第八節(jié)硝苯地平及其制劑的分析硝苯地平結構的母核為苯基-1,4-二氫吡啶。化學名稱：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸二甲酯分子式:C17H18N2O6，分子量:346.34。當二氫吡啶環(huán)的3,5-位被衍生為二甲酸的其它酯、4-位被其它取代苯基取代時，則形成二氫吡啶類的其它藥物。如：氨氯地平、尼莫地平、尼群地平等。它們和硝苯地平類似，都具有4-苯基-1,4-二氫吡啶的母核結構。二氫吡啶類藥物的結構，決定了它們共有的特征理化性質。一、結構和理化性質

硝苯地平氨氯地平尼莫地平1、結晶性與溶解性硝苯地平等二氫吡啶類藥物，結構中具有苯環(huán)、二氫吡啶環(huán)、羧酸酯等低極性基團，以及較大的共軛體系。外觀表現出特征結晶形態(tài)，并具有特定熔點。在弱極性有機溶劑中溶解性較好，而在極性溶劑，如水中溶解性較差。ChP2015硝苯地平的性狀描述：本品為黃色結晶性粉末；無臭。本品在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。本品的熔點為171～175°C。2、光不穩(wěn)定性二氫吡啶環(huán)3,5-位同時被極性的共軛羧酸酯基團取代，使二氫吡啶環(huán)上的1,4-位的兩氫原子的解離和反應活性特別活潑，遇光不穩(wěn)定。它們既易被氧化，又易在光照條件下發(fā)生光催化歧化反應。使二氫吡啶芳構化、或將4-硝基苯基上的硝基轉化為亞硝基2、光不穩(wěn)定性硝苯地平的光降降解(a)光降解程度隨時間的變化(IS內標:對氨基苯甲酸乙酯);C18柱，H2O-MeOH(35:65)流動相；234nm檢測(b)光降解途徑因此，硝苯地平等二氫吡啶類藥物，應特別注意避光儲藏。質量控制標準中，光降解雜質也是關鍵質量指標。分析檢驗操作過程中，也應避光操作。堿性條件下，二氫吡啶環(huán)1,4-位的氫也可發(fā)生解離，二氫吡啶芳構化，形成p-π共軛而發(fā)生顏色變化。利用該反應，可鑒別硝苯地平等二氫吡啶類藥物。堿性條件下，硝苯地平側鏈的甲酯也會發(fā)生酯水解反應，生成的水解雜質也應進行質量控制。3.還原性與氧化性

硝苯地平的二氫吡啶環(huán)，具有還原性?？膳cCe4＋、KMnO4等氧化劑反應。可用氧化還原反應對硝苯地平及其它二氫吡啶類藥物進行鑒別或含量測定。二氫吡啶環(huán)4-位為硝基苯基取代，芳香硝基在被還原為芳伯氨基后，可發(fā)生重氮化-偶合反應。4.吸收光譜特性

硝苯地平等二氫吡啶類藥物結構中均含有多個極性基團，并有共軛骨架。它們在紫外光區(qū)有特征吸收，均具有特征的紅外吸收光譜?？捎糜阼b別。

硝苯地平(10μg/mL甲醇溶液)苯磺酸氨氯地平(25μg/mL0.01mol/L鹽酸甲醇溶液)典型二氫吡啶藥物的UV吸收譜典型二氫吡啶藥物硝苯地平和苯磺酸氨氯地平的IR吸收譜二、鑒別試驗與氫氧化鈉試液反應重氮化-偶合反應紫外光譜法紅外光譜法色譜法利用二氫吡啶環(huán)在堿性條件的顯色反應，可以進行鑒別。利用硝基苯取代二氫吡啶藥物中硝基的反應，也可以進行化學鑒別。硝基苯，在酸性下首先被鋅粉還原為芳伯氨基，然后用重氮化-偶合反應進行鑒別。利用規(guī)定色譜條件下的保留行為可進行鑒別含有多個極性基團，并有共軛骨架，紅外吸收具有特征指紋性結構中均含有多個極性基團，并有共軛骨架，有UV特征吸收，可進行鑒別。三、有關物質檢查合成路線與雜質硝苯地平的采用著名的Hantzsch路線合成，相對簡便。但是，硝苯地平易發(fā)生光降解、氧化降解、堿穩(wěn)定性較差，供試品中易含有多種有關物質。硝苯地平的典型合成工藝路線機制過程和產品三、有關物質檢查合成路線與雜質

