主要內(nèi)容腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑—烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用現(xiàn)在是1頁\一共有69頁\編輯于星期一腫瘤微環(huán)境腫瘤微環(huán)境就是指在腫瘤在生長、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中，由腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞外間質(zhì)相互作用后形成的腫瘤細(xì)胞生長的特殊環(huán)境。腫瘤微環(huán)境中的各種成份相互作用，通過多種途徑刺激腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。2現(xiàn)在是2頁\一共有69頁\編輯于星期一腫瘤血管生成是腫瘤微環(huán)境中的重要環(huán)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞周細(xì)胞成纖維細(xì)胞基底膜細(xì)胞外間質(zhì)免疫細(xì)胞腫瘤微環(huán)境中的各個(gè)成份通過多種途徑調(diào)節(jié)腫瘤血管的生長和形態(tài)腫瘤微脈管系統(tǒng)是決定其內(nèi)部微環(huán)境的主要因素血管內(nèi)血管生成調(diào)節(jié)因子...................................................................................................................................................VEGF3現(xiàn)在是3頁\一共有69頁\編輯于星期一腫瘤微環(huán)境與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移4現(xiàn)在是4頁\一共有69頁\編輯于星期一降解基板和細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟纖溶酶原(組織液中高濃度存在)纖溶酶原激活劑纖溶酶降解細(xì)胞外基質(zhì)和基板基質(zhì)金屬蛋白酶前體基質(zhì)金屬蛋白酶降解基板和細(xì)胞外基質(zhì)所涉及的蛋白酶5現(xiàn)在是5頁\一共有69頁\編輯于星期一T細(xì)胞:TIL/CTLNK單核巨噬細(xì)胞腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境腫瘤微環(huán)境—腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵內(nèi)皮細(xì)胞降解周圍基質(zhì)血管生成因子血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞血管壁和細(xì)胞外基質(zhì)現(xiàn)在是6頁\一共有69頁\編輯于星期一金屬蛋白酶——氨肽酶N，CD13

氨肽酶N(APN，CD13)屬于結(jié)合Zn的金屬蛋白酶超家族，廣泛分布于造血細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、腦細(xì)胞和腸、腎、肝細(xì)胞等，參與蛋白水解，參與細(xì)胞和器官的正常蛋白代謝。在多種腫瘤細(xì)胞表面高水平表達(dá)，如白血病、前列腺癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌等，被稱作腫瘤細(xì)胞標(biāo)記物?，F(xiàn)在是7頁\一共有69頁\編輯于星期一子宮內(nèi)膜腺癌、卵巢癌組織中APN/CD13的表達(dá)

子宮內(nèi)膜腺癌粘液性囊腺癌漿液性囊腺癌陰性對照APN/CD13在腫瘤細(xì)胞表達(dá)較強(qiáng)，間葉組織較弱

Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250現(xiàn)在是8頁\一共有69頁\編輯于星期一氨肽酶N—CD13作用一、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移CD13通對基底膜成分(基膜和Ⅳ型膠原蛋白)的水解作用,進(jìn)行組織消化穿透;一種輔助的粘附分子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞附著，參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)、炎癥驅(qū)化；促進(jìn)腫瘤新生血管的形成：

在血管形成刺激因素如缺氧、VEGF作用下,新生血管內(nèi)皮CD13mRNA及表達(dá)上調(diào),而成熟血管內(nèi)皮無CD13表達(dá)?，F(xiàn)在是9頁\一共有69頁\編輯于星期一氨肽酶N—CD13作用CD13連續(xù)降解：多的肽調(diào)節(jié)因子，其中包括免疫活性物質(zhì)，從而降低了機(jī)體免疫；抑制免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞表面抗原的識別和直接殺傷細(xì)胞的能力。二、

免疫負(fù)調(diào)節(jié)現(xiàn)在是10頁\一共有69頁\編輯于星期一胰腺癌患者體內(nèi)CD13的表達(dá)量與腫瘤血管密度的關(guān)系IMD：intratumormicrovesseldensity(腫瘤內(nèi)微血管密度)結(jié)論：CD13的表達(dá)與腫瘤血管生成成正相關(guān)IkedaN,etal.ClinCancerRes,2003,9∶1503現(xiàn)在是11頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13表達(dá)陰性(-)胰腺患者生存期

