第16章其他細(xì)菌第16章其他細(xì)菌本章學(xué)習(xí)內(nèi)容：白喉棒狀桿菌和百日咳鮑特菌生物學(xué)特性致病性和免疫性臨床案例檢測防治技術(shù)掌握菌的鑒別方法和臨床引起的疾病；熟悉致病物質(zhì)、檢驗(yàn)方案和防治原則；了解白喉棒狀桿菌和百日咳鮑特菌的生物學(xué)形態(tài)特征。本章學(xué)習(xí)目標(biāo)：第16章其他細(xì)菌第一節(jié)白喉棒狀桿菌

(Corynebacteriumdiphtheria)1.形態(tài)與染色

菌體細(xì)長微彎，一端或兩端膨大呈棒狀；細(xì)菌常以銳角度成簇狀聚集成V，L或Y型，無運(yùn)動(dòng)性、莢膜、芽胞。生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色異染顆粒----鑒定Albert染色

1）制備細(xì)胞涂片。

2）涂片經(jīng)火焰固定，滴加甲苯胺藍(lán)染色液染色3～5min。

3）水洗。

4）滴加Albert碘液染色1min。

5）水洗。

6）干后鏡檢。生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求較高呂氏血清斜面上生長迅速鑒別選擇培養(yǎng)基----0.03%～0.04%亞碲酸鉀的血平板（上海醫(yī)學(xué)院，2011）生物學(xué)特性2.培養(yǎng)特性（范艷霞，2003）生物學(xué)特性1.致病物質(zhì)白喉外毒素：分子量約為62KDa的蛋白質(zhì)（DT‐A,21

kDa;DT‐B,30

kDa），毒性強(qiáng)烈，且具有高度免疫原性，也就是一種能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的抗原，以單體和二聚體的形式存在，受pH影響大。

作用靶點(diǎn)：心肌、神經(jīng)細(xì)胞、腎上腺組織細(xì)胞,抑制易感細(xì)胞中的蛋白質(zhì)合成來介導(dǎo)其殺傷細(xì)胞的作用。(OnedaLeka,2014)致病性與免疫性催化域（綠色）通過將ADPR部分（淺綠色）從NAD（紅色）轉(zhuǎn)移到延伸因子2（EF2，橙色）的715組氨酸殘基上而起作用。因此，EF2被不可逆地滅活，從而抑制了蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞死亡。1.致病物質(zhì)-DT的作用機(jī)理（FatemehShafiee，2019）致病性與免疫性2.所致疾病臨床表現(xiàn)局部炎癥：白喉----假膜

局部粘膜上皮細(xì)胞發(fā)生壞死，血管擴(kuò)張，粒細(xì)胞浸潤及纖維滲出，形成的灰白色膜狀物，稱為假膜。全身中毒癥狀：

心肌炎、軟腭麻痹、聲嘶、吞咽困難、膈肌麻痹、腎上腺功能障礙等癥狀。

白喉的傳染源是白喉病人及恢復(fù)期帶菌者。本菌存在于假膜及鼻咽腔或鼻分泌物內(nèi),經(jīng)飛沫,污染物品或飲食而傳播。致病性與免疫性3.抗毒素免疫感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力抗毒素免疫致病性與免疫性4.錫克試驗(yàn)(Schicktest)原理：

對(duì)白喉具有免疫力的個(gè)體，血清中有白喉抗毒素，能中和白喉毒素的有害作用。皮內(nèi)注射白喉毒素后，觀察局部皮膚反應(yīng)，可以判斷受試者是否對(duì)白喉有免疫力。方法和結(jié)果：方法是注射一定量的白喉毒素于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)。受試者如無免疫力，24-48h，局部皮膚出現(xiàn)紅腫，直徑在1-2cm者為陽性反應(yīng)。相反，受試者如有免疫力，其血清中含有足量的抗毒素抗體，能中合注入的毒素，局部不出現(xiàn)紅腫，為陰性反應(yīng)。Schicktest結(jié)果分析

試驗(yàn)側(cè)對(duì)照側(cè) 本質(zhì) 陰性反應(yīng)

––

有免疫力陽性反應(yīng)

24~48h–無免疫力

4~7d達(dá)峰假陽性反應(yīng)

6~18h紅腫同前有免疫力，超敏反應(yīng)

1~2d消退

混合反應(yīng)

6~18h紅腫6~18h紅腫無免疫力，超敏反應(yīng)

