淺論冠心病合并2型糖尿病患者血清MMP【摘要】目的：探討外周靜脈血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平與冠心病(CHD)合并2型糖尿病(T2DM)的關(guān)系并評(píng)價(jià)其臨床意義。方法：選取CHD合并T2DM患者31例，單純CHD患者50例，選擇門(mén)診體檢者30例為正常對(duì)照組。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清MMP-9，TIMP-1，用免疫散射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP的表達(dá)情況。結(jié)果：CHD合并T2DM組血清MMP-9的濃度(M=ng/mL)顯著高于CHD組(M=ng/mL)及對(duì)照組[(±)ng/mL](均)。CHD合并T2DM組血清TIMP-1的濃度[(±)ng/mL]低于對(duì)照組[(±)ng/mL]()。CHD合并T2DM組血清hs-CRP的濃度(M=mg/L)明顯高于CHD組(M=mg/L)及對(duì)照組[(±)mg/L](均)。CHD合并T2DM組患者血清MMP-9，TIMP-1與hs-CRP的濃度呈正相關(guān)。結(jié)論：聯(lián)合檢測(cè)血清MMP-9、TIMP-1與hs-CRP可作為一種更為有效的預(yù)測(cè)糖尿病冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的臨床指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】基質(zhì)金屬蛋白酶;基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑;高敏C反應(yīng)蛋白;冠心病;糖尿病，2型

Abstract:Objective:Toexploretheeffectofmatrixmetalloproteinase-9(MMP-9)，tissueinhibitorofmetalloproteinase-1(TIMP-1)andhighsensitiveC-reactiveprotein(hs-CRP)incoronaryheartdisease(CHD)withtype2diabetesmellitus(T2DM).Methods:ThirtyoneCHDwithT2DMand50patienswithCHDwerechosen;and30healthyvolunteersservedascontrolgroup.MMP-9andTIMP-1inserumweremeasuredwithELISA，hs-CRPinserumwasmeasuredbyimmunoturbidimetricmethod.Results:ThelevelofMMP-9inCHDwithT2DM(M=ng/mL)wassignificantlyhigherthanthatofCHDgroup(M=ng/mL)()andthecontrolgroup[(±)ng/mL]().ThelevelofTIMP-1inCHDwithT2DM[(±)ng/mL]wassignificantlylowerthanthatofcontrolgroup[(±)ng/mL]().Thelevelofhs-CRPinCHDwithT2DM(M=mg/L)wassignificantlyhigherthanthatofCHDgroup(M=mg/L)(P)andthatofthecontrolgroup[(±)mg/L]().MMP-9andTIMP-1weresignificantlyrelatedwithhs-CRPinCHDwithT2DM[(r=，)(r=，)].Conclusion:CombineddetectionofserumMMP-9，TIMP-1andhs-CRPcanbeusedaseffectiveclinicalparametersforecastingdiabetesrelatedcoronaryatherosclerosis.

Keywords:matrixmetalloproteinase(MMP);tissueinhibitorofmetalloproteinase(TIMP)highsensitiveC-reactiveprotein(hs-CRP);coronaryheartdiseas(CHD);type2diabetesmellitus(T2DM)

糖尿病(diabetesmellitus，DM)是一種以血糖代謝紊亂為特點(diǎn)的常見(jiàn)慢性疾病。糖尿病是冠心病(CHD)的一個(gè)非常重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與不合并糖尿病患者相比，合并2型糖尿病的冠心病患者，冠脈狹窄程度、多支病變發(fā)生率及心功能損害程度明顯加重[1]。如何識(shí)別并盡早進(jìn)行干預(yù)越來(lái)越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本研究通過(guò)檢測(cè)冠心病合并2型糖尿病患者的血清MMP-9，TIMP-1及hs-CRP水平的變化，探討其臨床意義。

1資料和方法

研究對(duì)象所有實(shí)驗(yàn)組入選對(duì)象均為收住本院內(nèi)分泌科、心內(nèi)科并經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的冠心病患者。CHD合并T2DM組31例，其中男19例，女12例，年齡(±)歲;單純CHD組50例，其中男31例，女19例，年齡(±)歲;正常對(duì)照組30例，男13例，女17例，年齡(±)歲，為我院同期門(mén)診健康體檢者，否認(rèn)糖尿病及心血管病史，經(jīng)體格檢查及實(shí)驗(yàn)室檢查健康，與實(shí)驗(yàn)組年齡、社會(huì)背景相匹配的人群。

