微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用課件第一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物一般個(gè)體微小，包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻等原核細(xì)胞第二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六一、微生物的培養(yǎng)基

1、培養(yǎng)基定義：培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是為人工培養(yǎng)微生物而制備的，提供適合微生物生長、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。

思考：微生物細(xì)胞的元素組成是什么？第三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六2、培養(yǎng)基的類型（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。瓊脂的性質(zhì)：熔點(diǎn)：96度凝固點(diǎn)：40度注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。第四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖,可以形成肉眼可見子細(xì)胞的群體——菌落固體培養(yǎng)基用途：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定第五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異。菌落特征是微生物鑒定的重要依據(jù)菌苔：菌落連成片

第六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長均勻混濁生長沉淀生長第七頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng)無動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)第八頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六（2）按成分分：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基

半合成培養(yǎng)基。第九頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六（3）按功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基：含有微生物生長所需的基本物質(zhì)。選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基加入某種物質(zhì)或缺少某種營養(yǎng)物質(zhì)而抑制不需要的微生物生長促進(jìn)需要的微生物生長。舉例說明：加鏈霉素培養(yǎng)基或者加青霉素培養(yǎng)基抑制細(xì)菌和放線菌的生長，篩選真菌。無氮培養(yǎng)基抑制非固氮菌生長，篩選固氮菌鑒別培養(yǎng)基：區(qū)別微生物伊紅——美藍(lán)培養(yǎng)基產(chǎn)氣桿菌菌落大、灰棕色大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤第十頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較種類用途例選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基從眾多微生物中分離所需的微生物鑒別不同種類的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌伊紅—美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈深紫色，可以鑒別大腸桿菌第十一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六幾種選擇培養(yǎng)基：加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物第十二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六二、微生物生長需要條件

1、夏天為什么食物容易腐??？如何處理可以防止腐敗？

2、為什么真空包裝的食品不容易腐敗？3、醋酸是否具有殺菌作用？

以上反應(yīng)了微生物生長受到哪些條件影響？細(xì)菌30～37霉菌25～28放線菌25～281～2d3~4d5~7d大腸桿菌乳酸菌破傷風(fēng)桿菌

大多數(shù)細(xì)菌為好氧型霉菌5.0～6.0細(xì)菌6.5～7.5放線菌7.5～8.5第十三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六三、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)1、水2、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）3、氮源（提供氮元素的物質(zhì)）4、無機(jī)物（無機(jī)鹽）5、生長因子（微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物。如維生素、含氮堿基）第十四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六

碳源可作為碳源的物質(zhì)有:含碳無機(jī)物:含碳有機(jī)物：蛋白質(zhì)脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為碳酸鹽碳酸氫鹽二氧化碳糖類（主要）含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳無機(jī)物（無機(jī)碳）第十五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六氮源可作為氮源的物質(zhì)有:含氮無機(jī)物：含氮有機(jī)物：蛋白胨牛肉膏尿素氮?dú)獍睔庀跛猁}銨鹽注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麥芽汁等天然營養(yǎng)物質(zhì)中既含有碳源又同時(shí)含有氮源、生長因子等營養(yǎng)要素第十六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六1、下列細(xì)菌中，能利用含碳無機(jī)物作碳源的是A光合細(xì)菌B根瘤菌C硝化細(xì)菌D乳酸菌2、培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基中，必需含有的碳源和氮源是A糖、有機(jī)酸等B二氧化碳、碳酸鹽C蛋白質(zhì)D無機(jī)氮化物A.CA.C第十七頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六下表關(guān)于四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝的類型，描述正確的是硝化細(xì)菌乳酸細(xì)菌根瘤菌衣藻能源NH3乳糖固定N2光能碳源CO2糖類糖類CO2氮源NH3N2N2NO2-新陳代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)厭氧性異養(yǎng)厭氧性自養(yǎng)需氧型第十八頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六1000mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5.0g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0g

氮源和維生素NaCl5.0g

無機(jī)鹽H2O

定容至1000ml

氫元素、氧元素（2）特殊營養(yǎng)：—生長因子細(xì)菌生長必需，而往往自身不能合成的化合物，如維生素、某些氨基酸、堿基等（3）pH、氧氣等要求第十九頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六四：營養(yǎng)基配制的原則1：目的要明確配制培養(yǎng)基要根據(jù)培養(yǎng)的微生物、培養(yǎng)的目的、培養(yǎng)基的用途來確定培養(yǎng)基的化學(xué)成分、物理狀態(tài)。2：營養(yǎng)要協(xié)調(diào)3：PH要適宜第二十頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六

五、培養(yǎng)基的配制過程（一）、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制1.計(jì)算:100ml蒸餾水中各物質(zhì)的量。2.稱量：注意牛肉膏的粘稠度大。3.溶化：牛肉膏連同稱量紙一同放入不斷攪拌4.調(diào)節(jié)PH:7.0—7.2思考：判斷該培養(yǎng)基的作用是什么？第二十一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六加熱、溶化第二十二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六第二十三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六

5.分裝：培養(yǎng)基高度1/5不要污染試管口

棉塞塞緊第二十四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六6、包扎3-5支試管扎成一捆，外包一層牛皮紙，用線扎好。第二十五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六

