醫(yī)學(xué)免疫學(xué)抗體本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分引言非典戰(zhàn)役中的英雄人物——姜素椿教授本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分引言本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分一、定義1、抗體（antibody,Ab）：B細(xì)胞或記憶B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。

概述本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分EmilvonBehring(1845-1917)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

19世紀(jì)80年代末即發(fā)現(xiàn)抗體，1937年，用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分，證實(shí)抗體活性主要存在于γ區(qū)，也可延伸到β區(qū)和α2

球蛋白區(qū)。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分2、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig):

具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。

本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分概念不同

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab（Ig包含Ab）

Ab是生物學(xué)功能上概念,Ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)上概念二、Ab與Ig的區(qū)別與聯(lián)系概述

本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分一、抗體的基本結(jié)構(gòu)抗體分子的基本結(jié)構(gòu)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分四肽鏈結(jié)構(gòu):兩條相同的重鏈（H鏈）和兩條相同的輕鏈（L鏈）

以二硫鍵連接而成。（一）重鏈和輕鏈H鏈:分子量約為50-75kD，450-550個(gè)氨基酸殘基L鏈:分子量約為25kD，約214個(gè)氨基酸殘基本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分重鏈（H鏈）類與亞類IgA:αIgM:μIgE:εIgD:δIgG:γ抗體結(jié)構(gòu)示意圖類：重鏈抗原性的差異不同類的抗體分子，鏈內(nèi)二硫鍵的數(shù)目和位置、連接寡糖的數(shù)量、結(jié)構(gòu)域的數(shù)目及鉸鏈區(qū)的長(zhǎng)度等均不完全相同。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分亞類：H鏈鉸鏈區(qū)氨基酸的組成，H鏈二硫鍵的數(shù)目、位置IgG:IgG1~IgG4IgA:IgA1、IgA2本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分Κ鏈λ鏈輕鏈（L鏈）型與亞型L鏈恒定區(qū)氨基酸λ鏈恒定區(qū)個(gè)別氨基酸：λ1~λ4每類Ab的輕鏈都可以有Κ鏈和λ鏈兩型輕鏈的功能無(wú)差異不同種屬生物，兩型輕鏈的比例不同本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

Ab的重鏈和輕鏈都可折疊為數(shù)個(gè)球形結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域一般具有其相應(yīng)的功能。

（二）可變區(qū)和恒定區(qū)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分抗體的結(jié)構(gòu)域（功能區(qū)）本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分可變區(qū)（

V區(qū)）：H鏈和L鏈靠近N端約110個(gè)氨基酸的序列變化很大，稱為可變區(qū)。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分高變區(qū)（hypervariableregion,HVR）CDR共同組成Ig的Ag結(jié)合部位，決定著Ab的特異性，負(fù)責(zé)識(shí)別及結(jié)合Ag。骨架區(qū)（frameworkregion,FR）本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分恒定區(qū)（constantregion,C區(qū)）:H鏈和L鏈靠近C端的其余氨基酸數(shù)量、種類、排列順序相對(duì)穩(wěn)定，稱為恒定區(qū)。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

L鏈:VL，CLH鏈:

IgG、IgA、IgD:VH，CH1，CH2，CH3

IgM、IgE:VH，CH1，CH2，CH3，CH4同一種屬的個(gè)體，所產(chǎn)生的針對(duì)不同Ag的同一類別的Ab，其免疫原性相同。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分（三）鉸鏈區(qū)：位于CH1與CH2間，富含脯氨酸

本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

易伸展彎曲，有利于Fab段同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同距離的抗原表位；

易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解；

有利于Ab分子變構(gòu)，暴露其補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)；五類Ab或亞類的鉸鏈區(qū)不盡相同*IgG、IgA、IgD有鉸鏈區(qū)*IgM和IgE無(wú)鉸鏈區(qū)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分二、抗體的輔助成分（一）J鏈（joiningchain）：漿細(xì)胞合成，將單體Ab分子連接成多聚體。（二）分泌片（secretorypiece,SP）*保護(hù)sIgA的鉸鏈區(qū)免受蛋白水解酶降解；*介導(dǎo)IgA二聚體從黏膜下到黏膜表面的轉(zhuǎn)運(yùn)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