4~7d達(dá)峰3~4d反應(yīng)消退致病性與免疫性標(biāo)本直接涂片鏡檢分離培養(yǎng)毒力鑒定核酸檢測（右圖）

16SrRNA、rpoB和pld基因的部分序列的擴(kuò)增。MW泳道：1KD分子Maker。泳道1：陰性對(duì)照泳道；2：假肺棒狀桿菌

；泳道3-4：干棒桿菌分離株；泳道5：假結(jié)核棒桿菌（FernandoHernández-León，2016）微生物學(xué)檢查法免疫與防治預(yù)防人工主動(dòng)免疫：注射白喉類毒素--白百破人工被動(dòng)免疫：注射白喉抗毒素藥物預(yù)防：青霉素或紅霉素治療白喉抗毒素---皮膚試驗(yàn)、早期足量抗生素病例分析劇毒成人與鼠對(duì)白喉毒素有一定耐受性腫瘤組織對(duì)白喉毒素高度敏感將腫瘤單克隆抗體與毒素A亞單位結(jié)合，可使A亞單位對(duì)腫瘤有特異性殺傷作用，以此作為生物導(dǎo)彈來治療腫瘤.白喉毒素的應(yīng)用白喉毒素的應(yīng)用（FatemehShafiee，2019）白喉毒素的應(yīng)用（FatemehShafiee，2019）本節(jié)結(jié)束第二節(jié)百日咳鮑特菌

(B.pertussis)1.形態(tài)與染色

革蘭氏陰性，卵圓形短小桿菌。光滑型有莢膜和菌毛。無鞭毛和芽孢。生物學(xué)特性（來源網(wǎng)絡(luò)）ofhealthcare.ca/explore/exhibits/vaccinations/pertussis.html2.培養(yǎng)特性生物學(xué)特性

需氧，最適生長溫度37℃，pH為6.8-7.0。初次培養(yǎng)B-G(Bordet-Gengou)培養(yǎng)基。菌落細(xì)小、光滑、不透明，銀灰色珍珠狀菌落，周圍有不明顯的狹窄溶血環(huán)。（來源網(wǎng)絡(luò)）3.抗原構(gòu)造和抵抗力

根據(jù)耐熱性（100℃2h）不同，分為耐熱菌體（O）抗原和不耐熱的莢膜（K)抗原。

百日咳鮑特菌抵抗力較弱，對(duì)干燥和一般消毒劑敏感，56℃，30min，日光照射1h可死亡。對(duì)多種抗生素如氨芐西林、氯霉素、紅霉素敏感，但對(duì)青霉素不敏感。生物學(xué)特性致病物質(zhì)

莢膜、菌毛、內(nèi)毒素等多種物質(zhì)。百日咳毒素，為外毒素，不耐熱，56℃10min可被破壞，經(jīng)甲醛處理，可以成為類毒素。腺苷酸環(huán)化酶毒素，能是巨噬細(xì)胞內(nèi)cAMP增加，抑制巨噬細(xì)胞功能。血凝素，凝集紅細(xì)胞，與黏附上皮細(xì)胞有關(guān)。致病性與免疫性(/10.1016/S0969-2126(00)00007-1)(DOI:

10.2210/pdb1PRT/pdb)所致疾病百日咳鮑特菌主要通過飛沫經(jīng)呼吸道傳播。進(jìn)入呼吸道后，以菌毛黏附在上皮細(xì)胞上，并進(jìn)行繁殖，產(chǎn)生毒素使細(xì)胞壞死，從而影響上皮細(xì)胞纖毛運(yùn)動(dòng)，粘稠粉末物排除受阻，刺激神經(jīng)末梢，引起劇烈的連續(xù)性咳嗽。病程分為三期：卡特期：發(fā)病至出現(xiàn)痙咳，1-2w，此期傳染性最強(qiáng)。痙咳期：2-5周。出現(xiàn)陣發(fā)性、痙攣性咳嗽，伴有特殊的高音調(diào)雞鳴樣吼聲恢復(fù)期：2-3周。痙攣性咳嗽減輕，次數(shù)減少，雞鳴樣吼聲消失。致病性與免疫性免疫性

百日咳病后或者預(yù)防接種后，機(jī)體可以產(chǎn)生多種抗體，獲得持久免疫力，很少再次感染，即使再感染，癥狀也輕。氣管粘膜局部的sIgA能阻抑百日咳菌黏附于氣管上皮細(xì)胞，其抗感染作用尤為重要。致病性與免疫性（來源網(wǎng)絡(luò)）（來源網(wǎng)絡(luò)）微生物學(xué)檢驗(yàn)樣本：發(fā)病初期的鼻咽拭子分離培養(yǎng)：B-G培養(yǎng)基，37度，2-3天，根據(jù)菌落特點(diǎn)鑒定