碳水化合物聚合物多花黃精花化學(xué)修改多糖的制備和治療皰疹活性從多花黃精花的中性多糖制備了化學(xué)修飾的多糖，包括硫酸，磷酸，羧甲基化，乙?；突茄苌?。這些化合物以紅外光譜，核磁共振和核磁共振光譜為特點(diǎn)。天然和改性P黃精多糖對(duì)單純皰疹病毒（單純皰疹病毒）的治療皰疹活性引起的環(huán)磷酰胺（處長(zhǎng)），然后進(jìn)行細(xì)胞病變（病變）抑制試驗(yàn)。該磷酸化酶衍生物（p-pd）和硫酸化衍生物（s-pd），表現(xiàn)出顯著的抑制活性對(duì)單純皰疹病毒相比天然的，尤其是，磷酸化酶衍生物P-pd）提出更好的抗病毒效力。此外，該磺衍生物（ts-pd）被認(rèn)為是有效的局部放電，和乙酰衍生物（ac-pd）為略低于抗病毒有效，而羧甲基衍生物（炭-鈀）被證明是幾乎無(wú)效。結(jié)果表明，該類(lèi)型的功能組似乎是非常重要的治療皰疹活性多糖。1.介紹多糖是目前已知生物活動(dòng)的范圍廣泛的，包括抗病毒和抗腫瘤作用，變影響免疫系統(tǒng)和抗凝血活性（博恩酒店bemiller，1995；hardena，falshaw，carnachan，kerna，與pricharda，2009；甘乃迪，1989；甘乃迪，1983）。特別的，他抗病毒作用的多糖對(duì)單純皰疹病毒（單純皰疹病毒）已報(bào)告（阿拉德，金斯伯格，和huleihel，2006；Damonte，matulewicz，與櫻花，卡馬克，普約爾語(yǔ)，2004，tuhin高士，與雷，2010；2003；luescher-mattli，普約爾，卡路奇，matulewicz，與語(yǔ)，2007），這些多糖目前正在進(jìn)行的任何臨床或臨床評(píng)價(jià)（復(fù)制，2005；聲和garvey-hague，2007）。與廣泛應(yīng)用阿昔洛韋（無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷）相關(guān)的核苷類(lèi)似物，所有針對(duì)病毒核糖核酸合成，多糖的影響與病毒附著到宿主細(xì)胞表面的結(jié)合病毒包膜糖蛋白（語(yǔ)等，2004；杜阿爾特等人。，2001；neyts等人。，1992；witvrouw和德?克勒克，1997）。與此相反阿昔洛韋，這可能導(dǎo)致一些不良的并發(fā)癥（里奇曼等人。，1987）和誘導(dǎo)出現(xiàn)耐藥病毒（科恩，1991；其中，達(dá)比，境內(nèi)，1989）經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的治療，免疫功能低下患者，多糖具有相對(duì)低的哺乳動(dòng)物毒性和新的抗病毒機(jī)制。因此，發(fā)展的潛力多糖抗病毒藥物將是相當(dāng)大的興趣。多花黃精花一種百合科植物是一種廣泛用于咳嗽，眩暈和肺問(wèn)題的中藥治療。黃精花分離出來(lái)的中性多糖已被報(bào)告證實(shí)有免疫調(diào)節(jié)，抗老化和抗病毒活性（顧，孟，與浦，2003；施，孟，與李，1999），并已牽連被主要活性成分的中藥。該結(jié)構(gòu)的鈀是一個(gè)分支果聚糖核心（2-6）呋喃果糖基殘留每三（2-1）呋喃果糖基殘基和平均聚合度（民主黨）28（劉，劉焉，孟，與他相比，2004）。相對(duì)比其他的治皰疹多糖，如硫酸多糖，帕金森病具有低分子量和無(wú)離子基團(tuán)。結(jié)構(gòu)活性關(guān)系（特區(qū)）的多糖已被提出，這表明抗病毒活性的多糖是強(qiáng)烈依賴(lài)于存在合適的離子基團(tuán)的取代度（德尚）（博恩和bemiller，1995；kulicke，萊托，和希爾金，1997）。