三、抗體分子的水解片段目的：研究Ab的結(jié)構(gòu)和功能分離純化特定的Ab多肽片段木瓜蛋白酶（papain）水解

IgG2個(gè)Fab段(fragmentantigenbinding,抗原結(jié)合片段)1個(gè)Fc段（fragmentcrystallizable,可結(jié)晶片段）

胃蛋白酶（pepsin）水解IgG1個(gè)F(ab′)2pFc′本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分抗體的水解片段本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分水解片段意義：*

闡明Ab分子生物學(xué)作用；*

用作生物制品：去掉Fc段，減少超敏反應(yīng)發(fā)生。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分第二節(jié)抗體的多樣性與免疫原性多樣性：自然界存在的抗原數(shù)目繁多，每一種抗原分子的結(jié)構(gòu)又十分復(fù)雜，含有多種不同的抗原表位。理論上，每一種抗原表位可誘導(dǎo)產(chǎn)生一種特異性抗體，以及針對(duì)同一抗原表位可產(chǎn)生不同類型的抗體。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

Ab的免疫原性：Ab具有二重性，可以是抗體，也可以成為抗原，表現(xiàn)為三類不同的抗原表位：(一）同種型：存在于同類抗體分子中的抗原表位，是同一種屬所有個(gè)體Ab分子共有的抗原特異性標(biāo)志，為種屬型標(biāo)志，存在于AbC區(qū)。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分IgGIgM張三的IgG

李四的IgG

C區(qū)張三IgG羊羊抗張三IgG的抗體所有人的IgG結(jié)合本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分（二）同種異型：同一種屬不同個(gè)體間Ab分子所具有的不同抗原特異性標(biāo)志，為個(gè)體型標(biāo)志。存在于AbC區(qū)，由同一基因座的不同等位基因所編碼，均為共顯性。

本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分張三的IgG

李四的IgG

本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分（三）獨(dú)特型（idiotype,Id)：同一種屬、同一個(gè)體來(lái)源的抗體分子，CDR區(qū)的氨基酸序列的不同，顯示不同的免疫原性，是每個(gè)Ab分子特有的抗原特異性標(biāo)志，其表位又稱為獨(dú)特位（idiotope)。存在于V區(qū)。

獨(dú)特型可刺激異種、同種異體以及自體產(chǎn)生相應(yīng)Ab,即抗獨(dú)特型抗體（AId或Ab2)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分同一個(gè)體內(nèi)，特異性不同的抗體，其V區(qū)抗原特異性不同傷寒桿菌的抗體痢疾桿菌的抗體V區(qū)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分Ab2α、Ab2β負(fù)反饋調(diào)節(jié)Ab1;Ab1、Ab3負(fù)反饋調(diào)節(jié)Ab2本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分第三節(jié)抗體的功能本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分一、識(shí)別抗原：V區(qū)的功能

V區(qū)的CDR在識(shí)別和結(jié)合特異性抗原中起決定性作用本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分實(shí)際意義:*中和效應(yīng)：中和毒素、病毒，阻止細(xì)菌吸附*啟動(dòng)體液免疫應(yīng)答:BCR（mIgM、mIgD）特異性識(shí)別Ag分子*抗原與抗體的檢測(cè):本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分二、激活補(bǔ)體：C區(qū)的功能Ab(IgM、IgG1-3)與Ag結(jié)合構(gòu)型改變位于CH2/CH3功能區(qū)的補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)暴露激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑IgG4、IgA和IgE的凝聚物激活補(bǔ)體旁路途徑本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分1、調(diào)理作用：IgG與細(xì)菌等顆粒性抗原結(jié)合后，可通過(guò)其Fc段與巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)FcγR結(jié)合，從而促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬作用。三、結(jié)合Fc受體：C區(qū)功能本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分2、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，ADCC):IgG與腫瘤或病毒感染的靶細(xì)胞結(jié)合后，可通過(guò)其Fc段與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞表面相應(yīng)FcγR結(jié)合，直接殺傷靶細(xì)胞。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

IgE的Fc段可與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的高親和力IgEFc受體（FcεRⅠ)結(jié)合，并使其致敏。若相同變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體與致敏靶細(xì)胞表面的特異性IgE結(jié)合，即可使之脫顆粒，釋放組胺等生物活性介質(zhì)，引起Ⅰ型超敏反應(yīng)。3、介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分四、穿過(guò)胎盤(pán)和黏膜：C區(qū)功能

