tǒng)計(jì)學(xué)上的概率分布函數(shù)，用威布爾概率紙使之直線化，從圖上即可極為便利的找到t50（溶解50％所需時(shí)間），td（溶解63.2％所需時(shí)間）及m（斜率）三個(gè)參數(shù)，在威布爾概率紙作圖的基本步驟如下：

A.以F(t)尺代替累計(jì)溶出百分比,t尺為釋放時(shí)間,用原數(shù)據(jù)描點(diǎn),若各點(diǎn)基本上呈直線分布，則可直接擬合一條直線，特別注意照料F(t)在30％至70％范圍內(nèi)的點(diǎn)，使之優(yōu)先貼近該直線。

B.若各點(diǎn)排布呈曲線狀，則沿曲線趨勢(shì)延伸，與t尺交點(diǎn)的數(shù)值作為α的初步估計(jì)值，以F(t)對(duì)t-α再作圖，若所得各點(diǎn)的排列接近直線，則擬合成直線，若F(t)對(duì)t-α作圖仍為一曲線，則可用類似的方法反復(fù)修改，直至作得一直線為止。

C.在F(t)對(duì)t（或F(t)對(duì)t-α）所作圖上擬合一直線，有X＝1和Y軸的交點(diǎn)（稱m點(diǎn)）作該直線的平行線，該平行線和Y軸交點(diǎn)在Y尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為m值（取絕對(duì)值）。D.所擬合的直線與X軸的交點(diǎn)在t尺上投影點(diǎn)的讀數(shù)即為η＝β／m的估計(jì)數(shù)，本試驗(yàn)中稱為td值（溶出63.2％所需時(shí)間）；與溶出50％的交點(diǎn)在t尺上的投影點(diǎn)的讀數(shù)即為t50。E.用威布爾概率紙求出t50，td和m三個(gè)參數(shù)后，可利用方差分析，相關(guān)與回歸分析的數(shù)理統(tǒng)計(jì)法來評(píng)定同類產(chǎn)品不同批號(hào)或不同廠家的片劑質(zhì)量；另外，還可以評(píng)定同一產(chǎn)品體內(nèi)、體外的相關(guān)程度。4.用溶出參數(shù)作方差分析

將兩個(gè)批號(hào)共八片，按本試驗(yàn)方法測(cè)得的累計(jì)溶出百分比共八組數(shù)據(jù)，經(jīng)威布爾概率紙作圖得八

參數(shù)t50

方差來源

組間組內(nèi)合計(jì)組間組內(nèi)合計(jì)組間組內(nèi)合計(jì)

自由度

離差平方和

方差

F值

顯著性

td

m

條直線，由圖中求出t50，td和m值，將所得參數(shù)列表如下，供方差分析用。

5

思考題：

檢查固體制劑的溶出度有何意義？哪些種類的制劑需檢查溶出度？

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試驗(yàn)二尿藥法測(cè)定水楊酸鈉片劑的生物利用度

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過試驗(yàn)把握用尿藥速率法求算體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；2.通過試驗(yàn)把握藥物的生物利用度的一般研究方法；3.通過測(cè)定求出水楊酸鈉的生物半衰期。

二、試驗(yàn)原理

藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄等過程既有區(qū)別，又有聯(lián)系，具有一定相關(guān)性。藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律及生物利用度等相關(guān)參數(shù)的提取，要通過試驗(yàn)采用血藥濃度法、尿藥濃度法或唾液藥物濃度法等方法獲得。

在多數(shù)狀況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析縝密度好，測(cè)定方法較易建立，且取樣便利，可免除受試者屢屢抽血的痛楚。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原型從尿中排出的條件下，尋?？捎媚蛩幏ㄌ崛∠俣瘸?shù)、生物半衰期等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。

生物利用度反應(yīng)藥物在體內(nèi)被吸收的速度和程度，它可分為相對(duì)生物利用度與絕對(duì)生物利用度。當(dāng)藥物的口服制劑與靜脈注射劑相比較，可求算絕對(duì)生物利用度；與其他制劑相比較，可求算相對(duì)生物利用度。本試驗(yàn)采用口服真溶液劑為參比，測(cè)定水楊酸鈉片劑的相對(duì)生物利用度。

三、試驗(yàn)方法

1.繪制水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

縝密稱取枯燥恒重的水楊酸鈉0.5g，置100mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，各縝密吸取此溶液1.5、2.5、3.5、4.5、5.5mL分別置50mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為0.15、0.25、0.35、0.45、0.55mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

取枯燥清白的帶塞玻璃試管5支，分別縝密吸取以上各溶液的水楊酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL于試管中，再分別參與Fe(NO3)3試管5mL，混合均勻，用72-100型分光光度計(jì)于540nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度，將測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得吸收度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的回歸方程，即為標(biāo)準(zhǔn)直線。參比液以蒸餾水1mL代替標(biāo)準(zhǔn)液。2.測(cè)定生物利用度

A.試驗(yàn)方法

I.II.

