三HbA1c的檢測

目錄HbA1c常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化2HbA1c檢測的規(guī)范化3

HbA1c的常規(guī)測定

41978年---第一臺(tái)商品化儀器問世1988年---美國糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）建議：HbA1c常規(guī)檢測項(xiàng)目目前檢測方法

原理

不同方法測定糖化血紅蛋白不同的組分HbA1c、HbA1（A1a+A1b+A1c）或總糖化血紅蛋白目前皆以HbA1c或等同于HbA1c來報(bào)告結(jié)果

電荷不同離子交換色譜法電泳結(jié)構(gòu)不同免疫法親和層析法、酶法HbA1c測定方法我國（室間質(zhì)評）

國際（CAP能力驗(yàn)證）

2011年

2008年

2011年

1995年

免疫法

26%

36%

71%

11%

離子交換色譜法

53%

44%

28%

24%

親和層析法

10%

9%

1%

54%

其它

11%

11%

電泳法

11%

從室間質(zhì)評回報(bào)統(tǒng)計(jì)的在不同時(shí)間使用不同的GHB測定方法的實(shí)驗(yàn)室比例目錄HbA1c常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化2HbA1c檢測的規(guī)范化3標(biāo)準(zhǔn)化目的:實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性—是保證檢驗(yàn)質(zhì)量手段意義（益處）可以建立起普遍接受（可用）的參考區(qū)間可以合并分析、比較不同醫(yī)學(xué)中心的研究資料,促進(jìn)醫(yī)學(xué)研究和研究成果的轉(zhuǎn)化能夠有效地應(yīng)用詢證醫(yī)學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)踐指南HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化九十年代中晚期，美國糖尿病控制與并發(fā)癥研究(DCCT)和英國大規(guī)模的前瞻性糖尿病研究(UKPDS)的研究結(jié)果顯示：強(qiáng)化的血糖控制能顯著降低糖尿病并發(fā)癥的危險(xiǎn)和進(jìn)展，強(qiáng)調(diào)了HbA1c在糖尿病患者中血糖控制監(jiān)測的作用。從那時(shí)起，大多數(shù)臨床糖尿病組織都將HbA1c作為糖尿病治療目標(biāo)，糖化血紅蛋白檢測在世界范圍內(nèi)被廣泛應(yīng)用.

1993CAPSURVEY(mean±2SD)

1050%實(shí)驗(yàn)室報(bào)告HbA1c21%實(shí)驗(yàn)室報(bào)告HbA129%實(shí)驗(yàn)室報(bào)告GHB多數(shù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果與靶值偏倚很大，不具有可比性NGSP

（NationalGlycohemoglobin

StandardisationProgram：美國國家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃）11

美國臨床化學(xué)協(xié)會(huì)（AACC）在1993年成立分委會(huì)進(jìn)行GHB測定的標(biāo)準(zhǔn)化工作，使不同實(shí)驗(yàn)室（方法）的結(jié)果可溯源至DCCT的參考結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)化工作由美國國家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（NGSP）指導(dǎo)委員會(huì)于1996年完成。目的：標(biāo)準(zhǔn)化糖化血紅蛋白檢測，使臨床實(shí)驗(yàn)室的測定結(jié)果與DCCT具有可比性該體系在校準(zhǔn)和規(guī)范商業(yè)化HbA1c檢測領(lǐng)域發(fā)揮了極其重要的作用。NGSP對廠家方法的認(rèn)證12NGSP要求：生產(chǎn)廠家有責(zé)任確保其生產(chǎn)的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、（色譜柱）所測結(jié)果與認(rèn)證結(jié)果保持一致認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)：逐步提高認(rèn)證有效期：1年/docs/methods.pdfNGSP對實(shí)驗(yàn)室的認(rèn)證由NGSP的二級參考實(shí)驗(yàn)室來對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行認(rèn)證工作得到認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室所測結(jié)果是可靠的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)：逐步提高認(rèn)證有效期：1年/docs/labs.pdf我國目前有近20家實(shí)驗(yàn)室得到認(rèn)證CAPSURVEY(mean±2SD)142003年，90%實(shí)驗(yàn)室以HbA1c報(bào)告結(jié)果，室間CV<5%，

測定值與靶值的偏倚<0.8%HbA1cIFCC國際標(biāo)準(zhǔn)化151995年IFCC成立HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作組，旨在建立具有高計(jì)量學(xué)水準(zhǔn)的參考系統(tǒng)，用于HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化和校準(zhǔn)，

