血糖含量的測定第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日一實驗?zāi)康?、掌握無蛋白血濾液2、血糖測定的原理和方法第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日二實驗原理1.無蛋白血濾液的制備

血液中所含的蛋白質(zhì)常影響其他成分的測定，可以采用鎢酸法除去蛋白質(zhì)，制備無蛋白血濾液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等測定使用。

鎢酸鈉與硫酸混合生成鎢酸。在pH值小于等電點的溶液中，鎢酸與血液中的蛋白質(zhì)分子的陽離子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀過濾或離心，上清液即為無色、透明、pH值約為6的無蛋白濾液。第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日

2.血糖測定

葡萄糖是一種多羥基的醛類化合物，具有還原性，與堿性銅試劑混合加熱，

葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧[suō]基，而銅試劑中的二價銅被還原成磚紅色的氧化亞銅沉淀。氧化亞銅可以使磷鉬[mù]酸還原成鉬藍，使溶液成藍色。其生成藍色的深度與血濾液中葡萄糖濃度成正比。通過分光光度計比色，即可求出血糖的含量。第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日三實驗器材儀器：錐形瓶；試管及試管架；離心機；電爐；血糖管；奧氏吸管；分光光度計。試劑：動物全血；1／3mol·Ｌ硫酸溶液；堿性銅試劑；磷鉬酸試劑；0.25％苯甲酸溶液；葡萄糖應(yīng)用標準溶液0.1mg·mL－１－１第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日四實驗步驟1.無蛋白血濾液的制備

吸取充分均勻的抗凝血1mL，擦凈管外血液，緩慢放入錐形瓶或試管中。加入蒸餾水7mL，混勻，使完全溶血。加入0.33mol·L硫酸溶液1mL，充分混勻。此時血液由鮮紅色變?yōu)樽厣?，靜置5~10min，使其酸化完全。加入10%鎢酸鈉溶液1mL，邊加邊搖。當(dāng)搖到不再產(chǎn)生泡沫時為止。說明蛋白質(zhì)已經(jīng)完全變性沉淀。放置5~10min，過濾或離心出去沉淀，既得無蛋白濾液（每毫升相當(dāng)于1/10全血）－１第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日2.血糖測定取3支血糖管按下表操作：

血糖管空白管標準管測定管無蛋白血濾液蒸餾水葡萄糖應(yīng)用標準溶液堿性銅試劑—2.0—2.0—1.01.02.01.01.0—2.0混勻，同時放入100℃沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷卻3min（切勿搖動血糖管）磷鉬酸試劑2.02.02.0混勻后放置2min（使二氧化碳氣體逸出）蒸餾水加至252525試劑/mg第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日用蒸餾水加至25刻度處后，混勻，空白管調(diào)零，在波長420nm處比色，記錄各管光密度。計算求出每100mL血液中葡萄糖的質(zhì)量（mg）計算公式：

樣品中的血糖（mg/100mL）=（測定管光密度/標

準管光密度）*0.1*100/0.1=（測定管光密度/標準管光密度）*100

第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期日五注意事項一定要等水沸后，再放血糖管。準確加熱8min，時間過久則呈色較深，反之則淺，均影響結(jié)果的準確性。為避免還原生成的亞銅被空氣中的氧再氧化，冷卻時切勿搖動血糖管。第9頁，共11頁，20