選擇受試者的條件對(duì)受試者的要求

a)服藥前48小時(shí)開始,不吃任何含水楊酸鹽類食物。

b)小便應(yīng)按規(guī)定收集完全，不得損失，并保持尿樣不污染。在收集尿樣期間

內(nèi)不作猛烈運(yùn)動(dòng)。

c)早晨收集空白尿，空腹時(shí)口服水楊酸鈉片0.6g，對(duì)照組口服相當(dāng)于0.6g的

水楊酸鈉真溶液。

d)按以下時(shí)間喝水和收集尿樣，并記錄排尿量：服藥當(dāng)天：

7：30喝水150mL

7：55小便（收空白尿）

8：00用250mL溫開水吞服0.3g／片的水楊酸鈉片兩片8：30收集尿樣9：00收集尿樣

10：00收集尿樣喝水200mL12：00收集尿樣喝水150mL14：00收集尿樣喝水100mL16：00收集尿樣喝水100mL

7

18：00收集尿樣

20：00收集尿樣喝水100mL22：00收集尿樣

其次天

8：00收集尿樣22：00收集尿樣

每次收集尿樣的時(shí)間必需小便一次，在上一次收集尿樣后所排出的小便，均要收集完全，作為下一個(gè)時(shí)間尿樣，每次收尿容器必需洗凈，用蒸餾水清洗，瀝干備用。

III．受試者服用樣品的安排

本試驗(yàn)僅作兩種劑型，同一受試者二次服藥之間應(yīng)間隔4天以上。IV．測(cè)定方法每次尿樣測(cè)量體積后，縝密吸取1mL于枯燥清白的試管中，加Fe(NO3)3試管5mL，按“繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線〞項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，參比液用空白尿1mL替代含藥尿樣，如顯色時(shí)發(fā)現(xiàn)色澤太深，則根據(jù)狀況將尿樣稀釋后取樣測(cè)定（假使氣候炎熱，須將空白尿及尿樣置冰箱中保存，以防長(zhǎng)霉發(fā)酵，影響結(jié)果的確鑿性。）

B.數(shù)據(jù)處理I.將所測(cè)各時(shí)間尿樣的吸收度代入標(biāo)準(zhǔn)直線，計(jì)算出該尿樣濃度（mg/mL）再乘以尿量（如

尿樣稀釋則需乘上稀釋倍數(shù)），計(jì)算出各時(shí)間的尿藥排泄量。

II.以lg△x/△t對(duì)相鄰兩時(shí)間的中點(diǎn)時(shí)間（t中）作尿藥排泄速度曲線?！鱴:各時(shí)間的尿藥排泄量.

△t:相鄰兩次集尿時(shí)間的間隔時(shí)間.作圖:

III.根據(jù)作出的尿藥排泄曲線求出水楊酸鈉片劑和真溶液的動(dòng)力學(xué)參數(shù).斜率(b)=(Y2-Y1)/(X2-X1)

或?qū)⑶€后部直線部分進(jìn)行回歸分析,求出直線斜率b消除速度常數(shù):k=-2.303×b

劑型片劑真溶液消除速度常數(shù)k半衰期(小時(shí))總排泄量(mg)生物半衰期:t1/2=0.693/k

IV.生物利用度：以真溶液為參比，求片劑的相對(duì)生物利用度生物利用度（％）＝？？？？？？V.尿藥法數(shù)據(jù)記錄

姓名：性別：產(chǎn)品廠家及批號(hào)：藥量：服藥時(shí)間：

8

序號(hào)123456789101112集尿時(shí)間（小時(shí)）00.5124681012142438口服水楊酸鈉真溶液尿量（mL）稀釋倍數(shù)吸收度平均濃度排泄量尿量（mg/mL）（mg）（mL）累計(jì)稀釋倍數(shù)口服水楊酸鈉片吸收度平均濃度（mg/mL）累計(jì)排泄量（mg）

