基因擴增實驗室常用儀器設(shè)備的使用和維護

衛(wèi)生部臨床檢驗中心

王露楠

PCR熱循環(huán)儀（DNA擴增儀）高速(冷凍)離心機漩渦振蕩混旋器恒溫水浴箱/恒溫金屬浴洗板機（PCR-ELISA)酶標儀(PCR-ELISA)加樣器PCR熱循環(huán)儀（DNA擴增儀）PCR擴增儀的原理及發(fā)展狀況：

PCR擴增儀原理國內(nèi)常見擴增儀簡介國內(nèi)常見熒光定量PCR儀簡介PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)PCR擴增儀的原理及發(fā)展狀況（1）梯度水浴法變性:如94C退火:如55C

延伸:如72C

（2）空氣驅(qū)動循環(huán)恒溫裝置

本系統(tǒng)力求降低部件的成本，用空氣作為熱傳導媒介。裝置包括機箱（外殼）、熱源、冷空氣源、控制器和輔助電器元件等部分。優(yōu)點：不用金屬的精密加工，成本降低。整個系統(tǒng)沒有液體流動，不用致冷液，因而安全程度高。恒溫精度可達1℃。缺點：單純靠外部空氣制冷，受環(huán)境溫度影響。（3）變溫金屬塊作恒溫裝置加熱方式有電熱發(fā)熱、半導體發(fā)熱，制冷方式有半導體制冷和壓縮機制冷等多種方式。國外產(chǎn)品的特點是產(chǎn)品質(zhì)量和性能較穩(wěn)定。機型：適用，建議8*12孔德模式。國內(nèi)常見擴增儀簡介T11-II型基因擴增儀（華美生物工程公司）溫度設(shè)定范圍：室溫-99C樣品批量能力：480.5ml或161.5ml離心管動態(tài)顯示內(nèi)容:實時溫度、到計數(shù)時間、到計數(shù)循環(huán)數(shù)主要功能：整機全自動化運行，線性運動臂同時具有自動和手動功能；具有斷電恢復(fù)功能；可貯存128個用戶文件。2400型DNA擴增系統(tǒng)(

美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）最大樣本數(shù)：可同時擴增3*8個0.2mlPCR反應(yīng)管。溫度范圍：4-99.9℃加熱冷卻速度：樣本實際升降溫速度平均為1℃/秒。靜態(tài)樣本均衡性：0.5℃，35-100℃范圍。溫度精度：35-100℃間誤差小于0.75℃。特點：所附加熱蓋保證防止樣品蒸發(fā)，無需加石蠟油操作，滿足最小5l體積；擴增反應(yīng)的要求；可儲存68個PCR方法，每個方法包括PCR前處理，保溫，PCR循環(huán)及PCR擴增后保溫條件；斷電后有自動啟動功能。PTC-200熱循環(huán)儀（MJ公司產(chǎn)品）最大樣本數(shù)：多樣本載板可選擇，其中包括擴增96個0.2mlPCR反應(yīng)管。溫度范圍：-5-105℃加熱速度：樣本實際升溫速度為3.5℃/秒。溫度精度：孔間溫度差異小于0.3℃。特點：采用可調(diào)壓力和高度的熱蓋，防止樣品蒸發(fā)，無需加石蠟油操作；三種溫控選擇：模塊、樣本內(nèi)參或電腦模擬計算。Eppendorf梯度PCR儀最大樣本數(shù)：是唯一可同時防置0.2ml和0.5ml反應(yīng)管的擴增儀，可同時擴增96個0.2mlPCR反應(yīng)管和77個0.5ml反應(yīng)管。溫度范圍：4-99℃加熱速度：3℃/秒。冷卻速度：2℃/秒。溫度準確性：0.2℃。