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1/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建重組質(zhì)粒構(gòu)建生物學(xué)——屠仁軍(新浪)一、載體與外源片段(PCR產(chǎn)物)的雙酶切三、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)大腸桿菌中從-70℃中取出感受態(tài)，指尖輕轉(zhuǎn)融化后立即插入冰上，5ul連 2/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建原因是陽性克隆會分泌水解氨芐的酶到培養(yǎng)基中，水解其周圍的氨 粒的提取與電泳檢測測序，不正確的丟掉即可。(如果質(zhì)粒量很多，也可以送5-10ul質(zhì))3/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建(不要劇烈震蕩，防止基因組DNA、質(zhì)粒斷裂，可以懸空加試劑，這淀物質(zhì)，如果效果不理想，可以轉(zhuǎn)移400ul上清至新離心管，n目的條帶，也有可能看不到。(為了節(jié)約，鑒定時取0.25-0.5ul的。其次是緩沖液和DNA，最后加酶。而酶液要在加入前從-20℃的冰箱4/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建4.Ep管的蓋子應(yīng)蓋緊，防止水浴過程中水汽進入管內(nèi)，并做好6.上樣時要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞康哪z刺堿裂解法質(zhì)粒提取的原理葡萄糖后最大的好處只是懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑，配在分子生物學(xué)試劑中的主5/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建這是由于細胞膜發(fā)生了從bilayer(雙層膜)結(jié)構(gòu)向micelle(微囊)無法有效溶解大腸桿菌，自然就難高效率抽提得到質(zhì)粒。如果只用6/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建dodecylsulfate)遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀(potassiumdodecylsulfate,PDS)，而PDS是水不溶的，因此發(fā)生了沉淀。如7/7重組質(zhì)粒的構(gòu)建環(huán)和復(fù)制中間體(即沒有復(fù)制完全的兩個質(zhì)粒連在

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