明顯延長IkedaN,etal.ClinCancerRes,2003,9∶1503現(xiàn)在是12頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13表達(dá)低的NSCLC患者總生存率顯著延長A：90例NSCLC患者生存期CD13表達(dá)量關(guān)系B：40例Ⅳ期NSCLC患者生存期與CD13表達(dá)量關(guān)系HaruyasuMurakami，ClinCancerRes

,2005，11：

8674現(xiàn)在是13頁\一共有69頁\編輯于星期一主要內(nèi)容腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用現(xiàn)在是14頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13在白血病中表達(dá)CD13最初作為髓細(xì)胞表面標(biāo)志被發(fā)現(xiàn)，表達(dá)于GM-CFU和髓細(xì)胞分化發(fā)育的各階段、成熟的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(DC)以及急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞（AML）、慢性髓細(xì)胞白血病（CML）急變危象期細(xì)胞以及少數(shù)淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，多年來作為白細(xì)胞抗原被用于白血病免疫分型，提示對髓細(xì)胞的分化發(fā)育有重要作用。PuttiMC,etal.Blood,1998,92(3):795-80115現(xiàn)在是15頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13在AML患者中的表達(dá)NadaKraguljac,AmJClinPathol2000;114:29-3480%以上的患者高表達(dá)CD1316現(xiàn)在是16頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13在B-ALL白血病的表達(dá)方法：90例B-cellALL，免疫表型分析符合早期B淋巴細(xì)胞白血病。分離出具有高度增殖性B細(xì)胞亞群，免疫標(biāo)志與正常人B細(xì)胞相似（表達(dá)CD10、CD19、CD22、CD24、Tdt，共表達(dá)CD13)。用CD13抗體作用細(xì)胞后，觀察細(xì)胞的生長。CancerImmunolImmunother2010Jan.59(1)125-3517現(xiàn)在是17頁\一共有69頁\編輯于星期一結(jié)果與結(jié)論結(jié)果：阻斷白血病細(xì)胞表面CD13，能抑制其增殖結(jié)論：①CD13促進(jìn)該階段的惡性轉(zhuǎn)化

②CD13也許是該階段急性B淋巴細(xì)胞白血病新

的分子治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)CancerImmunolImmunother2010Jan.59(1)125-3518現(xiàn)在是18頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13通過降解IL-8，抑制白血病細(xì)胞凋亡血管內(nèi)皮細(xì)胞互相接觸釋放（凋亡因子）高表達(dá)CD13抵抗誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡作用被

IL-8是CD13/APN

的底物，很可能CD13／APN通過降解IL-8，抑制血細(xì)胞凋亡，起到促進(jìn)血細(xì)胞增殖發(fā)育的作用。MishimaY.etal.JNatlCancerInst,2002,94:1020—102819現(xiàn)在是19頁\一共有69頁\編輯于星期一主要內(nèi)容腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用現(xiàn)在是20頁\一共有69頁\編輯于星期一CD13抑制劑—烏苯美司

1976年,日本的梅澤濱夫等人從網(wǎng)狀橄欖鏈霉菌培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了一種具有抗菌作用和免疫增強(qiáng)作用的小分子二肽化合物,為氨基肽酶N的特異性抑制劑，具有直接和以宿主為中介的抗腫瘤活性作用。

萬樂烏苯美司片（專利創(chuàng)新劑型）于2009年上市。現(xiàn)在是21頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司—CD13抑制劑

提高機(jī)體免疫力抑制CD13123123現(xiàn)在是22頁\一共有69頁\編輯于星期一現(xiàn)在是23頁\一共有69頁\編輯于星期一不同蛋白酶抑制劑對ATRA誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化的作用(*P<0.05)只有Ube在1ng/ml濃度下可增強(qiáng)ATRA對NB4細(xì)胞的分化作用不加10-7MATRA加10-7M

ATRAAmastatinA:抑氨肽酶AAntipain:抗蛋白酶素Chymostatin:糜蛋白酶抑制素Leupeptin:亮肽酶素Pepstatin:胃酶抑素UbenimexUbenimex現(xiàn)在是24頁\一共有69頁\編輯于星期一主要內(nèi)容腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用現(xiàn)在是25頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司體外作用