序號(hào)1234567891011集尿時(shí)間（h）00.5124681012142438中點(diǎn)時(shí)間隔時(shí)間（t中）間（△t）0.250.751.53579111319310.50.512222221014真溶液平均尿藥速度（△X／△t）片劑平均尿藥速度（△X／△t）排泄量(△X)Lg(△X/△t)排泄量(△X)Lg(△X/△t)思考題：

血藥濃度法與尿藥法測(cè)定藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)各有何特點(diǎn)？

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試驗(yàn)三撲熱息痛血管外給藥的藥物動(dòng)力學(xué)研究

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.通過本試驗(yàn)，把握生物樣品分析方法的基本要求。2.把握撲熱息痛的血藥濃度測(cè)定方法及有關(guān)參數(shù)的計(jì)算。

二、試驗(yàn)原理

撲熱息痛與亞硝酸發(fā)生親電取代反應(yīng)，生成2-亞硝基－4－乙酰氨基苯酚，用氨基磺酸銨除去過量的亞硝酸，在堿性條件下，2-亞硝基－4－乙酰氨基苯酚于430nm波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收。

三、試驗(yàn)內(nèi)容

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線

縝密稱取撲熱息痛100mg，以95％乙醇3mL溶解加適量水，轉(zhuǎn)移于100mL容量瓶中，加水至刻度，充分搖勻，得撲熱息痛儲(chǔ)存液（1mg/mL）,縝密吸取儲(chǔ)存液2.5mL確鑿稀釋至10mL，得250μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

分別縝密吸取250μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mL于離心管中，分別加水使成2mL，各加家兔血漿1.5mL，搖勻，再參與2mL10％三氯醋酸，充分混合再離心20分鐘（3000rpm）。吸取上清液4mL于25mL帶塞刻度試管中，參與1mL6N鹽酸，1mL20％NaNO2溶液，搖勻，放置5分鐘，使反應(yīng)完全。漸漸參與2mL15％氨基磺酸，振搖至無氣泡產(chǎn)生，流水冷卻，參與2.5mL20％NaOH搖勻，用2cm比色杯于430nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度。用蒸餾水2mL代替標(biāo)準(zhǔn)液同法處理，作空白對(duì)照。

標(biāo)準(zhǔn)液（mL）濃度（μg/mL）A（3次）A0.3500.61000.91501.22001.52501.8300求出回歸方程

標(biāo)準(zhǔn)曲線（回歸方程）2.回收率試驗(yàn)

分別縝密吸取250μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各三份，分別加水使成2mL，各加家兔血漿1.5mL，搖勻，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下“參與2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法操作，測(cè)定吸光度，代入回歸方程求其濃度，并與參與時(shí)濃度相比求出回收率。

初始濃度（μg/mL）21.43吸光度測(cè)得濃度（μg/mL）回收率(%)回收率均值RSD(%)

64.29

128.58

3.縝密度試驗(yàn)

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縝密吸取250μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液0.3、0.9、1.8mL于離心管中各6份，分別加水使成2mL，各加家兔血漿1.5mL，搖勻，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下“參與2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法操作，測(cè)定吸光度，求其日內(nèi)縝密度。

初始濃度（μg/mL）吸光度吸光度均值RSD(%)21.4364.29128.58

4.樣品穩(wěn)定性考察

將上述標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的“0.9mL〞樣品處理好后于0.5h、1h、2h、3h、4h測(cè)定吸收度，考察處理后樣品室溫放置時(shí)的穩(wěn)定性。

時(shí)間（h）吸光度均值RSD(%)00.51234

5.樣品測(cè)定

取家兔5只（雌兔不得懷孕），每只體重2.5kg～3kg，給藥前先從耳靜脈取血3mL留作對(duì)照。然后按200mg/kg的劑量，肌注給藥（給藥前禁食12小時(shí)）。給藥后按第3、5、10、15、25、30、40、60、100、140、180分鐘，定時(shí)從兔耳靜脈取血3mL，用枯燥并帶有適量肝素鈉的離心管集血，輕輕搖勻，離心10分鐘（3000rpm），吸取血漿于枯燥試管中，置冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ〕鰺o藥血漿與各時(shí)刻的含藥血漿，室溫解凍后進(jìn)行測(cè)定：

吸取1.5mL血漿，置刻度離心管中，加水2mL，混勻，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下“參與2mL10％三氯醋酸，充分混合“起，依法測(cè)定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出該時(shí)刻的血藥濃度，以無藥血漿按同法處理作對(duì)照。