硝苯地平的主要有關物質與結構(EP雜質代碼)三、有關物質檢查光降解雜質的檢查各國藥典大多采用HPLC法，對硝苯地平等二氫吡啶類藥物的原料及制劑，在嚴格避光條件下，進行光降解雜質及有關物質的檢查。該方法，以外標法檢查光降解雜質A和B，主成分自身稀溶液(0.1%)對照法，檢查其它有關物質。溶液配制：供試品溶液：取本品0.200g

于50mL量瓶中，用甲醇制成每1mL中約含4.0mg的溶液雜質對照品溶液：硝苯地平雜質A(硝苯吡啶)對照品10mg于25mL量瓶中，用甲醇制成每1mL中約含400μg的溶液硝苯地平雜質B(亞硝苯吡啶)對照品10mg于25mL量瓶中，用甲醇制成每1mL中約含400μg的溶液混合對照溶液：供試品溶液0.1mL+雜質對照品溶液各1mL，制成每1mL中含硝苯地平、雜質A與雜質B均各為4.0μg的溶液示例EP9硝苯地平有關物質的HPLC檢查：避光操作。三、有關物質檢查光降解雜質的檢查色譜條件：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(150mm4.6mm,5μm)；流動相：甲醇-乙腈-水(36:9:55)流速：1.0mL/min；檢測波長為235nm。取混合對照溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至硝苯地平峰保留時間(約15.5分鐘)的二倍，雜質A、雜質B與硝苯地平依次出峰，它們之間的分離度均應符合要求。取供試品溶液與混合對照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有與雜質A和雜質B保留時間一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算，均不得過0.1%；其它單個雜質峰面積均不得大于混合對照溶液中硝苯地平峰的面積(0.1%)；溶劑和面積小于混合對照溶液中硝苯地平峰面積0.1倍的雜質峰忽略不計，雜質總量不得過0.3%。示例EP9硝苯地平有關物質的HPLC檢查：避光操作。制劑處方工藝研究，不僅應進行原輔料相容性試驗，還應針對共存活性成分間的相互作用進行研究。合理進行處方篩選和設計，避免降解或相互反應的影響。三、有關物質檢查雜質D等堿性雜質的檢查硝苯地平結構中的二氫吡啶基團和硝基，均具有較高的反應活性，與有些藥物接觸易發(fā)生反應。既是不穩(wěn)定因素，又易產生新雜質。阿替洛爾-硝苯地平復方制劑中有關物質的HPLC檢查Nif-DP1=反應雜質；Nif-DP2=光降解雜質A；Nif-DP3=光降解雜質B；HPLC條件：AscentisRP-Amide柱，10mmol/LpH3.0KH2PO3溶液-甲醇梯度洗脫(0min(50:50)30min(30:70)示例阿替洛爾-硝苯地平復方中，阿替洛爾促進了降解雜質Nif-DP1的形成，含量顯著增大三、有關物質檢查活性成分反應雜質的檢查硝苯地平USP40和EP9標準中，除了采用HPLC法檢查有關物質，還對合成工藝過程中，可能引入的雜質D等堿性雜質進行檢查。檢查時，利用雜質D與硝苯地平的堿性差異，采用非水滴定法，以消耗高氯酸滴定液的體積，對雜質D等堿性雜質進行限度控制。此時，二氫吡啶環(huán)上氮原子的相對堿性極弱，不影響滴定。取本品4g，精密稱定，置250mL錐形瓶中，加冰醋酸160mL超聲使溶解，加0.25mL對萘酚苯甲醇指示劑，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液由棕黃色變?yōu)榫G色。消耗的高氯酸滴定液不得過0.48mL(限度：0.14%)。示例EP9硝苯地平雜質D等堿性雜質的檢查：四、制劑有效性的控制與溶出度檢查溶出度控制限度規(guī)定：照槳法測定，以水900mL為溶出介質，轉速為每分鐘50轉，依法操作，經15分鐘時的溶出度不得小于85%。測定法：使用遮光容器，避光操作。取硝苯地平細顆粒劑適量(相當于硝苯地平(C17H18N2O6)10mg)，精密稱定，照槳法操作。在規(guī)定的采樣時間，取溶液至少20mL，用孔徑不大于0.45μm的濾膜濾過，棄去初濾液10mL，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取預先經105°C干燥2小時的硝苯地平對照品約28mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇50mL溶解后，用水稀釋至刻度，精密量取該溶液2mL，置50mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對照品溶液。照含量測定項下的高效液相色譜法，取供試品溶液和對照品溶液各50μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，即得硝苯地平(C17H18N2O6)的溶出量。二氫吡啶類藥物在水中大都幾乎不溶，而它們通常均口服給藥。所以，它們的晶型、粒度狀態(tài)和處方工藝，對這些口服制劑的溶出行為、口服生物利用度和臨床藥效，均產生顯著影響。示例JP17硝苯地平細顆粒劑的溶出度檢查：四、制劑有效性的控制與溶出度檢查溶出度控制示例JP17硝苯地平細顆粒劑的溶出度檢查溶出量=MS/MT