金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長抑制腫瘤新血管的形成

提高機(jī)體免疫力現(xiàn)在是26頁\一共有69頁\編輯于星期一

金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長抑制腫瘤新血管的形成

提高機(jī)體免疫力現(xiàn)在是27頁\一共有69頁\編輯于星期一不同細(xì)胞株CD13金屬蛋白酶的活性RichardA.etal.Blood,1990,75(2):pp462-469現(xiàn)在是28頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司對細(xì)胞表面CD13活性的抑制UbenimexRichardA.etal.Blood,1990,75(2):pp462-469phosp、D,L、N-carb:CD10抑制現(xiàn)在是29頁\一共有69頁\編輯于星期一

金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長抑制腫瘤新血管的形成

提高機(jī)體免疫力現(xiàn)在是30頁\一共有69頁\編輯于星期一抑制K562細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡SawafujiK,etal.Leukemia&Lymphoma2003;44(11):1987-1996現(xiàn)在是31頁\一共有69頁\編輯于星期一氨肽酶(APN)/CD13抑制劑烏苯美司增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對紫杉醇的敏感性Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250MamoruYamashitaetal現(xiàn)在是32頁\一共有69頁\編輯于星期一不同卵巢癌細(xì)胞株APN/CD13的表達(dá)和紫杉醇IC50值的相關(guān)性

Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250APN/cd131expressionIC50(ng/ml)SKOV395.233±11HEY692.443±8.2ES-2987.342±4.2NOS-25.05.0±3.2TAOV7.47.2±4.2NOS48.222±3.2PMG-16.25.0±3.21MeanfluorescenceintensityinFACSanalysis現(xiàn)在是33頁\一共有69頁\編輯于星期一不同卵巢癌細(xì)胞株APN/CD13的表達(dá)和紫杉醇IC50值的相關(guān)性

APN/CD13在腫瘤細(xì)胞表達(dá)越強(qiáng)，紫杉醇的IC50值越高，腫瘤細(xì)胞對紫杉醇的敏感性越低。Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250現(xiàn)在是34頁\一共有69頁\編輯于星期一c、

含有PAC(100ng/ml)或/和烏苯美司(100ug/ml)處理24hr，ES-2形態(tài)學(xué)改變d、PAC或/和烏苯美司對ES-2細(xì)胞凋亡的影響PACPAC+UBEcontrol凋亡凋亡烏苯美司能增強(qiáng)紫杉醇誘導(dǎo)凋亡作用Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250現(xiàn)在是35頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司作用引起的凋亡相關(guān)分子改變Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250現(xiàn)在是36頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司對裸鼠體內(nèi)腹膜轉(zhuǎn)移OVCA腫瘤生長的影響PACPAC+UBE四組裸鼠的生長曲線A:PBSB:PACC:UBED:PAC+UBEB和D組生存時(shí)間：

27.1±6.6,37.7±7.0d,D組生存時(shí)間明顯長于B組(p<0.05)烏苯美司聯(lián)合紫杉醇作用裸鼠體內(nèi)結(jié)果Int.J.Cancer.2007,120,2243–2250現(xiàn)在是37頁\一共有69頁\編輯于星期一

金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長抑制腫瘤新生血管的形成

提高機(jī)體免疫力現(xiàn)在是38頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司對血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響（相差顯微鏡圖）血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，CD13/APN是重要調(diào)節(jié)因子，Ube作為CD13的功能性抑制劑，與CD13單抗相似，可抑制HUVEC的生長，與對照組有顯著差異。UBETheangiogenicregulatorCD13/APNisatranscriptionaltargetofRassignalingpathwaysinendothelialmorphogenesisBhagwatSV,etal.Blood.2003

;101(5)