6.結(jié)果記錄

兔子體重：給藥劑量：測(cè)定記錄：

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編號(hào)T(min)AAC(μg/mL)lgCT(min)132531041552563074086091001014011180C(μg/mL)尾段直線相外推線濃度的對(duì)數(shù)（lgC外推）外推線濃度（C外推）殘數(shù)濃度（μg/mL）C殘＝C外推-C殘數(shù)濃度的對(duì)數(shù)lgC殘

尾段直線相斜率＝K＝殘數(shù)斜率＝ka＝

四、數(shù)據(jù)處理

1.以血藥濃度（μg/mL）為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作吸收曲線圖（血藥濃度－時(shí)間曲線）。2.以血藥濃度（μg/mL）的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作血藥濃度－時(shí)間的半對(duì)數(shù)圖，從圖中求出消除速度常數(shù)K，再用殘數(shù)法求出吸收速度常數(shù)ka。

3.提取參數(shù)（t1/2吸收、t1/2消除、tp、Cp）A.吸收半衰期:

t1/2吸收=0.693/kaB.消除半衰期:

t1/2消除=0.693/KC.血藥濃度-時(shí)間曲線下的總面積(AUC0-∞)D.達(dá)峰時(shí)間(tp)

⑴根據(jù)ka及K求出達(dá)峰時(shí)間tp

tp=(lnka-lnK)/(ka-K)=2.303×(lgka-lgK)/(ka-K)

⑵拋物線擬合法

用拋物線C=p+Qt_+Rt2的峰段代替藥時(shí)曲線的峰段，選取試驗(yàn)數(shù)據(jù)中最大濃度C（I）左右三點(diǎn)，[ti-1,C(I-1)],[ti,Ci],[ti+1,C(I+1)]代入，則有：

C(I-1)=P+Q·ti-1=R·t2i-1Ci=P+Q·ti=R·t2iC(I+1)=P+Q·ti+1=R·t2i+1

解上述方程組，求得P、Q、R的值

拋物線的峰丟按橫坐標(biāo)（峰時(shí)）為tp=-Q/2RE.峰濃度CpCp=A(e-Ktp-e-Katp)

A-截距(可以從lgC~t圖中求得)試驗(yàn)結(jié)果:

思考題：

血藥濃度法求算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的原理？血藥濃度法測(cè)定藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的要求？

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試驗(yàn)四大鼠在體小腸吸收試驗(yàn)

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.把握大鼠在體小腸吸收的試驗(yàn)方法。

2.把握計(jì)算藥物的吸收速度常數(shù)（Ka），以及每小時(shí)吸收率的計(jì)算方法。

二、試驗(yàn)原理

大多數(shù)藥物以被動(dòng)擴(kuò)散方式從生物膜的高濃度側(cè)通過膜向低濃度側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)。被動(dòng)擴(kuò)散可用Fick第一定律來描述。該定律指出，擴(kuò)散速度（dC/dt）正比于膜兩側(cè)的濃度差（△C）,因此有：

?式中C是消化道中的藥物濃度，Cb是血液中藥物濃度，Ka是吸收速度常數(shù)，其值大小取決于藥物的擴(kuò)散常數(shù)、吸收膜的厚度與面積以及藥物對(duì)膜的穿透性。胃腸道吸收的生物學(xué)過程包括這樣一個(gè)系統(tǒng)，即藥物從胃腸道屏障的一側(cè)向另一側(cè)擴(kuò)散。由于進(jìn)入血液的藥物很快分布到全身，故與吸收部位比較，血中藥物濃度維持在很低的水平。幾乎在所有口服給藥的狀況下，對(duì)于胃腸道來說，血液的作用猶如“水槽〞。并且在整個(gè)吸收相保持很大的濃度梯度，C>>Cb，則△C≈C，于是（1）式可以簡(jiǎn)化為：

dc?Ka?C?Ka(C?Cb)（1）dt?dc?KaC（2）dtXa?KaX(3)dt此為一級(jí)速度方程式的標(biāo)準(zhǔn)形式。胃腸道按一級(jí)動(dòng)力學(xué)從消化液中吸收大多數(shù)藥物。用消化液中藥物量的變化）dXa/dt)表示吸收速度，則：

