機(jī)能學(xué)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)2021/5/91

胰島素靜脈注射對正常家兔的降血糖作用

2021/5/92立項(xiàng)背景：

1、胰島素于1921年由加拿大人班廷和貝斯特首先發(fā)現(xiàn)，是一種蛋白質(zhì)激素，由胰臟內(nèi)的胰島β細(xì)胞分泌。胰島素參與調(diào)節(jié)糖代謝，控制血糖平衡，應(yīng)用于臨床數(shù)十年，使過去不治的糖尿病患者得到挽救。

2、胰島素主要作用在肝臟、肌肉及脂肪組織，控制著蛋白質(zhì)、糖、脂肪三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝和貯存。(1)對糖代謝的影響：能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成，即使血糖的去路增加而來源減少，于是血糖降低。(2)對脂肪代謝的影響：促進(jìn)脂肪的合成和貯存，抑制脂肪的分解。糖尿病時(shí)糖代謝障礙，脂肪大量動(dòng)員，產(chǎn)生大量游離脂肪酸在肝臟氧化至乙酰輔酶A，然后變?yōu)橥w，若酮體產(chǎn)生過多則出現(xiàn)酮血癥。胰島素能抑制脂肪分解，并促進(jìn)糖的利用，從而抑制酮體產(chǎn)生，糾正酮血癥。2021/5/93(3)對蛋白質(zhì)代謝的影響。促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，阻止蛋白質(zhì)的分解。(4)胰島素可促進(jìn)鉀離子和鎂離子穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；可促進(jìn)脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。

3、胰島素可用于治療各型胰島素缺乏的糖尿病。主要包括以下幾點(diǎn)：（1）一型糖尿?。阂葝u素是目前治療一型糖尿病唯一有效的藥物，不論有無急性和慢性并發(fā)癥，均須終生胰島素替代治療，不可突然終止。（2）二型糖尿?。和ㄟ^控制飲食、體育鍛煉和口服降糖藥治療都不能取得良好療效的2型糖尿病患者。2021/5/94（3）出現(xiàn)并發(fā)癥，如增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變、嚴(yán)重神經(jīng)病變、糖尿病腎病、心臟病變、嚴(yán)重的皮膚病變及肝硬化、肝炎等的糖尿病患者。（4）出現(xiàn)酮癥酸中毒、糖尿病高滲性昏迷和乳酸性酸中毒等各種糖尿病急性或慢性并發(fā)癥的患者。（5）糖尿病合并重癥感染、消耗性疾病、急性心肌梗死、高熱、妊娠、分娩、創(chuàng)傷及接受大型手術(shù)治療等的糖尿病患者。（6）因全胰腺切除而引起的繼發(fā)性糖尿病的患者。（7）由于胰島素能促進(jìn)鉀離子進(jìn)入細(xì)胞，使血液中鉀離子濃度降低而細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度升高，故而可以用于治療高鉀血癥和心肌梗死早期及預(yù)防心肌病變時(shí)引起的心律失常2021/5/95實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康家兔15只，體重2.0~2.5kg,，雌雄不限。主要儀器：哺乳動(dòng)物手術(shù)器械一套，RGZ-10型嬰兒秤，兔手術(shù)臺(tái)，試管架，離心機(jī)，722N分光光度計(jì)，試管4支，離心管2支，洗耳球，注射器（5ml、10ml各一支），動(dòng)脈夾，動(dòng)脈插管，紗布，10ml移液管，縛腿帶5根，絲線，廢液缸。主要試劑和藥品：胰島素（1ml胰島素+52ml生理鹽水），0.13%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，蒸餾水，10%三氯醋酸，10%三氯化鐵，10g/L肝素鈉溶液，250g／L的烏拉坦溶液。2021/5/96研究方法：