特點：循環(huán)時可對變性、退火和延伸同時設(shè)溫度梯度。PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)PCR儀應(yīng)放在臨床基因擴增實驗室的第三區(qū)。儀器應(yīng)放置水平臺上，電源電壓須與儀器要求電壓相一致，并連接可靠的地線。儀器遠離水源、明火及腐蝕性物質(zhì)。工作室溫要求：15-25℃，通風保證散熱。接穩(wěn)壓電源。尤其是半導體升溫降溫的設(shè)備。每次實驗時，最好能將擴增儀內(nèi)的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時可用空管代替，以保證實驗的一致性和重復(fù)性。PCR擴增儀的使用與保養(yǎng)實驗結(jié)束后應(yīng)及時擦干孔位內(nèi)呆能存在的水分，蓋上機蓋。應(yīng)定期使用電子測溫儀校準溫度。水浴式擴增儀應(yīng)及時補充水，以免水量過少，影響溫度穩(wěn)定性。定期清潔熱蓋和反應(yīng)孔。國內(nèi)常見熒光定量PCR儀簡介GeneAmp5700型熒光定量PCR儀Lightcycler熒光定量PCR系統(tǒng)ABI7000型熒光定量PCR儀杭州博日Line-geneLightCycler(Roche)Rotor-Gene(CorbettResearch)ABIPrism(AppliedBiosystems)GeneAmp5700型熒光定量PCR儀儀器特點外標定量，熔點曲線分析。5700采用基于CT值之實時動態(tài)熒光定量PCR方法，結(jié)果重復(fù)性好，線性范圍廣，可分別用于TaqMan熒光探針技術(shù)作定量PCR和SYBRGreen熒光染料作定量PCR。一次最多可同時分析96個樣品，熒光檢測波長范圍530-590nm。GeneAmp5700型熒光定量PCR儀

影響測定結(jié)果的因素域值設(shè)定光路維護加樣的準確性和反應(yīng)體系的均一性反應(yīng)管中是否有氣泡反應(yīng)管不符合熒光檢測要求或疏水性差反應(yīng)管或反應(yīng)槽被熒光物質(zhì)污染反應(yīng)管用記號筆做標記Lightcycler熒光定量PCR系統(tǒng)

原理和特點可使用外標法定量，可加內(nèi)對照，可做熔點曲線分析。單一光路的三個檢測點對樣本同時進行三個波長的熒光檢測，擴贈與檢測同時進行，提供實時分析和在線監(jiān)測。引入獨特的顏色補償試劑和軟件以消除個檢測通道其它染料熒光的干擾。一次可做32個樣本。公用熱室，保證單次PCR個樣本的狀況連續(xù)一致。循環(huán)速度快，20-30分鐘完成30-40個循環(huán)，一次檢測樣本數(shù)32個。Lightcycler熒光定量PCR系統(tǒng)清潔和維護反應(yīng)槽和內(nèi)壁均可用家用洗滌劑清潔，但反應(yīng)槽必須在取出后才能進行清潔。當毛細管破碎時，首先用儀器廠家提供的毛刷將碎片去除，再用70%乙醇清洗反應(yīng)槽。光路部分須用無水乙醇清潔ABI萬70誦00型款熒光定角量PC脹R儀檢測原肉理和特刪點采用精琴確的化桌學原理趁和多組簡分計算戰(zhàn)方法，牢可準確砌檢測和務(wù)處理P酬CR指倉數(shù)級擴黃增的數(shù)擦據(jù)，得崗出高精顆度重現(xiàn)謙的Ct值，多色陪熒光檢測北，實時數(shù)液據(jù)監(jiān)控，糖并有熔點眨曲線分析來。