?將（3）式積分，并在方程兩側(cè)同取對(duì)數(shù)。

lnXa?lnXa(0)?Kat（4）

式中Xa為消化液中藥物量，Xa(0)為零時(shí)刻消化液中藥物量，Ka為藥物吸收速度常數(shù)。以lnXa對(duì)t作圖得一條直線，其斜率為藥物在小腸中的吸收速度常數(shù)（Ka）。

三、試驗(yàn)內(nèi)容

1.試驗(yàn)操作

（1）取85ml供試液（100mlKrobs-Ringer試液含SD2mg,酚紅2mg）參與循環(huán)裝置中。

（2）將試驗(yàn)前禁食一夜，體重200g左右的雄性大鼠，稱重，腹腔注射戊巴比妥鈉（劑量為100g

體重注射0.4ml），麻醉后并加以固定。

（3）沿腹中線開啟腹腔。自十二指腸上部及回腸下部各剪開一個(gè)小口，各插入直徑為0.5cm的玻

璃管，用線扎緊，并用37℃的生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗清白，然后將大鼠串聯(lián)到循環(huán)裝置中。

（4）開動(dòng)蠕動(dòng)泵，以5ml/分的流速循環(huán)10分鐘后流速調(diào)至2.5ml/分。（5）自燒瓶中取樣1.5ml（1ml、0.5ml各一份）為和酚紅零時(shí)間樣品，并補(bǔ)加2ml酚紅溶液（每

毫升Krobs-Ringer試液含酚紅20μg），其后每15分鐘取樣（1ml、0.5ml各一份），同時(shí)補(bǔ)加酚紅溶液2ml。由于酚紅不被小腸吸收，用以測(cè)定水被小腸吸收的量。2.定量方法

（1）磺胺嘧啶的定量

取樣品1ml，參與1mol/L5ml,參與0.1%NaNO21ml,搖勻，放置3分鐘，參與0.5％氨基磺酸氨1ml，搖勻，放置3分鐘。參與0.1％萘乙二胺2ml，搖勻，放置20分鐘。在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定吸收度。

參比溶液的配制：取1ml供試液按磺胺嘧啶的定量方法不加萘乙二胺顯色劑。

13

（2）酚紅定量

取酚紅溶液0.5ml，參與0.2mol/LNaOH5ml，搖勻，在波長(zhǎng)555nm處測(cè)定吸收度。參比溶液：0.2mol/LNaOH溶液。3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備（1）酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線

縝密稱取酚紅100mg，置1000ml容量瓶?jī)?nèi)，加1％Na2CO3溶液溶解并稀釋至刻度，制成100μg/ml的儲(chǔ)存液。取1，2，3，4，5，6ml的儲(chǔ)存液于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚紅的定量方法測(cè)定吸收度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)曲線

縝密稱取磺胺嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品10mg置100ml容量瓶中，以蒸餾水溶解并稀釋至刻度，使成100μg/ml的儲(chǔ)存液。取儲(chǔ)存液適量，稀釋成20230μg/ml的溶液，分別吸取2，4，6，8，10ml于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。從上述溶液中吸取1ml按磺胺嘧啶定量方法測(cè)定吸收度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

四、數(shù)據(jù)處理

1．將試驗(yàn)數(shù)據(jù)按表1中公式進(jìn)行計(jì)算。

表1大鼠在體小腸吸收量的計(jì)算式

取樣時(shí)間（h）循環(huán)前0

SD吸收度A0A1

SD濃度C0C1

酚紅吸收度A’0A’1

酚紅濃度C’0C’1

供試液體積V0=85ml

剩余藥量P0=85?C0

0.25A2C2

A’2C’2

C0'V0V1?C1'P1?CV11

Pn?CnVn?1.5?Cii?1n?10.5A3C3

A’3C’3

(V1?1.5)C1'?40V2?'C2(V2?1.5)C2'?40V3?C3'….

P3?C3V3?1.5(C1?C2)

…

…tn

…An

…..Cn

….A’n

…C’n

n?1(Vn?1?1.5)Cn?1'?40PVn?n?CnVn?1.5?Ci'Cni?12.以剩余藥量的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖，求出吸收速度常數(shù)Ka和每小時(shí)吸收率（％）。

每小時(shí)吸收率（％）＝（零時(shí)間剩余藥量－60分鐘剩余藥量）/零時(shí)間剩余藥量?100％

思考題：

用小腸剩余藥量測(cè)定吸收速率常數(shù)的原理？

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試驗(yàn)五氨茶堿藥物動(dòng)力學(xué)的研究

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.把