此外，一些報(bào)告顯示，多糖的聯(lián)系陰離子特性的分子顯示更強(qiáng)有力的反一單純皰疹病毒活性比中性的（巴巴，史諾克，保韋爾斯，及克勒克，1988；塔拉里克等人，2004）。據(jù)我們所知，沒(méi)有引入離子基團(tuán)，鈀，或抗病毒活性其化學(xué)改性衍生物報(bào)道。明顯的，結(jié)構(gòu)調(diào)整是有利的和必要的提供機(jī)會(huì)獲得新的藥理代理銷(xiāo)售點(diǎn)一可能的治療用途。在此我們準(zhǔn)備了一系列的化學(xué)修飾的多糖，包括硫酸，磷酸，羧甲基化，乙?；突茄苌铮I(lǐng)域）。比較體外治療皰疹活動(dòng)也為首次報(bào)道。2試驗(yàn)2.1材料中國(guó)科學(xué)院成都生物科學(xué)研究所教授趙作成認(rèn)證的在中國(guó)四川宜賓市秋季采摘的黃精根莖。帕金森病是孤立于85%的乙醇提取物根莖黃精P華按照這種方法之前一同時(shí)報(bào)告（劉等人。，2004），多使用陰離子交換尺寸排阻色譜法。生物凝膠P2,P4均購(gòu)從美國(guó)伯樂(lè)公司實(shí)驗(yàn)室，1640培養(yǎng)基，胰蛋白酶，二甲基噻唑-二苯基漠化四唑，胎牛血清在美國(guó)獲得。所有其他化學(xué)品的分析級(jí)除非另有聲稱(chēng)。2.2一般方法用紅外光譜（漠化鉀顆粒）的鈀及其改性衍生物被記錄在珀金埃爾默譜100光譜儀。光學(xué)腐爛的0.2%水溶液的帕金森病及其衍生物測(cè)定在20^，使用一個(gè)10厘米的細(xì)胞和鈉線(xiàn)（589.3nm）與魯?shù)婪騛utopol三自動(dòng)旋光儀。氫和碳核磁共振譜記錄在預(yù)先布魯克600兆赫光譜儀（600MHz的氫和碳在重水150MHz）時(shí)。磷｛氫｝核磁共振譜是運(yùn)行在預(yù)先布魯克300兆赫光譜儀（121兆赫磷）在重水在298K化學(xué)位移（在百萬(wàn)分之一）的氫和碳?xì)浜舜殴舱褡V錄（相對(duì)于四甲基硅me4si），而磷｛氫｝譜記錄相對(duì)于85%磷酸（外部）。硫酸鹽含量測(cè)定采用比濁法（道奇森，1962）?？箟难岬姆椒ㄓ糜诖_定全磷含量（勞瑞，羅伯茨，萊納，吳，與法爾，1954）。羧甲基含量測(cè)定中和滴定（里賈納，希特利，與布，1998）。乙?；潭鹊拇_定使用的方法，龔達(dá)爾（龔達(dá)爾，teleman，與gatenholm，2003）和4甲烷磺酰含量的測(cè)定，根據(jù)核磁共振。2.3黃精不同衍生物的制備2.3.1黃精多糖硫酸化這是準(zhǔn)備根據(jù)修改方法（陶，張，與張，2009）。氯磺酸（毫升）是滴加以毗啶（6）在冰水浴中攪拌。無(wú)水的二甲基甲酰胺6）被添加到硫酸化劑，其次是加入凍干磨多糖（0.5克）。反應(yīng)混合物攪拌0-6小時(shí)，再中和與飽和碳酸氫鈉溶液沉淀的產(chǎn)品。用含水乙醇。由此產(chǎn)生的沉淀溶解水，然后用生物凝膠柱脫鹽?。?.6厘米X100厘米）以蒸餾水為淋洗液。主要部分（監(jiān)測(cè)用蒽酮比色法）收集，集中和干燥真空產(chǎn)生的硫酸多糖作為一種淡黃色固體。2.3.2黃精多糖的磷酸化這是準(zhǔn)備根據(jù)修改方法（元等等，2005）。在氮?dú)鈿夥?，三氯氧磷?00p升）是滴加攪拌解決方案磷酸三乙酯（400|J升）和毗啶（一點(diǎn)六毫升）在0°C混合允許攪拌在同一溫度為30分鐘，然后一二甲基亞颯溶液（5毫升）含多糖（0.5克）加入。