思考：滅菌的溫度、壓力、時(shí)間分別是多少？8.擱置斜面/倒平板（斜面的長度不超過試管的1/2)

第二十六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六圖中哪些措施是防止雜菌污染的？第二十七頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六請(qǐng)觀看培養(yǎng)基的配制過程

G:\生物課件\培養(yǎng)基的配制.mp4第二十八頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50度左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？剛剛不燙手。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？防止瓶口附近的微生物污染培養(yǎng)基第二十九頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六平板冷凝后，為什么要將平板倒置？使培養(yǎng)基表面的水更好的揮發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基在倒平板的過程中，不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，最好不要用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物。第三十頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六六、無菌操作1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵：2、無菌操作避免雜菌感染操作對(duì)象的操作過程3、哪些地方有菌可能導(dǎo)致菌體感染？操作者培養(yǎng)基、接種工具、器皿空間

防止外來雜菌的入侵第三十一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六4、滅菌和消毒

消毒：溫和的因素殺死一部分對(duì)人體有害的微生物。舉例：煮沸，70%酒精溶液問題：一段時(shí)間后為什么會(huì)腐??？不包括芽孢和孢子

滅菌：強(qiáng)烈的因素殺死所有微生物，包括芽孢和孢子。思考：哪些因素可以滅菌、消毒？物理——高溫、紫外線化學(xué)——酒精、氯氣、石碳酸第三十二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六

常用的滅菌方法種類主要方法應(yīng)用范圍

灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒接種針、接種環(huán)或其他金屬用具，接種過程中的試管口、三角瓶口

干熱滅菌法電熱鼓風(fēng)干燥箱160～170℃加熱1～2h培養(yǎng)皿、試管、移液管等玻璃制品和金屬制品不適宜用其他方法滅菌而又耐高溫的物品

高壓蒸汽滅菌壓力100Kp、121℃維持15～

30分鐘培養(yǎng)基及多種器材、物品第三十三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六常用的消毒方法種類主要方法應(yīng)用范圍

巴氏消毒法60～85℃下處理30～35分鐘、牛奶、啤酒、果汁等不宜高溫滅菌的液體

煮沸消毒法100℃沸水浴日常食品、灌裝食品紫外線消毒法30W紫外線燈照射30分鐘接種室空氣化學(xué)藥物消毒法體積分?jǐn)?shù)70%～75%的酒精、碘酒、來蘇水等皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面的消毒第三十四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六思考：以下應(yīng)當(dāng)用何種方法滅菌、消毒？操作者培養(yǎng)基接種工具器皿空間牛奶——手用酒精消毒——高壓蒸汽滅菌——灼燒——干熱滅菌——紫外線——巴氏消毒70～75度30min80度15min第三十五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六灼燒滅菌微生物的接種工具(接種環(huán)、接種針、試管口)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒第三十六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌第三十七頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六總結(jié)：無菌技術(shù)

1、實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者、衣著和手要

和

。2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行

。3、為了避免周圍環(huán)境中微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在

附近進(jìn)行。4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。清潔滅菌酒精燈消毒第三十八頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六七、接種技術(shù)

無菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過程稱為接種。1、接種工具第三十九頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六2、常用的接種方法斜面劃線法第四十頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六第四十一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六做什么準(zhǔn)備？點(diǎn)燃酒精燈斜面向上斜面劃線接種的操作過程第四十二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六斜面用什么接種？接種環(huán)如何滅菌？第四十三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六取棉塞（不放到桌面？）試管口滅菌第四十四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六挑取少量菌體第四十五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六從里到外輕輕劃“S”型曲線，不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基試管口通過火焰，塞緊試管口放在37度恒溫箱中培養(yǎng)24h第四十六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六稀釋涂布平板法包括涂抹平板法和混合平板法涂抹平板法混合平板法第四十七頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六從哪里可以獲得微生物呢？微生物的大本營：土壤從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？原理：根據(jù)微生物所需營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、pH不同利用選擇性培養(yǎng)基選擇。對(duì)微生物進(jìn)行分離的培養(yǎng)基是？（固體培養(yǎng)基）固體培養(yǎng)基上不同菌的區(qū)別是什么？（菌落）菌落作用：微生物分類、鑒定的依據(jù)分離微生物的方法：平板劃線法和稀釋涂抹平板法八、微生物的分離、數(shù)量測定第四十八頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六平板劃線分離微生物的原理：連續(xù)劃線。由于劃線后，線條末端的細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。注意事項(xiàng)：第一步以及每一次劃線之前和劃線結(jié)束后都要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)要冷卻后再劃線。每次劃線之間灼燒接種環(huán)的目的是殺死上一次劃線殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來至于上一次劃線的末端，使每一次劃線的菌種數(shù)目減少。第四十九頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六平板劃線的幾種方法第五十頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六平板劃線的具體操作：A.從試管中取菌第五十一頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六第五十二頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六第五十三頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六問題：每次劃線后要灼燒接種環(huán)，目的是什么？滅菌問題：每次劃線的起點(diǎn)有什么特點(diǎn)？第五十四頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六第五十五頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六問題：上述結(jié)果反應(yīng)了什么情況？問題：可對(duì)菌液如何處理？第五十六頁，共六十六頁，編輯于2023年，星期六稀釋涂布平板法分離微生物的原理：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂平板表面，經(jīng)過培養(yǎng)，在