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文檔簡介
本文格式為Word版,下載可任意編輯——分子生物學總結(jié)
反義RNA:(antisenseRNA)
參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控:
細菌響應環(huán)境壓力(氧化壓力、滲透壓、溫度等)的改變,產(chǎn)生的一些非編碼的小RNA分子,能與mRNA中的特定序列配對并改變所配對mRNA分子的構(gòu)象,導致翻譯過程被開啟或者關(guān)閉,也可能導致目標mRNA分子的快速降解。(例如:細菌鐵蛋白用來儲存細胞中過剩的鐵離子,bfr基因編碼鐵蛋白,anti-bfr基因編碼反義RNA。無論培養(yǎng)基鐵離子的高低,bfr基因都正常轉(zhuǎn)錄,而anti-bfr基因的轉(zhuǎn)錄受到能感受鐵離子濃度變化的Fur蛋白的調(diào)控。鐵離子過多時,F(xiàn)ur蛋白關(guān)閉anti-bfr基因,bfr基因正常翻譯;而鐵離子過低時,anti-bfr基因轉(zhuǎn)錄生成大量反義RNA,與bfr的mRNA配對,阻止細菌鐵蛋白基因的翻譯。)
參與DNA復制調(diào)控:
在EolE1質(zhì)粒DNA的復制完全依靠宿主DNA聚合酶Ⅰ,質(zhì)粒DNA編碼兩個負調(diào)控因子Rop蛋白和反義RNA(RNA1),他們控制了起始DNA復制所必需的引物合成。RNA1的編碼區(qū)在引物RNA編碼區(qū)的5’端,轉(zhuǎn)錄方向與引物RNA相反,因此與引物RNA的5’端互補。RNA1通過氫鍵配對與引物RNA前體相互作用,阻止了RNaseH加工引物前體,使其不能轉(zhuǎn)換為有活性的引物而對復制起負調(diào)控作用。RNA1不僅控制質(zhì)粒的拷貝數(shù),而且決定了質(zhì)粒的不相容性。RNA1與引物RNA分子的相互作用是可逆的,因此細胞內(nèi)RNA1的濃度決定了EolE1質(zhì)粒復制的起始頻率。而另一個負調(diào)控因子Rop蛋白能提高RNA1與引物前體的相互作用,從而加強了RNA1的負調(diào)控作用。
干擾(RNAi)
利用雙鏈小RNA高效、特異性降解細胞內(nèi)同源mRNA從而阻斷靶基因表達,使細胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型。
rRNA
tRNA
●存在經(jīng)過特別修飾的堿基,tRNA3’端都以CCA-OH終止,該位點是tRNA與相應氨基酸結(jié)合的位點?!袢~草二級結(jié)構(gòu):D臂、反密碼臂、多余臂、TΨC臂、受體臂(3’端);最大的變化發(fā)生在多余臂上。
●稀有堿基含量豐富,特別是反密碼子3’端鄰近部位,對于維持反密碼子環(huán)的穩(wěn)定性及反密碼子、密碼子之間的配對很重要。
●所有的tRNA都能夠和核糖體的A位點(新進入的氨酰-tRNA的結(jié)合位點)和P位點(肽酰-tRNA的結(jié)合位點)結(jié)合,此時,tRNA分子三葉草型頂端突起部位通過密碼子:反密碼子的配對與mRNA相結(jié)合,而3’端恰好將所運轉(zhuǎn)的氨基酸送到正在延伸的多肽上。
●起始tRNA能被原核生物的起始因子IF-2或真核生物起始因子eIF-2所識別;其他所有的tRNA都能被翻譯輔助因子EF-TU(原核)或eEF1(真核)所識別而與核糖體相結(jié)合。
●L型三級結(jié)構(gòu):靠氫鍵維持。tRNA所運載的氨基酸必需靠近位于核糖體大亞基上的多肽合成位點,而tRNA上反密碼子必需與小亞基上的mRNA相配對,所以分子中兩個不同的功能基團是最大限度的分開的?!駎RNA上的性質(zhì)是由反密碼子而不是它所攜帶的氨基酸所決定的。