反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)，中和氫氧化鈉水溶液。該產(chǎn)品用無(wú)水乙醇沉淀。脫鹽過(guò)程類(lèi)似于描述為硫酸多糖的制備提供磷酸化多糖為淡棕色固體。2.3.3黃精多糖羧甲基化這是準(zhǔn)備根據(jù)修改方法（道等。，2009）。多糖（0.5克）溶解于蒸餾水（2毫升）和氫氧化鈉水溶液（1例，6.5毫升）被添加。解決辦法是允許攪拌30分鐘室溫前加氯乙酸（0.48克）。反應(yīng)混合物加熱至75C攪拌4h。后冷卻到室溫，該溶液用鹽酸中和濃縮減少的壓力下。脫鹽過(guò)程是類(lèi)似的，這稱(chēng)為硫酸多糖的制備到提供制備多糖為白色固體。2.3.4黃精多糖乙?；@是準(zhǔn)備根據(jù)修改方法（張等等，2010）。乙酸酐（露）是滴加一攪拌溶液的多糖（0.5克）和毗啶（2毫升）在二甲基亞颯（毫升）在0C混合攪拌，同時(shí)允許溫度為30min。反應(yīng)快淬與蒸餾水和無(wú)水乙醇沉淀的脫鹽。程序是相似的描述，用于制備硫酸一命中注定我多糖提供乙酰多糖作為一個(gè)紅棕色固體。2.3.5黃精多糖磺?；粋€(gè)攪拌溶液的多糖（0.5克）在二甲基亞颯（毫升）添加毗啶（2毫升）和4甲烷磺酰氯（1.4g）在冰水浴。將混合物攪拌6小時(shí)在房間溫度和淬火用蒸餾水。無(wú)水的乙醇添加到沉淀脫鹽過(guò)程。類(lèi)似于描述為硫酸多糖的制備提供磺多糖作為一個(gè)暗紅色固體。2.4細(xì)胞和病毒非洲綠猴腎細(xì)胞（verocells）提供由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)和單純皰疹病毒（單純皰疹病毒2型）333株從武漢病毒學(xué)研究所，中國(guó)科學(xué)院，使用了抗病毒沼氣一說(shuō)的整個(gè)。非洲綠猴腎細(xì)胞繁殖不育RPMI培養(yǎng)基輔以10%胎牛血清（胎牛血清）和1%青霉素鏈霉素合劑。維修中的欺詐一含2%胎牛血清替代。細(xì)胞培養(yǎng)在加濕5%的二氧化碳在大氣層37角病毒滴定使用細(xì)胞病變（病變）法（艾哈邁迪等人。，2002）在非洲綠猴腎細(xì)胞組織培養(yǎng)感染劑量（50%組織培養(yǎng)感染劑量）測(cè)量之前50使用。2.5細(xì)胞毒性試驗(yàn)非洲綠猴腎細(xì)胞接種到24以及微孔板在濃度為每10細(xì)胞以及和孵育24小時(shí)，37°C,5%二氧化碳。生長(zhǎng)介質(zhì)后改為維修中，氮素化合物的測(cè)試串行稀釋加入。細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)的條件下上述。隨后，介質(zhì)被刪除，噻唑藍(lán)（終濃度0.5毫克/毫升）被添加。孵化后，在黑暗中培養(yǎng)4h，被刪除，其次是增加二甲基亞颯。在微孔板動(dòng)搖5分鐘和光密度測(cè)量一個(gè)美國(guó)伯樂(lè)酶標(biāo)儀在570（630作為參考波長(zhǎng)）。細(xì)胞毒性百分比計(jì)算根據(jù)：（1-（A樣品/A空白））X100%。測(cè)量每個(gè)樣品一式三份。2.6抗病毒試驗(yàn)非洲綠猴腎細(xì)胞接種和培養(yǎng)合流單一在上述條件下24孔板。介質(zhì)中含有被丟棄和維護(hù)測(cè)試的化合物與各種濃度的增加。細(xì)胞感染病毒（100組織培養(yǎng)感染劑量）和培養(yǎng)72h。