熒光波長押范圍50霞0-66呆0nm，可分別用察于Taq侄Man葉熒光探針江技術(shù)作定異量PCR汽和SYB盛RGr圾een熒擊光染料作芬定量PC雙R。杭州博日較Lin微e-ge陡ne檢測原粉理和特撲點內(nèi)標定暮量和外鑄標定量房誠，激發(fā)肅光波長耗470錄nm，習熒光檢震測波長吵530晌nm、躺640伐nm和汽710疊nm。對PCR待擴增全過南程進行實膠時動態(tài)監(jiān)貓測。一次最多選可同時分務(wù)析33個隱樣品，最潤大循環(huán)數(shù)壇為99。高速(沒冷凍基)離心磚機使用方勸法注意事剛項維護和保撈養(yǎng)使用方害法離心機應(yīng)筋放置在水眨平堅固的糖地板或平工臺上，并敘力求使機秒器處于水尤平位置以罷免離心時駱造成機器襪震動。打開電忠源開關(guān)藥，按要申求裝上尊所需的傳轉(zhuǎn)頭，穿將預(yù)先燥平衡好饒的樣品導放置于峽轉(zhuǎn)頭樣煉品架上悉（離心沾筒須與蝕樣品同瓣時平衡奏），關(guān)研閉機蓋避。按功能選釀?chuàng)矜I，設(shè)填置各項要席求：溫度曠、速度、醫(yī)時間、加輩速度及減史速度，帶揀電腦控制裹的機器還炕需按儲存疲鍵，以便助記憶輸入引的各項信列息。待離心機隆完全停止京轉(zhuǎn)動時打陪開機蓋，高取出離心姑樣品，用怖柔軟干凈削的布擦凈利轉(zhuǎn)頭和機警腔內(nèi)壁，乎待離心機雕腔內(nèi)溫度營與室溫平晴衡后方可肉蓋上機蓋悅。注意事伏項機體應(yīng)始字終處于水談平位置，籃外接電源觸系統(tǒng)的電孝壓要匹配怒，并要求曬有良好的伙接地線。開機前灑應(yīng)檢查脖轉(zhuǎn)頭按丹裝是否妙牢固，峰機腔有嘩無異物排掉入。樣品應(yīng)饞預(yù)先平以衡。離心機四運行時捉，離心糖機周圍30c攤m范圍內(nèi)不哨能有人和餐危險物品鐵。揮發(fā)性或珍腐蝕性液毀體離心時昂，應(yīng)使用搞帶蓋的離銅心管，并軋確保液體震不外漏以兄免腐蝕機趟腔或造成煉事故。注意事劇項易燃易爆偽以及易與預(yù)其他物質(zhì)赴發(fā)生反應(yīng)啊的物質(zhì)不悲能離心。在沒有相充應(yīng)的防護盾措施時，中不能離心星有毒的、紫放射性的快物質(zhì)或病姐原微生物東。離心機寧運行時掩不可人衫為地打五開蓋子宰。如果轉(zhuǎn)頭嫩和蓋子有救可見的腐古蝕或磨損張的痕跡，躺則應(yīng)立即偏停止使用駁。使用的誰玻璃或綢塑料離榨心管應(yīng)副能承受也相應(yīng)的岔離心力哪并大小欣合適。然非金屬老轉(zhuǎn)頭不桿可用紫柳外照射稼。如果被禿離心的族物品密增度大于海說明書裂的規(guī)定貼范圍，庸應(yīng)根據(jù)現(xiàn)RCF縫計算公架式，減涂小離心解體積。維護和保蟻養(yǎng)轉(zhuǎn)頭應(yīng)定甘期清洗和頓消毒。擦省拭離心機怎腔時動作創(chuàng)要輕，以網(wǎng)免損壞機奏腔內(nèi)溫度衛(wèi)感應(yīng)器。使用消掛毒液處趙理時，矛溫度不掩可超過被25℃償，時間垮不可超巧過規(guī)定哪時間。可以用高吼壓消毒的只轉(zhuǎn)頭，應(yīng)紋在清洗后需，121巖℃消毒規(guī)20分鐘蹄，轉(zhuǎn)頭務(wù)輩必平放，裁并不受擠鉛壓，以免拖變形。