不溶性微粒檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)一、意義不溶性微粒檢查是在可見異物檢查符合規(guī)定后,用以檢查溶液型靜脈用注射劑及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。

獸藥檢測技術(shù)檢查方法包括光阻法和顯微計數(shù)法。當用光阻法測定結(jié)果不符合規(guī)定或試品不適于用光阻法測定時，應采用顯微計數(shù)法，并以顯微計數(shù)法的測定結(jié)果作為判定依據(jù)。二、方法不溶性微粒檢查技術(shù)微粒檢查儀顯微鏡獸藥檢測技術(shù)不溶性微粒檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)三、檢查方法1.分類藥典分別列出了“標示裝量為25mL或25mL以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液”、“標示裝量為25mL以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液”、“靜脈注射用無菌粉末”、“供注射用無菌原料藥”中不溶性微粒檢查方法，后三種檢查過程中僅前處理與第一種略有不同。

不溶性微粒檢查技術(shù)標示裝量為25mL或25mL以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液中不溶性微粒檢查方法如下：除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法抽取或量取供試品溶液25mL，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預處理的濾器（濾膜直徑25mm）中，靜置1min，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查水25mL，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上（必要時，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整），微啟蓋子使濾膜適當干燥后，將平皿閉合，置顯微鏡載物臺上。調(diào)好入射光，放大100倍進行顯微測量，調(diào)節(jié)顯微鏡使濾膜格柵清晰，移動坐標軸，分別檢測有效濾過面積上最長粒徑大于10μm和大于25μm的微粒數(shù)。另取至少兩個供試品，同法測定，計算測定結(jié)果的平均值。獸藥檢測技術(shù)2.要求不溶性微粒檢查技術(shù)標示裝量為100mL或100mL以上的靜脈注射液，除另有規(guī)定外，每1mL中含10μm或10μm以上的微粒數(shù)不得過12粒，含25μm或25以上μm的微粒數(shù)不得過2粒。標示裝量為100mL以下的靜脈注射液、靜脈注射用無菌粉末及注射用濃溶液以及供注射用無菌原料藥，除另有規(guī)定外，每個供試品容器中含10μm及10μm以上的微粒數(shù)不得過3000粒，含25μm或25μm以上的微粒數(shù)不得過300粒。

獸藥檢測技術(shù)3.結(jié)果判定不溶性微粒檢查技術(shù)可見異物檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)一、可見異物定義可見異物是指存在于注射劑、眼用液體制劑中，在規(guī)定條件下目視可以觀測到的不溶性物質(zhì)，其粒徑或長度通常大于50μm。獸藥檢測技術(shù)可見異物檢查有燈檢法和光散射法兩種方法。常用的檢查方法為燈檢法，燈檢法不適用的品種，如用深色透明容器包裝或液體色澤較深的品種可選用光散射法。

二、方法可見異物檢查技術(shù)燈檢法檢查裝置光散射法全自動可見異物檢查儀可見異物檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)獸藥檢測技術(shù)三、燈檢法1.環(huán)境要求2.人員要求

燈檢法在暗室中進行。實驗室檢測時應避免引入可見異物。當制備注射用無菌粉末和無菌原料藥供試品溶液時，或供試品的容器不適于檢査（如透明度不夠、不規(guī)則形狀容器等），需轉(zhuǎn)移至適宜容器中時，均應在100級的潔凈環(huán)境（如層流凈化臺）中進行。檢查人員遠距離和近距離視力測視，均為4.9或4.9以上（矯正后應為5.0或5.0以上），應無色盲?？梢姰愇餀z查技術(shù)用無色透明包裝的無色供試品溶液，檢查時被觀察樣品所在處的光照度為1500lx；用透明塑料容器包裝或用棕色透明容器包裝的供試品溶液或有色溶液，檢查時被觀察樣品所在處的光照度為2000~3000lx；混懸型供試品或乳狀液，檢查時被觀察樣品所在處的光照度約4000lx。獸藥檢測技術(shù)三、燈檢法3.光照度要求可見異物檢查技術(shù)取供試品20支（瓶），除去容器標簽，擦凈容器外壁，必要時將藥液轉(zhuǎn)移至潔凈透明的專用玻璃容器內(nèi)，置供試品于遮光板邊緣處，在明視距離（指供試品至人眼的清晰觀測距離，通常為25cm），分別在黑色和白色背景下，手持供試品頸部輕輕旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)容器使藥液中存在的可見異物懸?。ǖ珣苊猱a(chǎn)生氣泡），立即用目檢視，重復三次，總時限為20s。供試品裝量每支（瓶）在10mL及10mL以下的每次檢查拿取2支（瓶）。