細(xì)胞病變效應(yīng)下檢查倒光顯微鏡每日和結(jié)果得分?？共《净钚缘倪M(jìn)一步增加后，測(cè)量法去除介質(zhì)。該程序是類(lèi)似于中描述的細(xì)胞毒性試驗(yàn)。抑制率計(jì)算［od樣品-od病毒控制］/［od細(xì)胞控制-od病毒控制］X100%。外徑外徑。50%抑制濃度得到參數(shù)模型。阿昔洛韋為陽(yáng)性對(duì)照。測(cè)量每個(gè)樣品一式三份。50%細(xì)胞的抑制濃度（集成電路）的計(jì)算方法-明奇蘆葦（張，董，與她，1998）。3.結(jié)果與討論3.1鈀衍生物的制備和表征從一開(kāi)始，中性多糖（鈀）提取黃精的華，五化學(xué)修飾衍生物的鈀容易合成的混合物作為不同取代位置一所純化的一種生物凝膠小列按方法在文獻(xiàn)中描述（陶等人。，2009；福格爾，紙，和弗蘭茲，2000；xuetalo，2009）。其產(chǎn)量，取代度和光學(xué)輪換見(jiàn)表1。比較帕金森病，權(quán)重硫酸（s-pd），^（磺炭-鈀），和衍生物（ts-pd）略有增加，改性后，而顯著降低磷酸化（p-pd）和乙?；苌铮╝c-pd）觀察。如表1所示，磺胺一化反應(yīng)進(jìn)行順利，0.82o其他替代如羧甲基化，乙?；土姿峄步又杆?，但效率低，提供在范圍0.74,0.73和0.65，分別為。低分一機(jī)構(gòu)獲得了磺?；?.22下條件。 紅外光譜的粗多糖（帕金森?。┖推溲苌铮╮-pd）顯示在圖1。光譜和帕金森病研究一局部放電信號(hào)非常相似，典型的多糖在1635，1455，1296，1270，1131，1024，931和817cm清楚所有樣品，表明這些多糖應(yīng)該具有相似的結(jié)構(gòu)。強(qiáng)吸收帶在3400cm在光譜和r-pd被分配到羥基伸縮振動(dòng)和峰值約為2920cm被分配到-伸縮的甲基組。該頻率由于主要CH2OH伸展模式和C-O-C伸縮振動(dòng)出現(xiàn)在1075cm的。通過(guò)比較帕金森病的紅外光譜，2特征吸收帶出現(xiàn)的紅外光譜的酯化衍生物（s-pd），一個(gè)在附近1239cm描述一個(gè)不對(duì)稱(chēng)的S=O伸縮振動(dòng)和其他近815cm代表對(duì)稱(chēng)C-O-S振動(dòng)與丙型C-O-SO3組，表明s-pd成功硫酸（mahner，萊希納，和諾德米爾，2001）o磷酸化，新的頻率在1262和929cm歸因于P=0伸縮振動(dòng)和P-0伸縮振動(dòng)，分別。這項(xiàng)任務(wù)是一致的類(lèi)似頻率一般觀察到其他相關(guān)的磷酸化多糖系統(tǒng)（元等人。，2005）o在羧甲基衍生物，2新的強(qiáng)吸收帶出現(xiàn)在1601和1320cm，由于存在首席運(yùn)營(yíng)官和甲基組，分別為。紅外光譜的乙酰衍生物（ac-pd）展出光譜特性的酯化產(chǎn)品展示重要頻率的酯類(lèi)化合物在1726cm（C=0伸縮振動(dòng)）和1373cm（-C-O-C-）。對(duì)磺導(dǎo)數(shù)，高峰在1724cm被分配到的特征吸收C=0伸縮振動(dòng)和信號(hào)1561，和1447cm歸因于碳三甲苯組，這表明ts-pd獲得了?；瘜W(xué)位移和核磁共振譜的局部放電及其化學(xué)改性衍生物r-pd列于表2圖2,分別。從核磁共振譜的局部放電及其化學(xué)改性衍生物r-pd，碳和氫優(yōu)質(zhì)殘留完全分配的化學(xué)位移，通過(guò)以比較文學(xué)的數(shù)據(jù)（洛佩茲，mancilla-margalli，與mendoza-diaz，2003；雷文斯克羅夫特等人。