排除有下列情況之一者：急、慢性炎癥性疾病、惡性腫瘤、酮癥酸中毒等糖尿病急性并發(fā)癥、心源性休克、心肌炎或心力衰竭、近期重大外傷或手術(shù)、自身免疫性疾病、嚴(yán)重肝腎疾病、嚴(yán)重的全身其他系統(tǒng)疾病、近期服用抗炎藥、一個(gè)月內(nèi)使用過(guò)胰島素增敏劑等。

檢測(cè)指標(biāo)清晨空腹采肘靜脈血5mL，2h內(nèi)離心(3000r/min，10min)取得血清，分管置于-70°C冰箱中待用。用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清MMP-9，TIMP-1的水平，試劑盒購(gòu)自晶美生物工程有限公司，由美國(guó)R&Dsystems公司生產(chǎn)。用免疫散射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP的水平，試劑采用美國(guó)Beckman公司配套試劑。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法偏態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)表示，正態(tài)分布且方差齊性，用單因素方差分析，兩兩比較用LSD;方差不齊和(或)非正態(tài)分布，用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩兩比較用Nemenyi法。相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)。

2結(jié)果

各組一般臨床資料的比較各實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組在平均年齡、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、甘油三酯低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、白細(xì)胞、尿酸、肌酐等相關(guān)危險(xiǎn)因素之間差異均無(wú)顯著性()。

3組患者血清MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP-1，hs-CRP的比較①血清MMP-9的測(cè)定結(jié)果：CHD合并T2DM組血清MMP-9的濃度顯著高于CHD組及對(duì)照組。②血清TIMP-1的測(cè)定結(jié)果：CHD合并T2DM組血清TIMP-1的濃度低于對(duì)照組，與CHD組比較差異無(wú)顯著性。③血清MMP-9/TIMP-1比值的結(jié)果：CHD合并T2DM組血清MMP-9/TIMP-1比值高于CHD組及對(duì)照組。④血清hs-CRP水平的測(cè)定結(jié)果：CHD合并T2DM組血清hs-CRP的濃度明顯高于CHD組及對(duì)照組。見(jiàn)表1。

CHD合并T2DM組MMP-9，TIMP-1與hs-CRP的相關(guān)性分析CHD合并T2DM組患者血清MMP-9，TIMP-1與hs-CRP呈正相關(guān)[(r=，P)(r=，P)]。

3討論

MMP-9及其組織抑制劑TIMP-1與糖尿病大血管病變基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetallopro-teinase，MMPs)是一組具有許多共同生化性質(zhì)的參與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellulatrix，ECM)降解的一個(gè)Zn2+依賴(lài)性蛋白酶家族。T2DM的廣泛代謝異?？梢鹧芑啄さ慕Y(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，從而使其降解與重構(gòu)機(jī)制失常，在這些生理病理過(guò)程中，ECM作為血管壁的主要成分發(fā)揮重要作用。因此，除了通常所說(shuō)的遺傳和生活方式等因素外，糖尿病大血管病變的發(fā)生和發(fā)展還與眾多細(xì)胞因子和酶活性有關(guān)，其中MMPs及其組織抑制因子(tissuesinhibitorofmetallopro-teinases，TIMPs)在細(xì)胞外基質(zhì)代謝中起重要作用。MMP-9作為基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員，可降解基底膜膠原，是中膜平滑肌細(xì)胞增生遷移、穿過(guò)內(nèi)膜彈力層及基底膜屏障的必需物質(zhì)，在內(nèi)膜損傷的反應(yīng)及動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用。TIMP-1與MMP-9形成酶原復(fù)合物而抑制MMP-9活性，在生理狀態(tài)下TIMPs與MMPs共同作用維持動(dòng)態(tài)平衡，有助于ECM合成與降解相對(duì)平衡和ECM成分相對(duì)穩(wěn)定。本研究顯示冠心病合并2型糖尿病組血清MMP-9的濃度(M=ng/mL)顯著高于單純冠心病組(M=ng/mL)及對(duì)照組[(±)ng/mL](均)?？梢?jiàn)糖尿病患者動(dòng)脈粥樣斑塊較非糖尿病者更不穩(wěn)定，2型糖尿病合并AS病變者M(jìn)MP-9水平較單純AS者明顯升高，與文獻(xiàn)[2-3]報(bào)道相同。因此，MMP-9可能是一種可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展和動(dòng)搖不穩(wěn)定斑塊的因子，糖尿病合并AS者存在更高的MMP-9，其動(dòng)脈粥樣斑塊較非糖尿病者更不穩(wěn)定，發(fā)生嚴(yán)重心腦血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)更高。本研究顯示冠心病合并2型糖尿病組血清TIMP-1的濃度[(±)ng/mL]低于對(duì)照組[(±)ng/mL]()，而與單純冠心病組[(±)ng/mL]比較差異無(wú)顯著性()，與Mclennan等報(bào)道冠脈血管組織的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1表達(dá)和活性下降一致。本研究顯示冠心病合并2型糖尿病組血清MMP-9/TIMP-1比值(M=)高于單純冠心病組(±)()及對(duì)照組(±)()，與文獻(xiàn)報(bào)道相同。TIMPs與MMPs相互作用構(gòu)成動(dòng)態(tài)平衡，維持正常ECM的降解與合成，在某些外在觸發(fā)因素作用下MMPs的抑制性調(diào)控喪失，ECM降解增加。所以，MMP-9/TIMP-1可能是決定ECM降解的主要因素：其比值越大，ECM降解越多;比值越小，ECM降解越少。MMP-9與TIMP-1的失衡造成MMP-9的表達(dá)及活性增加從而促進(jìn)ECM的降解和斑塊的破裂，而造成這種比例失衡的確切機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