AT/AR1/C36MS：細顆粒劑溶出度測定取樣量中硝苯地平的重量(mg)；MT：細顆粒劑溶出度測定的取樣量(g)；AT和AR：分別為供試品溶液和對照品溶液色譜中硝苯地平的峰面積；C：每1g細顆粒劑中硝苯地平(C17H18N2O6)的標示量(mg)；36：稀釋換算倍數。硝苯地平在水中幾乎不溶，溶出度測定仍然采用水作為介質。主要目的是保障水難溶藥物口服制劑，臨床藥效的穩(wěn)定性和一致性。

所以，JP17硝苯地平細顆粒劑，采用微粉化和固體分散等制劑技術，促進并保障了硝苯地平在水中的快速釋放和溶出。實現了臨床口服給藥的平穩(wěn)和有效吸收，從而獲得穩(wěn)定與一致的藥效。JP17硝苯地平腸溶細顆粒劑也有相似的規(guī)定：在酸性水溶液介質中，60分鐘時的溶出度不得大于15%；在pH6.8的磷酸鹽水溶液介質中，30分鐘時的溶出度不得小于75%。四、制劑有效性的控制與溶出度檢查溶出度控制取本品，照溶出度與釋放度測定法(第二法)，以0.25%十二烷基硫酸鈉溶液900mL為溶出介質，轉速為每分鐘120轉，依法操作，經60分鐘時，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品約10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密量取適量，用溶出介質定量稀釋制成每lmL中約含硝苯地平5μg(5mg規(guī)格)或10μg(10mg規(guī)格)的溶液，作為對照品溶液。照含量測定項下的方法測定，按外標法以峰面積計算每片的溶出量。限度為標示量的75%，應符合規(guī)定。0.25%十二烷基硫酸鈉表面活性劑溶液、和每分鐘120轉的高轉速，促進片劑中硝苯地平的溶解如此的溶出度測定法，對于制劑特性和難溶性藥物的釋放，均沒有區(qū)分度不能夠有效控制難溶性藥物制劑在口服給藥后的有效釋放和藥效的穩(wěn)定、可靠和均一示例ChP2015硝苯地平片溶出度檢查項規(guī)定：避光操作四、制劑有效性的控制與溶出度檢查制劑處方關鍵工藝硝苯地平具有低溶解性和高滲透性，屬BCS分類II的藥物口服制劑的體內吸收行為和藥效，與溶出度和釋放度高度相關微粉化和固體分散等制劑技術，在處方設計和工藝中為關鍵工藝步驟，相關參數要嚴格控制例如，以疏水的乙基纖維素(ethylcellulose，EC)和親水性聚甲丙烯酸銨酯(AmmonioMethacrylateCopolymer,EudragitRL)為關鍵固體分散輔料，加硝苯地平(Nifedipine,NF)不同比例，用50mL丙酮溶解，攪拌條件下，滴加100mL水，通過共沉淀法，制得硝苯地平固體分散微粒。使用不同輔料及硝苯地平比例，制得固體分散體系的微粒特性和釋放特性則不同，從而，可以用于具有特定緩控釋要求制劑的加工。