，2009），一個(gè)呋喃果糖基殘留和8-異頭配置。由比較8-d-frutan，吸收約3.65-3.91（H-1）,4.25-4.19（H-3）,4.06-4.07（H-4）,3.80-3.88（H-5）,3.70-3.71（H-6）百分比inHNMRand60.0（C-1）,103.7（C-2）,76.8（C-3）,74.7（C-4）,81.5（C-5）,62.3（C-6）百分比inCNMR含量在核磁共振應(yīng)該是屬性信號(hào)的骨干碳鏈?；瘜W(xué)改性后，信號(hào)的骨干鏈鈀上面提到的仍然存在，這表明主要結(jié)構(gòu)的鈀在其化學(xué)改性衍生物的保留。什么時(shí)候核磁共振譜的本地修改的帕金森病進(jìn)行了比較，光譜吸收59.4ppm，化學(xué)位移的C-6放電，消失在核磁共振譜s-pd。此外，一個(gè)新的吸收63百萬(wàn)分之一出現(xiàn)在光譜的s-pd，表明C-6帕金森病已取代的磺酸基，所以C信號(hào)轉(zhuǎn)移低場(chǎng)。同樣，峰值為61.44百萬(wàn)分之6的鈀中消失核磁共振譜p-pd觀察，表明不同的C-d-fruf^殘留取代了磷組。更明顯的證據(jù)可以觀察磷核磁共振譜與強(qiáng)烈的信號(hào)百萬(wàn)分之-7.64至U-21，這表明多糖成功取代磷組（-PO3）。對(duì)羧甲基化，雖然沒(méi)有明顯的峰值在核磁共振光譜觀察由于重疊信號(hào)在3.62-百萬(wàn)分之4.17,一個(gè)重要的羰基峰集團(tuán)在170.4百萬(wàn)分之一觀察核磁共振光譜。當(dāng)比較小時(shí)，核磁共振光譜和ac-pd，主光譜特征ac-pd是存在的新的信號(hào)百萬(wàn)分之在1.86至2.67核磁共振，百萬(wàn)分之23.2至38.8吸收碳核磁共振譜，分別。這些信號(hào)可以被分配到-甲烷3乙酰基，而特征信號(hào)在百萬(wàn)分之181.3核磁共振可以被分配到-C=0組。用于光譜分析的磺產(chǎn)品，新的高峰在百萬(wàn)分之7.64，7.32和2.34，在核磁共振光譜和吸收在百萬(wàn)分之142.5，139.5，129.5，125.4和20.5,核磁共振譜，分別，被分配到甲苯組。這也可以被視為一個(gè)證據(jù)的成功的磺?；〈?。3.2帕金森病及其衍生物對(duì)細(xì)胞活力的細(xì)胞毒作用非洲綠猴腎細(xì)胞活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)法后3天孵化存在串行稀釋的帕金森病和化學(xué)改性衍生物r-pd。結(jié)果表明，所有的衍生物無(wú)明顯的細(xì)胞毒作用對(duì)細(xì)胞即使在最大濃度為10毫克/毫升法是一致的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡下。因此，我們可以得出這樣的結(jié)論：cc50這些化合物超過(guò)10mg/mlo3.3帕金森病及其衍生物的抗單純皰疹病毒2型能力采用不同的功能團(tuán)體可以影響極性，天然多糖的形態(tài)或電荷密度，它可能導(dǎo)致的變化，抗病毒活性。這反過(guò)來(lái)又提供了寶貴的信息結(jié)構(gòu)-活性的關(guān)系。到澄清的主要影響因子的生物活性，我們審查了治療皰疹活性對(duì)單純皰疹病毒2型（333株）黃精P多糖及其硫酸（s-pd），磷酸化（p-pd），羧（c-pd），乙?；╝c-pd）和磺