實(shí)現(xiàn)HbA1c測定的全球可比性明確定義HbA1c葡萄糖與血紅蛋白β鏈N末端纈氨酸殘基穩(wěn)定結(jié)合的化合物.建立一個(gè)特異測定HbA1c的參考方法高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜或高效液相色譜串聯(lián)毛細(xì)管電泳制備純化的HbA1c和HbA0標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立國際參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)完成了與指定比對方法的比較工作參考方法原理HbA0六肽HbA1c六肽谷氨酸內(nèi)切酶參考方法流程17溶血液制備酶解HPLC串聯(lián)毛細(xì)管電泳HPLC串聯(lián)質(zhì)譜IFCC結(jié)果與指定比對方法結(jié)果之間的關(guān)系HbA1c-NGSP=0.915HbA1c-IFCC+2.15(r2=0.998)

ClinChem.2004,50:166-174回歸方程能夠?qū)FCC的結(jié)果與DCCT所得出的有著重要臨床意義的結(jié)果聯(lián)系起來。IFCC結(jié)果與比對方法結(jié)果的關(guān)系

19IFCCHbA1c(mmol/mol)NGSPHbA1c

(%)JDSHbA1c

(%)SwedishHbA1c

(%)eAG

(mmol/l)4265.8<50歲5.0>50歲5.37.05376.66.138.66487.77.210.27598.78.311.886109.79.413.4971110.710.514.91081211.711.616.5小結(jié)臨床試驗(yàn)確立了HbA1c和糖尿病并發(fā)癥之間的相關(guān)性，將這些試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)一后，NGSP非常成功地降低由于不同實(shí)驗(yàn)方法和不同實(shí)驗(yàn)室所造成HbA1c的差異。IFCC的參考方法有利于將劑量溯源升級到更高等級的參考系統(tǒng)。已建立起這兩種單位相互轉(zhuǎn)換的等式。報(bào)告何種單位由各國自行決定。小結(jié)HbA1c是糖尿病血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)，是國際專家委員會(huì)、WHO和許多國家的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，其測定結(jié)果應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)化HbA1c的測定方法有多種，測定原理、組分各不相同，由于IFCC及NGSP的標(biāo)準(zhǔn)化工作，目前都以HbA1c或等同于HbA1c來報(bào)告結(jié)果國際上存在不同的標(biāo)準(zhǔn)化組織，不同組織的結(jié)果數(shù)值是不同的目錄HbA1c檢測的標(biāo)準(zhǔn)化2HbA1c常規(guī)測定方法1HbA1c檢測的規(guī)范化3HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化目標(biāo)精密度：室間變異系數(shù)（CV）<5%只有控制室內(nèi)（總）CV<3%，才可能實(shí)現(xiàn)室間CV<5%準(zhǔn)確度：國際糖尿病專家委員會(huì)、ADA推薦：±0.5%HbA1c準(zhǔn)確度建立在精密度基礎(chǔ)上2009年美國99%溯源到DCCT/UKPDS

英國97%、加拿大100%室間CV<5%，測定值與靶值的Bias<0.3%

CAPSURVEY(mean±2SD)

252010年，99%實(shí)驗(yàn)室以HbA1c報(bào)告結(jié)果，室間CV<5%，

測定值與靶值的偏倚<0.8%HbA1c國內(nèi)、外變異度對比26靶值：5.4最大值：6.3

最小值：4.6變異系數(shù)：3.5靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9變異系數(shù)：8.41所有儀器組

2

AbbottArchitectSystem/Aeroset組3

Bio-RadHPLC組4

TOSOHG7組

5

DrewDS5/Bio-RadDiastat組

6其它儀器組7

PrimusHPLC組

8

NycoCardReaderII組

9

ARKRAYHA-8160組

10

BeckmanSynchronSystems組11

OlypusAUSystems組12

RocheCOBAS,Roche/Hitachi組13惠中MQ-2000我國室間質(zhì)評CAP能力驗(yàn)證我國201111樣本結(jié)果(mean±2SD）靶值：6.6%

