免疫層析快速診斷技術(shù)

層析法技術(shù)優(yōu)勢(shì):簡(jiǎn)單\現(xiàn)場(chǎng)\快速1.打開包裝取出試紙條2.直接插入待測(cè)樣品中3.目測(cè)讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）與常規(guī)診斷方法相比

優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)快速：全部檢測(cè)過程僅需3-10分鐘。簡(jiǎn)便：不需其它任何儀器設(shè)備，操作也極其簡(jiǎn)單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時(shí)隨地進(jìn)行。廉價(jià)：?jiǎn)蝹€(gè)測(cè)試條成本極低

可單份檢測(cè)：對(duì)標(biāo)本既能成批檢測(cè)，又可單份檢測(cè)，可立刻拿到結(jié)果，不必等待。

穩(wěn)定性好：金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長期保存。

檢測(cè)標(biāo)本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種檢查定量問題靈敏度問題技術(shù)應(yīng)用類別應(yīng)用領(lǐng)域檢測(cè)的物質(zhì)人類醫(yī)學(xué)各級(jí)醫(yī)院,血站,CDC,防疫站,診斷中心；家庭自檢；商檢系統(tǒng)；邊檢口岸；公安系統(tǒng).傳染?。ㄒ腋挝屙?xiàng),HIV,SARS等）標(biāo)志物（AFP、肌鈣蛋白、糞便血紅蛋白等）女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)毒品（嗎啡,K粉,搖頭丸,冰毒）農(nóng)牧業(yè)畜牧獸醫(yī)站,商檢系統(tǒng),邊檢口岸,農(nóng)牧類院系和研究所傳染?。ㄇ萘鞲?獸瘟疫等）環(huán)境環(huán)保監(jiān)測(cè)部門,研究機(jī)構(gòu)有害物質(zhì)超標(biāo)食品安全食品安全檢測(cè)中心,各監(jiān)管部門農(nóng)獸藥殘留（磺胺類、瘦肉精等）,大腸桿菌,黃曲霉素試紙條組成結(jié)構(gòu)測(cè)試線（T線）控制線（C線）膠體金墊吸水濾紙樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板有4個(gè)組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑵、玻璃纖維膜（膠體金墊）。膜上吸附著干燥的金標(biāo)抗體（流動(dòng)帶）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包被著抗原或抗體條帶和能與標(biāo)記物直接起反應(yīng)的質(zhì)控物條帶（檢測(cè)帶）。⑷、吸水紙。以上各組份首尾互相銜接。

基本原理是將已知的特異性抗原或抗體固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測(cè)帶，在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動(dòng)至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動(dòng)至硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測(cè)區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒有待測(cè)抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。在硝酸纖維素膜檢測(cè)區(qū)附近一般再固定上針對(duì)金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無論樣品中有無待測(cè)物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無，則檢測(cè)失敗。整個(gè)過程一般在15分鐘內(nèi)完成，操作簡(jiǎn)單、快速，且不需任何儀器。免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹

膠體金免疫層析法檢測(cè)流腦抗體（間接法）

膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG，樣品中的流腦抗體與膠體金標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合，沿硝酸纖維素膜移動(dòng)，在包被有流腦抗原結(jié)合，出現(xiàn)紅色反應(yīng)線。

免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹

（雙抗體夾心）（以HCG檢測(cè)為例）HCG-β亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標(biāo)HCG-α亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹

（競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)）（以嗎啡檢測(cè)為例）嗎啡偶聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗嗎啡單克隆抗體固定于膜上測(cè)試區(qū)。通過嗎啡偶聯(lián)物和尿液中的嗎啡競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)單克隆抗體，最小檢出量300ng/ml。

結(jié)果判定：

陽性（+）：?jiǎn)岱?00ng/ml以上，質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，測(cè)試區(qū)內(nèi)不出現(xiàn)紫紅色條帶。嗎啡濃度高于300ng/ml時(shí)，膠體金抗體與嗎啡全部結(jié)合，從而不與嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。陰性（-）：?jiǎn)岱仍?00ng/ml以下。出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條在測(cè)試區(qū)內(nèi)，另一條在質(zhì)控區(qū)內(nèi)。嗎啡濃度低于300ng/ml時(shí)，膠體金抗體不能與嗎啡全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過程中會(huì)被固定在膜上的嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合，測(cè)試區(qū)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。無效：質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞。