:1818-1826現(xiàn)在是39頁\一共有69頁\編輯于星期一

金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長抑制腫瘤新血管的形成

提高機(jī)體免疫力現(xiàn)在是40頁\一共有69頁\編輯于星期一UBE100ug、500ug能顯著上調(diào)IL-2

、IFN-γ。烏苯美司改變抗原刺激免疫淋巴細(xì)胞因子分泌量ClinExpImmunol1998;111:30–35現(xiàn)在是41頁\一共有69頁\編輯于星期一不同濃度的烏苯美司對NK細(xì)胞活性的影響B(tài)S濃度在0.01-1ug/ml范圍內(nèi)，對NK細(xì)胞活性的影響不明顯（P﹥0.05）當(dāng)BS濃度大于10ug/ml時(shí)，能顯著增強(qiáng)小鼠脾NK細(xì)胞活性，并隨濃度提高而增強(qiáng)。烏苯美司對小鼠脾臟天然殺傷細(xì)胞活性的增強(qiáng)作用.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1995，26（6）：255-257濃度（ug/ml)NK細(xì)胞活性（%）E/T100:150:1037.45±5.824.09±7.50.0136.91±8.724.81±9.50.138.57±9.626.50±8.4139.73±11.227.41±12.31058.32±14.8※※46.89±18.9※※10065.73±17.4※※52.75±15.6※※※※

P<0.01,與相應(yīng)的對照組比較現(xiàn)在是42頁\一共有69頁\編輯于星期一主要內(nèi)容腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用現(xiàn)在是43頁\一共有69頁\編輯于星期一KazuoOTA,etal.JpnJCancerChemother.1986,13(4):1017-25烏苯美司治療成人AML臨床研究44現(xiàn)在是44頁\一共有69頁\編輯于星期一方法患者101例，年齡15-65歲先后進(jìn)行誘導(dǎo)/鞏固/強(qiáng)化和維持治療，隨后隨機(jī)分組：對照組：維持治療僅用化療53例試驗(yàn)組：化療+Ube（30mg/d，早餐前）48例兩組患者基本信息具有可比性。最后評價(jià)兩組患者的緩解時(shí)間和遠(yuǎn)期生存率。45現(xiàn)在是45頁\一共有69頁\編輯于星期一46結(jié)果：4年生存率比較4年OS:Ube46%----對照25.5%現(xiàn)在是46頁\一共有69頁\編輯于星期一15-49歲組4年生存率比較4年OS:46.3%4年OS:31.5%MST:23.4MST:39.5Ube46.3%-----31.5%(對照)47現(xiàn)在是47頁\一共有69頁\編輯于星期一50-65歲組4年生存率比較4年OS:44.5%4年OS:15.8%MST:14.5MST:32.6Ube44.5%----15.8%(對照)48現(xiàn)在是48頁\一共有69頁\編輯于星期一49兩組復(fù)發(fā)后再次緩解率比較結(jié)果顯示：烏苯美司組復(fù)發(fā)后再次緩解率53.6%，優(yōu)于對照組30.8%

?，F(xiàn)在是49頁\一共有69頁\編輯于星期一50比較兩組復(fù)發(fā)后再次緩解的患者生存率結(jié)果顯示：烏苯組中位生存時(shí)間為8.4個(gè)月，優(yōu)于對照組7.1個(gè)月。烏苯組3年生存率為18.0%，有優(yōu)于對照組3.3%

的趨勢?，F(xiàn)在是50頁\一共有69頁\編輯于星期一51結(jié)論

烏苯美司聯(lián)合化療治療成人非淋巴細(xì)胞白血病療效確切，尤其是對于50歲以上患者，4年生存率顯著提高?，F(xiàn)在是51頁\一共有69頁\編輯于星期一王曉桃,等.白血病·淋巴瘤,2013,22(10):623-626.烏苯美司聯(lián)合CAG方案治療老年及難治性AML的臨床分析52現(xiàn)在是52頁\一共有69頁\編輯于星期一方法患者56例，年齡32~75歲，中位年齡63歲隨機(jī)分組：聯(lián)合組（29例）：CAG+Ube（30mg/d，早餐前或分3次口服）單用組（27例）：CAG兩組患者基本信息無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。評價(jià)兩組療效、WBC變化、IL-2及免疫細(xì)胞百分比的改變。53現(xiàn)在是53頁\一共有69頁\編輯于星期一54結(jié)果：緩解率CRRRNR聯(lián)用組55.17%（16/29）86.21%（25/29）4/29單用組40.74%（11/27）62.96%（17/27）10/27P>0.05<0.05現(xiàn)在是54頁\一共有69頁\編輯于星期一結(jié)果：WBC變化55現(xiàn)在是55頁\一共有69頁\編輯于星期一結(jié)果：免疫學(xué)指標(biāo)變化56現(xiàn)在是56頁\一共有69頁\編輯于星期一57結(jié)論烏苯美司聯(lián)合CAG方案治療老年及難治性AML患者有較好的療效，烏苯美司能減輕化療后骨髓抑制和促進(jìn)免疫恢復(fù)作用?，F(xiàn)在是57頁\一共有69頁\編輯于星期一