硝苯地平速釋制劑處方中含有輔料：羥丙基纖維素、乳糖、玉米淀粉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、二氧化硅和硬脂酸鎂等；而其緩釋制劑包衣中的主要輔料為：羥丙甲基纖維素、聚乙二醇等。四、制劑有效性的控制與溶出度檢查制劑處方關鍵工藝處方分散材料組成(RL:EC)處方重量比(NF:RL:EC)載藥量(%)平均粒度(sd)(μm)微粒形態(tài)A(2:1)0.2:10:5219(0.4)球形0.8:10:5715(0.6)2:10:51113(0.4)3:10:52121(1.7)B(1:1)0.2:7.5:7.5119(0.5)球形0.8:7.5:7.5523(1.4)2.7:7.5:7.51019(1.0)3.7:7.5:7.51820(3.1)C(1:2)0.2:5:10130(11)長形0.8:5:10432(7.9)2:5:10938(10)3:5:101633(5.0)

NF-RL-EC不同載藥和處方比的固體分散體系特性NF-RL-EC不同載藥和處方比的固體分散體系的粒徑分布特征四、制劑有效性的控制與溶出度檢查制劑處方關鍵工藝NF-RL-EC不同載藥(%數)和處方比(A、B或C)固體分散體系的微粒顯微照片高載藥比照片中，箭頭所指為未分散的硝苯地平晶體顆粒

多孔乳糖-硝苯地平載藥微粒的DSC圖(a)硝苯地平(NF),(b)多孔乳糖,(c)NF0.06M乙醇溶液吸附微粒(9.1%),(d)NF乙醇溶液灌注微粒(8.5%),(e)NF乙醇溶液灌注微粒(11.9%),(f)NF乙醇溶液灌注微粒(16.5%),(g)NF乙醇溶液灌注微粒(8.5%)加速試驗4個月四、制劑有效性的控制與溶出度檢查制劑處方關鍵工藝多孔乳糖-硝苯地平載藥微粒的掃描電鏡圖(Scanningelectronmicrographs)(A/B)NF0.06M乙醇溶液吸附微粒(9.1%),(C)NF乙醇溶液灌注微粒(11.9%),(D)NF乙醇溶液灌注微粒(16.5%)多孔乳糖-硝苯地平載藥微粒的釋放曲線以多孔乳糖載藥硝苯地平，通過固定濃度乙醇溶液一次吸附，或固定濃度乙醇溶液反復揮干灌注，可制得不同載藥量的固體分散微粒，能夠顯著提高硝苯地平的溶出和釋放速率，可用于硝苯地平速釋制劑的制備。五、含量測定鈰量法滴定液：Ce(SO4)2，利用Ce4+的氧化性。滴定條件：強酸性，酸度較低時滴定液中的Ce4+易水解指示劑：鄰二氮菲亞鐵(pH2.0~9.0，橙紅色鄰二氮菲亞鐵離子)指示終點：在終點時微過量的Ce4＋將指示液中的Fe2＋氧化成Fe3＋，使橙紅色消失(氧化型鄰二氮菲鐵離子顯淺藍色)Ce(SO4)2為滴定液顯黃色，Ce3+無色，故Ce4+自身也可以作為指示劑，但是，不夠靈敏。五、含量測定取本品約0.4g，精密稱定，加無水乙醇50mL，微熱使溶解，加高氯酸溶液(取70%高氯酸8.5mL，加水至100mL)50mL、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點時，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1mL硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當于17.32mg的C17H18N2O6。該方法中，硝苯地平與硫酸鈰反應的摩爾比為1:2。鈰量法EP9取硝苯地平原料0.1300g，以2-甲基-2-丙醇25mL為溶劑進行鈰量法滴定測定。USP40則采用HPLC法進行硝苯地平原料的含量測定。示例ChP2015硝苯地平含量的鈰量法測定：五、含量測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(150mm×4.6mm，5μm)，柱溫40℃；10mmol/L磷酸氫二鈉溶液(用稀磷酸調節(jié)pH值為6.1)-甲醇(550:450)為流動相，并調節(jié)流速使硝苯地平的保留時間約為6分鐘；紫