抗體Antibody來源差異:鼠抗,兔抗和羊抗種類差異:單抗,多抗?jié)舛?濃縮溶解液:不含鹽抗原抗體生物原料抗原Antigen全病毒抗原重組抗原

膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。容器硅化處理：玻璃表面少量的污染會(huì)干擾膠體金顆粒的生成，一切玻璃容器應(yīng)絕對(duì)清潔，用前經(jīng)過酸洗、硅化。將玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中１分鐘，室溫干燥后蒸餾水沖洗，再干燥備用。膠體金的制備

膠體金的制備

枸櫞酸三鈉還原法15nm、18nm～30nm、40nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據(jù)需要迅速加入1％枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、41nm和50nm顏色與顆粒的關(guān)系.最佳標(biāo)記顆粒大小40nm.1％檸檬酸三鈉ml0.300.450.701.001.502.00

金溶膠顏色藍(lán)灰紫灰紫紅紅橙紅橙

吸收峰(nm)220240535525522518

徑粒(nm)14797.571.54024.515

膠體金的鑒定1.肉眼觀察：在日光下仔細(xì)觀察膠體金顏色，可以大致估計(jì)金顆粒大小。同時(shí)良好的膠體金應(yīng)該是清澈透明的，若渾濁或有漂浮物提示有較多的凝集顆粒。2.分光光度計(jì)掃描吸收峰時(shí)光波長來估計(jì)金顆粒的大小。3.電鏡可見精確測(cè)定金顆粒的大小。免疫縮慧膠體拴金的枝制備膠體讀金在弱餅堿環(huán)品境下掘帶負(fù)凱電荷葛，可桐與蛋匯白質(zhì)半分子冒的正杰電荷先基團(tuán)亦形成董牢固族的結(jié)團(tuán)合，遮由于婆這種醬結(jié)合與是靜剪電結(jié)蚊合，滿所以燒不影茅響蛋毫白質(zhì)海的生炕物特凝性。蛋白掃質(zhì)的其預(yù)處廁理:1.蛋白要質(zhì)應(yīng)街先對(duì)末低離歲子強(qiáng)流度的家水透推析，為去除霞鹽類臺(tái)成份貌。鹽協(xié)類成展份能估影響蛇膠體度金對(duì)暑蛋白尋質(zhì)的真吸附物，并崖可使軍膠體看金聚遣沉，給應(yīng)避授免磷痛酸根壟離子熱和硼德酸根歇離子黑的存藝在。2.用微痰孔濾栗膜或絕超速究離心烤除去享蛋白莊質(zhì)溶甩液中吼的細(xì)岡小微湖粒。3.膠體由金對(duì)堂蛋白乓的吸首附主中要取貼決于pH值，在配接近粱蛋白紙質(zhì)的等電喬點(diǎn)或甲略偏舅堿的條切件下蒼，二手者容秩易形燥成牢籌固的昌結(jié)合肥物。片如果茅膠體恥金的pH值低郵于蛋好白質(zhì)督的等央電點(diǎn)破時(shí)，前則會(huì)誕聚集隊(duì)而失催去結(jié)期合能刃力。蛋白墓質(zhì)最勸適用奧量測(cè)笑定:將待走標(biāo)記腐的蛋朋白質(zhì)幟（鼠秀抗人Ig守G）儲(chǔ)逢存液增作系罩列稀自釋后扯，分驗(yàn)別取0.衡1m竟l加到1m捧l膠體訴金溶控液中出，另環(huán)設(shè)一柏管不勒加蛋渠白質(zhì)產(chǎn)的對(duì)白照管判，5分鐘株后加暫入0.猶1m氣l緣瑞10％Na咬Cl溶液奧，混喬勻后聾靜置2小時(shí)榜。1234576膠體善金(ml窄)辦1請(qǐng)1坑1鐘1孕1丹1蔥1蛋白酸質(zhì)(ug)成0嘉10啊1錢5鍵2袖0尚2霉5嚴(yán)3爛0沖3控510悅%N步aC信l厭0.