把15只家兔分別編號(hào)為1～15號(hào)，均按以下實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用統(tǒng)計(jì)表記錄注射胰島素前后家兔血糖濃度變化，并作假設(shè)檢驗(yàn)。2021/5/97實(shí)驗(yàn)方法：1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備將2支離心管編號(hào)為1~2號(hào)及四支試管分別編號(hào)為1~4號(hào)，2只離心管和3、4號(hào)試管分別加入10%三氯醋酸7ml，3號(hào)、4號(hào)離心管分別加蒸餾水及0.13%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液2ml，將注射器和針頭用肝素潤濕。2、標(biāo)本采集家兔實(shí)驗(yàn)前12h禁食。稱重家兔并記錄，以250g／L烏拉坦于（4ml／kg）耳緣靜脈注射麻醉，仰臥位固定于兔臺(tái)。然后行頸總動(dòng)脈插管術(shù)。首先，注射前取血：從近心端開始，第1ml棄去不用，再取2ml血放入1號(hào)離心管中，用玻璃棒攪勻。隨即自耳緣靜脈注射胰島素：以劑量為每千克體重0.75ml注射胰島素。最后，注射后取血：注射胰島素1h后取血2ml于2號(hào)離心管，方法同第一步。（3000轉(zhuǎn)每分，離心5分鐘）。3、制備血漿將離心后的上清液分別倒入1、2號(hào)試管中，然后定量1~4號(hào)試管取液6ml，分別加入10%三氯化鐵12滴，五分鐘后在波長為620nm下比色（3號(hào)管調(diào)“0”，讀取1、2、4號(hào)試管比色值。），并作好記錄2021/5/98實(shí)驗(yàn)流程圖：家兔的稱重，麻醉固定頸動(dòng)脈插管取血2ml于1號(hào)離心管，注意第1ml棄去耳緣靜脈注射胰島素取血2ml于2號(hào)離心管，方法同上進(jìn)行離心（3000r／min,5min）上清液到入對應(yīng)試管，且4只試管均定量為6ml,分別加入三氯化鐵12滴比色2021/5/99表1家兔血糖測定（ml）

試劑離心管1離心管2空白管3標(biāo)準(zhǔn)管4三氯醋酸7.07.07.07.0葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液———2.0蒸餾水——2.0—注射前兔血2.0———注射后兔血—2.0——取離心上清液于試管定量6.06.06.06.0三氯化鐵（滴）121212122021/5/910觀察指標(biāo)1、在注射胰島素后觀察家兔是否有口唇發(fā)紺、煩躁不安、呼吸急促等低血糖休克前癥狀；2、試管中滴入血液后的顏色變化；3、注射胰島素前后的血糖濃度變化。預(yù)期結(jié)果注射胰島素后家兔血糖濃度較注射前低。2021/5/911數(shù)據(jù)的收集及處理方法表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果管號(hào)（g／100ml）光密度（X）血糖濃度測定管1X1C1測定管2X2C2標(biāo)準(zhǔn)管4X40.132021/5/912處理方法：K=C4/X4C1=KX1C2=KX2

注：C4為標(biāo)準(zhǔn)管的血糖濃度0.13g/100ml；X4為標(biāo)準(zhǔn)管的比色值.C1為未注射胰島素時(shí)的血糖濃度；X1為測定管1的比色值.C2為注射胰島素后的血糖濃度；X2為測定管2的比色值。2021/5/913表3注射胰島素前后家兔血糖濃度變化編號(hào)注射前血糖濃度注射后血糖濃度差值dd的平方12345……14152021/5/914統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)

利用配對設(shè)計(jì)資料的t檢驗(yàn)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)其有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2021/5/915注意事項(xiàng)1、用藥濃度和劑量要求準(zhǔn)確，以免效果不佳。2、所用藥品不要污染，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。注射器在注射藥品之前，務(wù)必沖洗干凈。3、注意家兔的取血，第1ml棄去不用。取血時(shí)要先用1g∕ml肝素潤濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液凝固。4、取上清液時(shí)，要先將上清液到入編號(hào)相對應(yīng)的試管中，再吸取所需的毫升數(shù)，以免吸入沉淀，注意試管應(yīng)對號(hào)使用。2021/5/916參考文獻(xiàn)[1]王志珍.

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