每次操稠作完畢款；應(yīng)作炕好使用慢情況記老錄，并羞定期對誰機器各勝項性能帖進行檢事修。離心過羊程中若色發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，應(yīng)蜜立即關(guān)閉券電源，報耗請有關(guān)技鎮(zhèn)術(shù)人員檢臂修。洗板機機理及主禿要類型國內(nèi)常啊見洗板透機簡介選購洗板拘機的注意啞事項洗板機躲使用中錦注意事繡項機理及主熊要類型簡易型例也可稱償為手動栽式洗板劉器，一疑般由負灘壓泵與婆清洗頭軍，可完慮成最基隔本的吸云液，也齡有可完舅成加液暑動作的吃裝置。蘆這類裝到置，由唱于成本皺極低，飯使用方中便，工護作量不績大時可陸以使用坐。自動式洗飼板機：可確根據(jù)用戶錯的設(shè)置完旅成規(guī)定次糞數(shù)與條數(shù)鉛的洗板工頭作，有的淘具有簡單綁的存貯功道能。主要啊目的是利卸用自動化霧技術(shù)，替矩代手工勞虹動。其中澆有條式與馬板式之分扮。如LA辟BSYS訊TEM的厲W4、B鈔IO-R賤AD早期測的125的0、拓普敲公司的D腳EM-2乏等。集成環(huán)境播式洗板機旬特點在于勺提供良好良的洗板環(huán)笛境，強調(diào)場洗滌效果本而非自動他化，具有暮一定的智障能特性，慶如LAB扶SYST甜EM的A押CSEN幣TWA蟻SH，拓每普的DE炮M-3等租。國內(nèi)常塞見洗板好機簡介適用微孔課板清洗頭陷加液拌量(u筐L)殘留量(喪uL)浸泡時間震動兩點吸液底部沖洗洗液種類選購洗丙板機的快注意事判項關(guān)鍵指標窗：殘留量3uL。能否提惡供可選乓擇的洗叛板環(huán)境繼。是否對國祥產(chǎn)試劑盒蠅具有兼容恐性與擴展待性?？疾靸x誦器的可局靠性與僵洗滌效蘆果的可斬靠性。售后服癥務(wù)是否悔及時、艙價格是崖否合理流。洗板機使擊用中注意烤事項有一定蠅的洗滌罪次數(shù)：蛙多次洗仍滌有利批于取得弊好的效哪果，一擠般不超厲過6次繡。注意每孔鍛的加液量余；以加滿刷為宜，一在般為每孔愚350微路升建議在洗決滌前進行丟位置調(diào)節(jié)哲，吸針要泥到微孔底筒部，以降辰低殘留量堵。建議用牽戶采用手兩點吸漂液與底海部沖洗王方式，蘆以得到鏡好的洗德滌效果耳。洗滌結(jié)束械后，不能世像常規(guī)E職LISA壯扣板；每天使琴用完畢種后應(yīng)沖贈洗管路汗及清洗尖頭。定期維護澤、檢修儀盟器及配件遺。加樣器基因擴增熔實驗室應(yīng)備有4套滔連續(xù)可調(diào)加樣器振，分別褲用于試劑準備恥、樣本處理、擴增寧和產(chǎn)物檢測四個試艦驗區(qū)。加樣器加樣器的翻類型P型移液鉤器的型號探和取液范閃圍加樣器的旬使用P型移液蒼器的應(yīng)用敬范圍P型移炎液器技苗術(shù)指標加樣器的茫校準加樣器繁的類型單道連續(xù)摟可調(diào)式移謝液器多通道連裳續(xù)可調(diào)式趴移液器單道連協(xié)續(xù)移液秤器單道移液屬管配合使呼用的移液伏器P型移墻液器的逢型號和棉取液范襯圍型號賺所用斑量程范線圍（μL）GILS神ON謝e掉ppen瘋dorfP2鞭0冤.12P10畫0叼.510瞧0.510P20釣220牌220P10雞0從20100倆1梳0100P20剩0傲30200嚇2記0200P100都0塌2001000溜10態(tài)01000加樣器治的使用吸液的位利置把按鈕價壓至第澤一停點鋒垂直握約持移液職器，使飛吸嘴浸歡入液樣畢中，浸橡入液體閑深度視徹型號而封定：P2和要P10時≤1適mmP20乖和P1瀉00旺2-3粘mmP200嚷和P10渠00按2類-4mmP500湖0折3-統(tǒng)6mmP10六ML刊5賞-7m摔m設(shè)定容悼量值P型移液殲器的應(yīng)用效范圍P2，P隔10 :追超微量計虹量及移液燒，應(yīng)用于紗DNA定順序及酶分橫析等。P20強，P1贈00，柄P20舍0和P卸100歇0 應(yīng)帥用于一貼般水溶繞液、酸敵、鹼的筒計量和守移液。P500薦0和P1刺0ML粗大體積移融液和計量鼻。P型移桿液器技機術(shù)指標盤(1)權(quán)(G叮ILS健ON)型號桃容弦量描準確度環(huán)（標準泄誤差）聰精度（川重復(fù)性晨）2(μL)圾絕對燭誤差(μL)翼相對誤差阻(%)袍標谷準誤差(μL) 相像對離差(卵%)P2捕最小謀0.2輛±0漿.024幣±12臘≤辮0.01摧2凈≤視60.5積±0.萬025配±5昌≤0.你012窗≤2.庫50最大紙2蜓±0.太030編±1耀.5買≤逆0.0孤14葡≤忙0.7漏0P10誕最小鈔1局±背0.02時5型±2部.5代≤0.0奪12簡≤1.2炸55勒±遍0.07結(jié)5翅±1戒.5辟≤0.0去30資≤0.6韻0最大乏10轎±雅0.10蹈±第1童≤0療.040京≤0閘.40P20乘最小冰2暮±0風.1沒±5.杯0蠅≤0.奧03浪≤1識.505訂±包0.1巷±2.斤0點≤0鉛.04逐≤0芹.8010裁±0.孔1果±1狼.0擔≤段0.0頁5鑰≤饒0.5土0最大渴20濕±0.座2沃±1扶.0綿≤0銳.06夢≤0裝.30P型移液磨器技術(shù)指側(cè)標(2)架(G滋ILSO米N)型號剩容樣量炭準確度挎（標準脂誤差）魯精度（格重復(fù)性衡）2(μL)倒絕對臺誤差(μL)般相對誤差咽(%)固標默準誤差(μL)蒜相對離乳差(%鑄)P10錦0癢最小貓2相0勻±窩0.3與5以±1.重8烘≤醬0.1已0巖≤0曾.550畝±0.鋒4裁±灑0.8帽≤0鐘.12磚≤0.求24最大糞100晴±0.容8許±0.8衣≤吳0.15古≤0冒.15P20代0 最載小吐5新0辣±0碰.5嚴±1綁≤0.假2排≤刃0.4慮0100辮±0挪.8骨±0.論8稍≤0.2嶼5欺≤巧0.25最大傍20運0引±1.盜6然±0涼.8只≤0.飄30只≤0.1棕5P100啦0取最小業(yè)2任00胃±3男.0碰±1.課5秀≤0.6歡≤0.3500姐±草4.0槍±0喘.8獄≤1.埋0刺≤0昏.2最大獄10掃00?！?.揉0孩±避0.8敘≤蓄1.5展≤匠0.1穗5P型移浩液器技攜術(shù)指標件(3)良(厚epp燭end掃orf悅)型號漏容筑量(μL)姥不準確度委(%)夠不精密度浴(%)P10摩最誘小屯0.洗5倍±5行.0頂≤2.喊81媽±2謹.5賊≤1.掙8最大戰(zhàn)10拜±1.稅0婚≤0.戴4P20狐最小掙2露±5侮.0蒙≤1.犬5最大鞋20表±享1.0鋼≤0.徑3P10眨0而最小丙10什±3.焦0慨≤餓1.0最大譜1渣00乏±0撒.8融≤0.存2P20顧0語最小省20之±丟2.5搬≤0昌.7最大皮2沿00踐±0完.6練≤0.導2P100請0躬最小拴10價0上±3.翼0突≤0.啞6最大箏10身00峽±0.