第二節(jié)基因工程的

原理和技術(shù)基因工程的基本操作程序1、獲得目的基因2、形成重組DNA分子3、將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞4、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞5、目的基因的表達(dá)剪切拼接導(dǎo)入篩選表達(dá)目的基因的序列未知1、從基因文庫中獲取目的基因的序列已知—化學(xué)方法合成利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增人工合成一、獲取目的基因的常用方法：

1、基因文庫的構(gòu)建——直接分離法（或鳥槍法）該法最大的缺點(diǎn)是帶有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能將真核生物的基因轉(zhuǎn)移到原核生物中去。2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。可以獲得大量的目的基因。PCR擴(kuò)增儀氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。在酶的作用下，不斷延伸，合成雙鏈DNA。多次循環(huán)，獲得大量雙鏈DNA分子。PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的mRNA逆轉(zhuǎn)錄單鏈DNA合成雙鏈DNA（目的基因）蛋白質(zhì)氨基酸序列推測mRNA的核苷酸序列推測結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列化學(xué)合成目的基因化學(xué)合成法逆轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基酸序列直接合成DNA二、形成重組DNA分子——

核心質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端思考：得到的一定是重組DNA分子嗎？目的基因與質(zhì)粒的連接思考：如何防止質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化呢？基因兩端用不同的限制性核酸內(nèi)切酶切割，并用同樣的酶切割質(zhì)粒三、將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（1）常用的受體細(xì)胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。探究：轉(zhuǎn)基因過程中，怎樣選擇受體細(xì)胞？

轉(zhuǎn)基因植物——

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物——

轉(zhuǎn)基因微生物——植物體細(xì)胞或受精卵受精卵大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌等將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞受體細(xì)胞：細(xì)菌氯化鈣

細(xì)胞壁的通透性增大重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)提純基因表達(dá)載體體外顯微注射入受精卵受精卵移植將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法思考：重組DNA分子一定能導(dǎo)入受體細(xì)胞嗎？探究：如何把導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞篩選出來？思考：能在選擇培養(yǎng)基上生長的就只有接受了重組質(zhì)粒的細(xì)胞嗎？分子雜交技術(shù)表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測——DNA分子雜交翻譯檢測——抗原-抗體雜交分子檢測法抗蟲鑒定抗病鑒定活性鑒定等個(gè)體水平的鑒定探究：目的基因是否表達(dá)呢？分子雜交技術(shù)知識(shí)延伸——DNA分子雜交技術(shù)

該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之