ARandomizedTrialComparingIndividualizedVs.Non-IndividualizedTreatmentforElderlyAcuteMyeloidLeukemia:JALSGGML200Study

AtsushiWakita,MDet.Al.Blood(ASHAnnualMeetingAbstracts)2008112:Abstract2961AmericanSocietyofHematology現(xiàn)在是58頁\一共有69頁\編輯于星期一研究設(shè)計(jì)enocitabine(BH-AC)200mg/㎡ond1–8,3hinfusiondaunorubicin(DNR)40mg/㎡ond1–3,30mininfusion新診斷為AML患者244例，年齡均大于65歲

接受誘導(dǎo)化療達(dá)到CR后隨機(jī)分組UBE安慰劑UY組UN組鞏固治療：包括含BH-AC、MIT、DNR、ACR等方案AtsushiWakita,MDet.Al.Blood(ASHAnnualMeetingAbstracts)2008112:Abstract2961AmericanSocietyofHematology現(xiàn)在是59頁\一共有69頁\編輯于星期一結(jié)果與結(jié)論結(jié)果：CR率65%，女性>男性（P<0.05)

3年OS組UY和組UN:43.1%、26.9%(p=0.073).結(jié)論：對于老年AML達(dá)到CR者，服用UBE有更多的生存獲益。AtsushiWakita,MDet.Al.Blood(ASHAnnualMeetingAbstracts)2008112:Abstract2961AmericanSocietyofHematology現(xiàn)在是60頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司聯(lián)合化療治療慢性髓性白血病CML的主要目標(biāo)是達(dá)到細(xì)胞遺傳學(xué)的完全緩解。方法：

烏苯美司與馬利蘭聯(lián)合治療23例慢性髓性白血病(CML)

結(jié)果：全部達(dá)到血液學(xué)完全緩解。其中細(xì)胞遺傳學(xué)CR6例(26%)，PR1例(4%)，PD6例(26%)。細(xì)胞遺傳學(xué)轉(zhuǎn)為正常中位持續(xù)220個(gè)月(60～410)。YUzukaetal.GanToKagakuRyoho,1993;20(2):207-14.現(xiàn)在是61頁\一共有69頁\編輯于星期一生存結(jié)果3年生存率為(86.6土9.0)(95%可信限)，對照64土9.6%P(<0.01)加速期患者生存期也得到延長。YUzukaetal.GanToKagakuRyoho,1993;20(2):207-14.Ube現(xiàn)在是62頁\一共有69頁\編輯于星期一烏苯美司聯(lián)合化療治療CML研究方法：Ph染色體及bcr-abl融合基因均(+)40例CML（初治31例,復(fù)治10例）化療方案：Ara-C50mg×7-10d,HU1.0tid，口服至wbc降至10×109/L～20×109/L之間,停用Ara–C隨機(jī)分成兩組：

IFN-α和烏苯美司30mg,每日1次清晨空腹口服，至6個(gè)月所有病例均取治療6月后的檢測值歐陽敏.江西省人民醫(yī)院;白血病·淋巴瘤2001,10（4）:422-425現(xiàn)在是63頁\一共有69頁\編輯于星期一結(jié)果烏苯美司組全部達(dá)完全血液學(xué)緩解,6例獲得細(xì)胞遺傳學(xué)反應(yīng),經(jīng)t檢驗(yàn),IFN治療組及烏苯美司治療組均可使Ph量下降(p<0.05),兩組下降幅度無明顯差別(p>0.05)。組別n治療前