面10.濁10.財(cái)10.矛10.綢10.紋10.悲1結(jié)果郊判斷倉:評(píng)對(duì)照家管或本加入約蛋白格量不千足，油膠體陣金出叫現(xiàn)由勤紅變課藍(lán)的叉凝聚眾現(xiàn)象動(dòng)；加商入蛋率白質(zhì)詳量達(dá)金到或?qū)３^忍穩(wěn)定左量，停則膠萬體金惕保持片紅色擦不變不穩(wěn)悔定的咬金溶印膠將解發(fā)生撫聚沉雞，對(duì)礎(chǔ)照管往（未這加蛋名白質(zhì)哀）和抄加入寸蛋白趕質(zhì)的始量不壞足以貓穩(wěn)定避膠體貍金的渣各管蜘，均徒呈現(xiàn)冶出由頃紅變內(nèi)藍(lán)的壁聚沉來現(xiàn)象牲；而斤加入鏡蛋白賄量達(dá)毯到或昏超過畢最低秒穩(wěn)定甩量的擠各管宜仍保雅持紅例色不療變。以穩(wěn)疤定1m陳l膠體司金溶蜘液紅痰色不礦變的刑最低降蛋白黑質(zhì)用武量，反即為遮該標(biāo)割記蛋奴白質(zhì)爽的最扮低用焰量，在紋實(shí)際刮工作逐中，陜可適耕當(dāng)增漏加10％，藥在此迎情況岸下蛋景白質(zhì)嫂分子旗在金圈顆粒鳳表面湖的吸咽附量破最大揀。膠體斑金與仔蛋白肚質(zhì)偶彼聯(lián)后是，加投入穩(wěn)穴定劑坐，以屯避免增產(chǎn)生鑒凝集刷。一掃般選緒用PE免G（分彼子量逢為20移00斯0）和提牛血裙清白筍蛋白找作穩(wěn)午定劑極。加玻入的拔量：5％BS丈A使溶斃液終子濃度饑為1%；1%聚乙燈二醇勝加至廉總?cè)軙骋旱?/遣10。①用0.皂1m草ol捆/L竊K2CO3或0.學(xué)1m透ol盒/LHC臣l調(diào)節(jié)其金溶揚(yáng)膠至肥所需pH。堅(jiān)②于10菠0m件l金溶戚膠中警加入考最佳材標(biāo)記位量的斯蛋白效質(zhì)溶驚液攪駁拌2～3分鐘濕。耐③加肺入5m耳l1肉%P臨EG礎(chǔ)20遲00杰0溶液場(chǎng)。專④于10斬00寫0～10化00船00表g離心30～60分鐘碗小心房誠吸去孩上清智液（督切忌熱傾倒枯）。錫⑤場(chǎng)將沉妹淀懸歪浮于蝦一定悶體積勾含0.督2～0.核5m堡g/斗ml撈P清EG葬20塔00篩0的緩冶沖液澤中，里離心垂沉淀啦后，襲再用吧同一暫緩沖薪液恢茄復(fù)，恨濃度膛以A5拐40失nm阿=1庭.5左右親為宜遲，防筆腐置4℃保存頌。怎⑥包犯被后義的金皇溶膠酒也可呀濃縮辰后于Se嘉ph包ad仰exG-楊20護(hù)0柱進(jìn)彼行凝彼膠層鼓析分昆離純公化，碑以含0.殼1%屆BS淋A的緩級(jí)沖溶房誠液洗俗脫。你通常表用Ig應(yīng)G包被今的金棄溶膠立洗脫場(chǎng)液pH為8.壞2。舟以上蕩操作賊中應(yīng)勿注意侍，一拋切溶價(jià)液中許不應(yīng)除含雜氧質(zhì)微瞇粒，燥可用剩高速蒸離心皆或微艦孔濾瓜膜預(yù)坡處理傷。膠體甩金蛋遼白結(jié)密合物塔的質(zhì)姿量鑒陶定平均圣直徑伶的測(cè)鈴量：用苗支持念膜的派鎳網(wǎng)擠（銅武網(wǎng)也級(jí)可）收蘸取倚金標(biāo)偵蛋白差試劑隨，自骨然干娃燥后敵直接絨在透改射電苦鏡下楊觀察界?；蛳饔么追怂徕櫡饛?fù)染放后觀辨察。騙計(jì)算10功0個(gè)金赴顆粒資的平析均直塞徑。OD舊52白0n病m值測(cè)鑒定：用PB他S液（振含1%灰BS要A）將黎膠體瘡金蛋闖白試么劑作1:疼20稀釋這，OD炸52慎0＝0.碌25左右偉。一農(nóng)般應(yīng)象用液趙的OD響52焦0應(yīng)為0.波2～0.離4。金標(biāo)估記蛋艱白的險(xiǎn)特異桿性與租敏感卵性測(cè)畢定：采窗用微暗孔濾汁膜免搭疫金體銀染榨色法鵲。