●分類:
起始tRNA:一類能特異地識別mRNA模板上起始密碼子的tRNA。原核生物起始tRNA攜帶甲酰甲硫氨酸(fMet),真核生物起始tRNA攜帶甲
硫氨酸(Met)
同工tRNA(cognatetRNA):幾個代表一致氨基酸、能夠被一個特別的氨酰-tRNA合成酶識別的tRNA。
校正tRNA:可分為無義突變(nonsensemutation)校正、錯義突變(missensemutation)校正。校正tRNA在進行校正的過程中必需與正常
的tRNA競爭結(jié)合密碼子,無義突變的校正tRNA必需與釋放因子競爭識別密碼子,錯義突變的校正必需與該密碼正常的tRNA競爭。無義突變的校正基因tRNA不僅能校正無義突變,也會抑制該基因3’端正常的終止子,導致翻譯過程的通讀,合成更長的蛋白質(zhì)。同樣,一個基因的錯義突變的校正也能使另一個基因翻譯錯誤,在正常位點引入新的氨基酸。
mRNA
RNA的剪接:(RNAsplicing)從mRNA前體分子中切除被稱為內(nèi)含子(intron)的非編碼區(qū),并使基因中被稱為外顯子(exon)的編碼區(qū)拼接成成成熟mRNA的過程。
RNA編輯:(RNAediting
是某些RNA,特別是mRNA前體的一種加工方式,如插入、刪除或取代一些核苷酸殘基,導致DNA所編碼的遺傳信息的改變,由于經(jīng)過編輯的mRNA序列發(fā)生了不同于模板DNA的變化。介導RNA編輯的機制有:位點特異性的脫氨基作用、引導RNA指導的尿嘧啶插入或刪除。(例:哺乳動物載脂蛋白2153位密碼子從CAA突變?yōu)閁AA,使編碼谷氨酰胺的密碼子變成了終止密碼子,導致在肝、腸中的不同表達。)
生物學意義:
1、校正作用:有些基因在突變過程中丟失的遺傳信息可能通過RNA的編輯得以恢復。
2、調(diào)控翻譯:通過編輯可以構(gòu)建或去除起始密碼子和終止密碼子,是基因表達調(diào)控的一種方式。3、擴展遺傳信息:能使基因產(chǎn)物獲得新的結(jié)構(gòu)和功能,有利于生物的進化。
指導RNA:(guideRNA)
原生動物及植物線粒體中進行RNA編輯所需的RNA序列,是與已正確編輯的RNA序列互補的一小段RNA,被用來作為向未經(jīng)編輯的RNA中插入堿基的模板。
RNA的再編碼:(RNArecoding)
mRNA在某些狀況下不是以固定的方式被翻譯,而可以改變原來的編碼信息,以不同的方式進行翻譯。其中RNA編碼和讀碼方式的改變,即為RNArecoding。例如核糖體程序性+1/-1移位、核糖體騰躍、終止子的通讀等。RNA的再編碼可以從一個mRNA產(chǎn)生兩種或多種相互關(guān)聯(lián)但又不同的蛋白質(zhì),這也可能是蛋白質(zhì)合成的一種調(diào)理機制。
RNA的化學修飾:
★包括甲基化、去氨基化、硫代、堿基的同分異構(gòu)化、二價鍵的飽和化、核苷酸的替代。
★RNA的化學修飾具有位點特異性。只含有70~100個核苷酸的核仁(snoRNAs)參與RNA的化學修飾,由于這些RNA能通過堿基配對的方式,把rRNA分子上需要修飾的位點找出來。一般認為,snoRNA上的D盒(5’-CUGA-3’)是甲基化酶的識別位點。
核酶(ribozyme):
★是指一類具有催化功能的RNA分子,通過催化靶位點RNA鏈中磷酸二脂鍵的斷裂,特異性地剪切底物RNA分子,從而阻斷基因的表達。
★具有自我剪接能力的RNA大多數(shù)都能形成錘頭結(jié)構(gòu)(hammerheadstructure)。錘頭結(jié)構(gòu)催化切割反應的活性較高,而發(fā)夾型核酶催化連接的活性較高。)
★分為:1、剪切型核酶(只剪不接,能夠催化自身的RNA或不同的RNA分
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