冤6菜≤擔0.2加樣器臺的校準校準環(huán)宜境和用滔具要求：室輔溫：2它0~25℃，測定國中波動捏范圍不翼大于±0.喜5℃。電子天平拴：放置于爺無塵和震再動影響的作臺面上，決房間盡可癥能有空調(diào)逝。稱量時鍬，為保證談天平內(nèi)的陜濕度（相穴對濕度6右0-90川%），天尾平內(nèi)應(yīng)放敘置一裝有房誠10m似l蒸餾水拾的小燒杯故。小燒杯：訂5~10尿ml體瓣積。測定液體漫：溫度為20~2喂5℃的去氣酒雙蒸水。選定校準找體積：擬校準體錯積；加樣器標文定體積的池中間體積紐奉；最小可調(diào)箏體積（不指小于擬校話準體積的扇10%）使。如為固定粱體積加樣騎器，則只損有一種校泉準體積。校準步盯驟：將加樣器憤調(diào)至擬校摸準體積，永選擇合適逗的吸頭；調(diào)節(jié)好天貸平；來回吸吹噸蒸餾水3炸次，以使淹吸頭濕潤構(gòu)，用紗布擇拭干吸頭垂直握純住加樣婆器，將商吸頭浸怖入液面真2~3虜mm愧處，緩逢慢（1留~3秒諒）一致頸地吸取廚蒸餾水泛；將吸頭離腥開液面，煙靠在管壁沿，去掉吸贏頭外部的聞液體；將柳加樣器以時30℃角放入稱某量燒杯中搬，緩慢一失致地將加丈樣器壓至逐第一檔，等待咽1~3秒粥，再壓至祖第二檔，慘使吸頭里點的液體完獅全排出；記錄稱伸量值；擦干吸頭弱外面；按上述梳步驟稱永量10棵次；取10蠻次測定還值的均達值作為主最后加歡樣器吸薦取的蒸麗餾水重藍量，按勁附表所倚列蒸餾藍水Z因創(chuàng)子計算奸體積。尼按校準豈結(jié)果調(diào)珍節(jié)加樣顏器。注意事?lián)雾椄鶕?jù)所肺需取液膀量選擇禮相應(yīng)的搏移液器假及吸頭沖，基因伙擴增實牌驗要求授使用帶碗濾芯的貫吸頭，控防止交劣叉污染你。吸取液拖體時應(yīng)蓮緩慢勻速速吸取伶，避免安液體濺拜到移液女器頭上館；打出霧液體后賠拇指不瞞應(yīng)松開靈按鈕，菊將吸液麗嘴壓掉使后再將哲拇指松劉開，避坡免液體湯回吸。在調(diào)整未取液量界的旋鈕阻時，不幣要用力揚過猛，裁并應(yīng)注升意計數(shù)菠器顯示委的數(shù)值累不要超紛過其可擊調(diào)范圍揚。連續(xù)可回調(diào)式移掙液器不幼可在無征吸頭時油使用，非吸頭有泳液體時憐不可平輛放或倒樹置。注意事披項操作時要瞎慢和穩(wěn)，山吸嘴浸入編液體深度沈要合適，奶吸液過程召盡量保持灑不變；改感吸不同液條體、樣品近或試劑前臭要換新吸槍嘴；發(fā)現(xiàn)森吸嘴內(nèi)有缺殘液時必仔須更換；慶新吸嘴使亂用前應(yīng)先音預(yù)測。為防止液謎體進入移端液器套筒框內(nèi)，注意稠以下幾點朝：壓放按容鈕時保持哭平穩(wěn)；移礙液器不得桶倒轉(zhuǎn)；吸繩嘴中有液依體時不可短將移液器頌平放；P霜5000浮及P10游ML移液體器一定要棵加過濾芯販。切勿用豪油脂等充潤滑活浸塞或密疫封圈。使用了女酸或有錯腐蝕蒸朵氣的溶直液后，桐最好拆購下套筒中，用蒸施餾水清私洗活塞窩及密封獄圈。注意事項連續(xù)可調(diào)農(nóng)式移液器諷在取樣加辰樣過程中彩應(yīng)注意移咽液嘴不能鞏觸及其他切物品，以旺免被污染繞；移液嘴黃盒（架子遣）、廢液碎瓶、所取莫試劑及加忽樣的樣品游管應(yīng)擺放適合理，以悄方便操作井過程、避對免污染為噴原則。連續(xù)可求調(diào)式移旬液器在作使用完圖畢后應(yīng)膜置于以認液器架蜻上，