hs-CRP與糖尿病大血管病變C反應(yīng)蛋白是機(jī)體組織受到各種損傷或炎性反應(yīng)刺激后主要由肝臟產(chǎn)生的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。很多學(xué)者認(rèn)為免疫炎性反應(yīng)在糖尿病和冠心病中扮演著非常重要的角色，hs-CRP作為炎性反應(yīng)的一個(gè)重要指標(biāo)，在糖尿病及冠心病的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用。本研究結(jié)果顯示，冠心病合并2型糖尿病組血清hs-CRP的濃度(M=mg/L)明顯高于單純冠心病組(M=mg/L)及對(duì)照組[(±)mg/L](均)。這提示不管是單獨(dú)患冠心病還是冠心病合并2型糖尿病都有不同程度的慢性炎癥的發(fā)生，且冠心病合并2型糖尿病患者慢性炎癥反應(yīng)的程度明顯比單純冠心病患者更為嚴(yán)重，與文獻(xiàn)[7-8]報(bào)道一致。

本實(shí)驗(yàn)相關(guān)分析顯示：冠心病合并2型糖尿病組患者血清MMP-9，TIMP-1與hs-CRP呈正相關(guān)[(r=，P)(r=，P)]，表明糖尿病患者血管斑塊病變的炎癥反應(yīng)與血管細(xì)胞外基質(zhì)的降解、MMPs和TIMPs之間的失平衡、斑塊穩(wěn)定與否有著必然的聯(lián)系。提示MMP-9在冠心病合并2型糖尿病患者中升高可能是由于斑塊的炎癥反應(yīng)，巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞分泌MMP-9增加，釋放入血，從而導(dǎo)致血漿中MMP-9的顯著升高。同時(shí)MMP-9作為炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)者，與IL-8及IL-1等細(xì)胞因子之間形成正反饋調(diào)節(jié)加劇炎癥反應(yīng)。本研究測(cè)定的是單點(diǎn)時(shí)間的樣本含量，未進(jìn)行多時(shí)間點(diǎn)的樣本含量的追蹤觀察，尚待進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，炎癥是導(dǎo)致糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的主要因素，作為炎癥的下游產(chǎn)物出現(xiàn)的MMP-9在冠心病合并糖尿病中的高表達(dá)及MMP-9與TIMP-1的比例失衡進(jìn)一步促使糖尿病大血管病變的發(fā)生、發(fā)展。血清MMP-9，TIMP-1與hs-CRP水平相關(guān)，提示多種炎癥因子相互作用參與了動(dòng)脈粥樣硬化的形成及發(fā)病過(guò)程。聯(lián)合檢測(cè)血清MMP-9，TIMP-1與hs-CRP可作為一種更為有效的預(yù)測(cè)糖尿病冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的臨床指標(biāo)。

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