獸藥檢測技術(shù)三、燈檢法4.檢查方法可見異物檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)5.結(jié)果判定劑型結(jié)果判定溶液型靜脈用注射液注射用濃溶液均不得檢出煙霧狀微粒柱，且不得檢出金屬屑、玻璃屑、長度或最大直徑超過2mm纖維和塊狀物等明顯異物。微細可見異物（如點狀物、2mm以下的短纖維和塊狀物等）如有檢出，除另有規(guī)定外，應分別符合右列規(guī)定。均不得檢出明顯可見異物。如檢出微細可見異物的供試品僅有1支（瓶），應另取20支（瓶）同法復試，均不得超過1支（瓶）。溶液型非靜脈用注射液均不得檢出明顯可見異物。如檢出微細可見異物的供試品僅有1瓶（支），應另取20支（瓶）同法復試，初復試的供試品中，檢出微細可見異物的供試品不得超過3支（瓶）。溶液型滴眼劑均不得檢出明顯可見異物。如檢出微細可見異物的供試品僅有1瓶（支），應另取20支（瓶）同法復試，初復試的供試品中，檢出微細可見異物的供試品不得超過4支（瓶）?；鞈倚腿闋钜盒妥⑸湟壕坏脵z出金屬屑、玻璃屑、色塊、纖維和等明顯可見異物?？梢姰愇餀z查技術(shù)注射劑的可見異物檢查技術(shù)

可見異物是指存在于注射劑、眼用液體制劑中，在規(guī)定條件下目視可以觀測到的不溶性物質(zhì)，其粒徑或長度通常大于50μm。獸藥檢測技術(shù)原理注射劑的可見異物檢查技術(shù)（1）儀器

燈檢裝置。（2）試劑

硫酸鎂注射液。獸藥檢測技術(shù)儀器與試劑注射劑的可見異物檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)檢查方法

取供試品20支，擦凈容器外壁并排列整齊，每次檢查拿取2支，手持供試品頸部，置供試品于遮光板邊緣處，分別在黑色和白色背景下，在不產(chǎn)生氣泡的前提下輕輕旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)安瓿瓶，使藥液中存在的可見異物懸浮，距離25cm目視檢查，重復三次，總時限為20s。注射劑的可見異物檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)數(shù)據(jù)記錄與報告樣品名稱：批號：規(guī)格：供試品數(shù)目：光照度：檢查結(jié)果：標準規(guī)定：結(jié)果判斷：檢驗者：復檢者：日期：無菌檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)一、意義無菌檢查法系用于檢查要求無菌的制劑、原料、輔料、器具及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。獸藥檢測技術(shù)無菌檢查應在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)與工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常還需對試驗環(huán)境進行監(jiān)控。二、環(huán)境要求無菌檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。只要供試品性狀允許，應采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢查條件應與驗證的方法相同。三、方法和儀器無菌檢查技術(shù)集菌儀超凈工作臺獸藥檢測技術(shù)無菌檢查技術(shù)高壓蒸汽滅菌柜電熱恒溫干燥箱獸藥檢測技術(shù)無菌檢查技術(shù)培養(yǎng)箱隔水式恒溫培養(yǎng)箱冷藏柜獸藥檢測技術(shù)無菌檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)四、操作步驟1.培養(yǎng)基的配制2.培養(yǎng)基的適用性試驗3.培養(yǎng)基靈敏度檢查4.沖洗液及稀釋液的配制5.方法學驗證6.供試品的無菌檢查（陽性和陰性對照試驗）無菌檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)四、操作步驟操作時，用適宜的消毒液對供試品容器表面進行徹底消毒，如果容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針頭）向容器內(nèi)導入無菌空氣，再按無菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。無菌試驗過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應證明其有效性，且對微生物無毒性。無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。無菌檢查技術(shù)陽性對照應根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品，以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗的菌液制備同方法驗證試驗，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)48~72h應生長良好。陰性對照供試品無菌檢查時，應取相應溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。獸藥檢測技術(shù)無菌檢查技術(shù)四、操作步驟若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判斷供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判斷供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效即生長的微生物非供試品所含。當符合下列至少一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：（1）無菌檢查試驗所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。（2）回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。（3）陰性對照管有菌生長。（4）供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作不當所引起。試驗若經(jīng)確認無效，應重試。重試時，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判斷供試品不符合規(guī)定。獸藥檢測技術(shù)無菌檢查技術(shù)五、結(jié)果判定細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)一、意義細菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。細菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。1EU與1個內(nèi)毒素國際單位相當。

獸藥檢測技術(shù)每批新的鱟試劑用于試驗之前均要進行靈敏度的復核。當進行新獸藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項的品種建立內(nèi)毒素檢查法時，須進行干擾試驗。當鱟試劑、供試品的處方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，須重新進行干擾試驗。二、操作要求細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)細菌內(nèi)毒素檢查有凝膠法和光度測定法兩種方法。供試品檢測時，可使用其中任何一種方法進行試驗。當測定結(jié)果有爭議時，除另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準。三、方法和儀器細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)三、方法和儀器凝膠法是利用鱟試劑與細菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應的原理來檢測或半定量內(nèi)毒素的方法，分為凝膠限量試驗和凝膠半定量試驗。凝膠法細菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU·mL-1的滅菌注射用水。光度測定用的檢查用水，其內(nèi)毒素的含量應小于0.015EU·mL-1。1.凝膠法細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)三、方法和儀器光度測定法包括濁度法和顯色基質(zhì)法。濁度法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法；顯色基質(zhì)法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應過程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團的多少而測定內(nèi)毒素含量的方法。細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)2.光度測定法超凈工作臺獸藥檢測技術(shù)細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)電熱恒溫干燥箱3.儀器細菌內(nèi)毒素檢查專用干式恒溫器獸藥檢測技術(shù)旋渦混合器細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)1.限制L的確定2.確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）3.鱟試劑靈敏度復核試驗4.凝膠法干擾試驗5.正式干擾試驗6.凝膠限量試驗/半定量試驗獸藥檢測技術(shù)四、檢查步驟細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180°，若管內(nèi)形成凝膠，并且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性（＋）；未形成凝膠或形成的凝膠不堅實、變形并從管壁滑脫者為陰性（－）。

獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定1.凝膠限量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)五、結(jié)果判定2.凝膠半定量試驗細菌內(nèi)毒素檢查技術(shù)細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）

細菌內(nèi)毒素檢查法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。細菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位（EU）表示。獸藥檢測技術(shù)原理細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）（1）儀器

分析天平，電熱干燥箱，恒溫水浴箱或適宜的恒溫器，水銀溫度計或酒精溫度計，旋渦混合器，細菌內(nèi)毒素光度測定儀器。（2）試劑

注射用青霉素鈉或其他注射劑，鱟試劑（應具有國家主管部門的批準文號）。獸藥檢測技術(shù)儀器與試劑細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）獸藥檢測技術(shù)檢查方法（1）試驗所用器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素，常用的方法是250℃干烤至少1h，也可用其他適宜的方法，并應確證不干擾細菌內(nèi)毒素的檢查。試驗操作過程應防止微生物的污染。（2）鱟試劑靈敏度復核試驗

每批新的鱟試劑在用于試驗前均要進行靈敏度的復核。細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）獸藥檢測技術(shù)檢查方法

按下表制備溶液A、B、C、D。使用稀釋倍數(shù)為MVD并且已經(jīng)排除干擾的供試品溶液來制備溶液A和B。按鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作。細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）獸藥檢測技術(shù)檢查方法編號內(nèi)毒素濃度/被加入內(nèi)毒素的溶液平行管數(shù)A無/供試品溶液2B2λ/供試品溶液2C2λ/檢查用水2D無/檢查用水2注：A為供試品溶液；B為供試品陽性對照；C為陽性對照；D為陰性對照。細菌內(nèi)毒素檢查（凝膠法）獸藥檢測技術(shù)數(shù)據(jù)記錄與報告樣品名稱：樣品編號：樣品規(guī)格：批號：鱟試劑標示靈敏度（λ）：批號：規(guī)格：生產(chǎn)單位：細菌內(nèi)毒素工作標準品批號：規(guī)格：來源：無熱原水（BET水）批號：來源：檢驗結(jié)果平行管編號ABCD1

2

標準規(guī)定：保溫60min±2min后觀察結(jié)果。若D的平行管均為陰性，B的平行管均為陽性，C的平行管均為陽性，試驗有效。若溶液A的兩個平行管均為陰性，判定供試品溶液符合規(guī)定；若溶液A的兩個平行管均為陽性，判定供試品溶液不符合規(guī)定；若溶液A的兩個平行管一管為陽性，另一管為陰性，需進行復試。復試時，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均為陰性，判定供試品溶液符合規(guī)定；否則，判定供試品溶液不符合規(guī)定。結(jié)果判定：檢驗人：檢驗日期：復核人：復核日期：裝量和裝量差異檢查技術(shù)獸藥檢測技術(shù)一、裝量檢查裝量檢查適用于50mL及50mL以下的單劑量注射液，其目的在于保證單劑量注射液的注射用量不少于標示量，以達到臨床用藥劑量要求。標示裝量為50mL以上的注射液及注射用濃溶液照最低裝量檢查法檢查。最低裝量檢查法適用于固體、半固體或液體制劑。1.要求標示裝量為不大于2mL者取供試品5支，2mL以上至50mL者取供試品3支；開啟時注意避免損失，將內(nèi)容物分別用相應體積的干燥注射器及注射針頭抽凈，然后注入經(jīng)標化的量具內(nèi)（量具大小應使待測體積至少占其額定體積的40%），在室溫下檢視。測定油乳液或混懸液的裝量時，應先加溫搖勻，再用干燥注射器及注射針頭抽凈后，同前法操作，放冷，檢視。每支的裝量均不得少于其標示量。

獸藥檢測技術(shù)裝量和裝量差異檢查技術(shù)2.方法獸藥檢測技術(shù)裝量和裝量差異檢查技術(shù)除制劑通則中規(guī)定檢查重（裝）量差異的制劑外，按下述方法檢查，應符合表6-1中規(guī)定。表6-1最低裝量規(guī)定標示裝量，g（mL）固體、半固體、液體黏稠液體（容量法）平均裝量每個容器裝量不少于標示裝量的平均裝量不少于標示裝量的每個容器裝量不少于標示裝量的≤20不少于標示裝量93%90%85%20<N≤50不少于標示裝量95%95%90%50<N≤500不少于標示裝量97%95%93%＞