HbA1c組實(shí)驗(yàn)室數(shù)平均值中位數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差變異系數(shù)（%）最大值最小值A(chǔ)bbottArchitectSystem/Aeroset組146.556.590.7311.157.745.20Bio-RadHPLC組1676.536.600.294.517.105.80TOSOHG7組696.716.700.426.318.105.00DrewDS5/Bio-RadDiastat組287.217.050.679.308.456.20其它儀器組586.496.570.6910.648.004.70PrimusHPLC組346.806.800.213.047.306.37NycoCardReaderII組246.406.400.8112.678.704.90ARKRAYHA-8160組326.786.800.253.677.206.10BeckmanSynchronSystems組86.816.710.639.217.605.76OlypusAUSystems組466.346.280.8413.198.444.58RocheCOBAS,Roche/Hitachi組796.636.670.537.987.905.40惠中MQ-200087.957.600.9311.709.306.702010-2011國內(nèi)外變異度對比我國CAP56家三甲醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室，采用國際普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）2010年EQA我國不同級別實(shí)驗(yàn)室變異度對比2010年我國參加國際比對平均值Bias（%HbA1c)CV（%）C16.530.32.52C28.000.222.82C310.490.263.18C46.450.062.52NGSP靶值16家三甲醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室，采用國際普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）影響檢測質(zhì)量的因素方法選擇使用方法種類多，有的方法沒有進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化認(rèn)證方法使用人員：能力參差不齊室內(nèi)質(zhì)控：少做、不做校準(zhǔn)：不能定期、定時(shí)校準(zhǔn)，不使用配套校準(zhǔn)品試劑：色譜柱（適用時(shí)）：超限使用儀器：不能定期維護(hù)、保養(yǎng)HbA1c檢測質(zhì)量保證31宗旨：建立HbA1c檢測的技術(shù)規(guī)范，提高HbA1c測定結(jié)果的可比性程度指南從方法的選擇方法的規(guī)范使用測定結(jié)果質(zhì)量的監(jiān)測三個(gè)質(zhì)量環(huán)節(jié)制定了系統(tǒng)的技術(shù)規(guī)范原則，以保證糖化血紅蛋白測定結(jié)果質(zhì)量方法的選擇32應(yīng)選用測定結(jié)果可溯源至IFCC參考系統(tǒng)的分析系統(tǒng)，例如：獲得NGSP認(rèn)證。NGSP認(rèn)證的有效期為1年，查詢網(wǎng)址：/docs/methods.pdf實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉所選分析系統(tǒng)可能存在的干擾因素不同分析系統(tǒng)干擾因素是不同的POCT（point-of-caretesting）方法的精準(zhǔn)性不能滿足臨床需求，目前不應(yīng)用于糖尿病的診斷方法性能33實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備采用一個(gè)新的分析系統(tǒng)（新儀器、新試劑）測定臨床樣品前，應(yīng)對系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證精密度：室內(nèi)CV<3%目前許多測定方法的室內(nèi)CV小于2%只有控制室內(nèi)CV小于3%，才能實(shí)現(xiàn)室間CV小于5%，應(yīng)控制室內(nèi)CV小于3%精密度實(shí)驗(yàn)方法分別采用不少于2個(gè)水平的質(zhì)控物或樣品（高、低值），每天測定2次（2次時(shí)間間隔不少于2小時(shí)），每次重復(fù)測2個(gè)結(jié)果，測定20個(gè)工作日，以20個(gè)工作日的80個(gè)結(jié)果計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)時(shí)間長度很重要，因?yàn)橹挥性谙鄬^長的時(shí)間內(nèi)，一些因素（不同批號(hào)試劑/校準(zhǔn)物/色譜柱（適用時(shí)）、校準(zhǔn)頻率、不同操作人員、不同分析儀狀況、不同環(huán)境條件等）對測定結(jié)果的影響才能體現(xiàn)，可以客觀反映實(shí)際情況方法的規(guī)范化使用實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng)目名稱方法學(xué)原理樣本（采血管/抗凝劑、儲(chǔ)存）校準(zhǔn)程序（校準(zhǔn)日期間隔、校準(zhǔn)方、校準(zhǔn)方法）室內(nèi)質(zhì)控程序樣品的測定程序試劑色譜柱（適用時(shí)）干擾因素參考區(qū)間（范圍）維護(hù)程序

內(nèi)部質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控每個(gè)測定日的開始和結(jié)束均應(yīng)做質(zhì)控分析應(yīng)同時(shí)測定至少2個(gè)不同水平（高、低值）的質(zhì)控品凍干粉質(zhì)控品在更換試劑或色譜柱時(shí)可能會(huì)有基質(zhì)效應(yīng)，程度取決于所用方法更換試劑、校準(zhǔn)物、儀器設(shè)備的關(guān)鍵配件或質(zhì)控值超出質(zhì)控限，應(yīng)再做質(zhì)控樣品采集、處理和儲(chǔ)存檢測樣品不受飲食和采血時(shí)間的影響不同測定方法的樣品穩(wěn)定性是不同的一般情況下，全血樣品在4℃儲(chǔ)存，可以穩(wěn)定1周在-70℃或更低溫度可以長期儲(chǔ)存，至少穩(wěn)定