將有可溶岸性抗杰原（響或抗霧體）悔吸附剝于載刪體上矛（濾判紙、顫硝酸們纖維折膜、牧微孔正濾膜橋），待用膠豪體金唉標(biāo)記拾的抗長體（嶼或抗嫩原）亭以直陶接或螺間接攪染色拴法并探經(jīng)銀遷顯影窄來檢補(bǔ)測(cè)相驢應(yīng)的宿抗原塵或抗葬體，咸對(duì)金智標(biāo)記諷蛋白潤的特交異性機(jī)和敏蹦感性舒進(jìn)行尚鑒定狐。膠體燙金蛋叛白結(jié)熱合物頃玻璃駱纖維字素膜沾制備膠體失金標(biāo)前記的沖鼠抗嚴(yán)人Ig毫G放入懇玻璃萌纖維譜素膜耕浸泡10分鐘逮，取認(rèn)出至37度烤獨(dú)箱中榜烤干露，熱劑合封桐口，秤置4攝氏豎度冰昂箱備宇用。(實(shí)驗(yàn)辰階段摟）用噴吸點(diǎn)儀弊將膠臭體金留標(biāo)記伍的鼠甚抗人Ig焦G噴在祝玻璃版纖維密素膜攪上,真空勤干燥2隊(duì)h。菊（生料產(chǎn)階四段）選擇NC膜NC膜的奮選擇爬速(?披??秒/4傳cm腎)對(duì)靈傻敏度偏的影鑄響通過引同一T線噴麥點(diǎn)位蕩置時(shí),金溶沃液通診過的衣速度夾是快桿速膜>慢速濫膜.那么歐通過鳥速度話越快僵和包徒被在T線的密物質(zhì)川反應(yīng)歌時(shí)間竹也就項(xiàng)越短,讀數(shù)寇快,那么扮靈敏囑度也鍵就越構(gòu)低.反之,反應(yīng)說時(shí)間溜長,讀數(shù)淋慢,也就窄靈敏芝度高予。同時(shí)般還有脂一個(gè)貓問題趴是,反應(yīng)忍時(shí)間俱越長,發(fā)生答非特吸異性召結(jié)合竿的可襯能性條就越務(wù)大,所以饅過長配時(shí)間豎的反勁應(yīng)不閑一定件就能四夠真丹正的爹提升君靈敏凈度.。所們以這底里就絞有一裝個(gè)讀喉數(shù)時(shí)悲間/反應(yīng)綢靈敏換度/非特制異性獨(dú)結(jié)合府的均胡衡.不同睬膜廠林家的豆產(chǎn)品(W熊ha慎tm罪an展,M葡il冒l(fā)i截po堅(jiān)re符,S膏ar逆to歸ri桿us)大致漠為:辮13后5s和18寺0s抗原裙、抗亂體包妄被固富相NC膜的罷制備包被蒜流腦傷抗原昨濃度趕篩選秧（T線）明抗模原用PB缺S梯度舌稀釋,釋后嚴(yán)用1μ慢l移液鳳器點(diǎn)炎在NC膜上,3拐7卸℃干燥1汽h備用犯。包被咐抗鼠Ig草G濃度違篩選刺（C線）商抗鼠Ig融G抗體附用PB丸S梯度閥稀釋,釋后胡用1μ卷l移液循器點(diǎn)欲在NC膜上,3藍(lán)7罩℃干燥1胖h備用暢。溶液配噴點(diǎn)(噴點(diǎn)昆演示:B盾IO擾DO五T甚XY染Z系列罪噴點(diǎn)場(chǎng)儀器)C\扮T線溶湯液前判處理:1.過濾,0烤.2宗2u醬m孔徑槳濾膜2.離心1萬轉(zhuǎn)10分鐘C\足T線噴竟點(diǎn)工急藝與拋接觸敲劃點(diǎn)萄工藝頭比較因劃漲膜式垮為軟粒管將況抗體館劃到甘膜表游面,而膜會(huì)本身饅的物挪理性害質(zhì)為播軟脆,劃管怒會(huì)在外其表鏈面留拉下印哀痕.劃痕店容易瞎對(duì)層帖析的金金標(biāo)許復(fù)合壤物形獎(jiǎng)成阻棵力,導(dǎo)致檔假陽躺性。干疤燥干燥陶方法修的比少較37度干林燥４h：顆地粒感盾較強(qiáng)鋼，易榨中間夸白，撓周邊木深;低溫魔真空鉆干燥攔３h：顏潔色均鴿一，亮只是注兩端妙稍淺擱，有漏一定映的柔桶性。試紙董條組乖裝在干勿燥間厲內(nèi)準(zhǔn)寨備好故吸水川濾紙陪、樣因品墊乞、PV串C底板溉，在PV銷C底板涂中央內(nèi)貼上劈燕包被狡好的劈燕硝酸淚纖維漿素膜糊，硝債酸纖教維素伙膜上剛緣粘律