穿過(guò)胎盤(pán)：IgG

意義：新生兒抗感染

穿過(guò)黏膜：sIgA

意義：黏膜局部抗感染本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分第四節(jié)各類抗體的特性與功能本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分一、IgG單體分子，4個(gè)亞類；血清中含量最高,約占血清總Ig的75%;半衰期最長(zhǎng)(20～23天），是再次應(yīng)答的主要抗體；也是抗感染的主要抗體；是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體；本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分與細(xì)胞表面FcR結(jié)合調(diào)理作用、ADCC

能結(jié)合SPA純化抗體、免疫診斷參與II、III型超敏反應(yīng)本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分二、IgM

1、占血清Ig含量的5～10%；

2、兩種形式存在單體：mIgM表達(dá)于B細(xì)胞表面，構(gòu)成BCR

分泌型：五聚體，分子量最大；

3、個(gè)體發(fā)育中最早合成和分泌的Ab；

4、IgM不能通過(guò)胎盤(pán)

臍帶血IgM升高提示胎兒有宮內(nèi)感染；本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分5、初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的Ab

----早期抗感染;6、半衰期:5天---血清中特異性IgM增高提示有近期感染；7、激活補(bǔ)體能力強(qiáng)；8、自身抗體（如：類風(fēng)濕因子）、天然血型

Ab為IgM；本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分1.兩種類型：血清型---單體，血清中；分泌型---二聚體，由J鏈連接，含上皮細(xì)胞合成的SP,經(jīng)分泌性上皮細(xì)胞分泌至外分泌液中；2.占血清Ab含量的10～15%；三、IgA本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分3.黏膜局部抗感染免疫的主要Ab：抗感染：阻止病原體黏附到細(xì)胞表面中和毒素4.嬰幼兒從母體初乳中獲得sIgA,屬重要的自然被動(dòng)免疫。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分四、IgD1.單體分子;2.存在形式：

分泌型:

血清中，功能不清;

膜結(jié)合型:

構(gòu)成BCR,是B細(xì)胞發(fā)育成熟的重要標(biāo)志。未成熟B細(xì)胞:mIgM

成熟B細(xì)胞:mIgM+mIgD3.占血清Ig含量的0.2%；

4.半衰期:3天。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分mIgMmIgD成熟B細(xì)胞未成熟B細(xì)胞本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分五、IgE1.單體分子；

2.血清中含量最低(占Ig的0.002%)；

3.半衰期:2天；

4.黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌；

5.親細(xì)胞抗體，介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)；

6.過(guò)敏性疾病和某些寄生蟲(chóng)感染患者血清中特異性IgE水平增高。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分第五節(jié)人工制備抗體1、制備抗血清----多克隆抗體2、單克隆抗體技術(shù)3、基因工程抗體本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分1、含義：指由多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對(duì)抗原物質(zhì)中多種抗原表位的多種抗體混合物。如:免疫血清（含多種特異性抗體）優(yōu)點(diǎn)：作用全面,來(lái)源廣泛，制備容易。缺點(diǎn)：特異性不高，易發(fā)生交叉反應(yīng)。一、多克隆抗體本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分帶有多個(gè)表位抗原針對(duì)不同表位的B細(xì)胞克隆增殖多種抗體的混合物（多克隆抗體）刺激小鼠帶有多個(gè)表位抗原針對(duì)不同表位的B細(xì)胞克隆增殖多種抗體的混合物（多克隆抗體）本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分二、單克隆抗體（monoclonalantibody,mAb）針對(duì)單一抗原表位的特異性抗體。定義：本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第63頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分雜交瘤細(xì)胞：

骨髓瘤細(xì)胞---無(wú)限增殖；免疫B細(xì)胞---合成、分泌特異性抗體。

雜交瘤技術(shù)

:HAT培養(yǎng)基---

次黃嘌呤(H)

氨基蝶呤(A)

胸腺嘧啶核苷(T)每一個(gè)雜交瘤細(xì)胞由一個(gè)B細(xì)胞和一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合而成本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第64頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分單克隆抗體的制備過(guò)程

抗原(多表位)免疫小鼠骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)

免疫脾細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞

細(xì)胞融合

HAT培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞的篩選與克隆化

mAb的大量制備PEG本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第65頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第66頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)均一、純度高、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、血清交叉反應(yīng)少或無(wú)

缺點(diǎn)：鼠源性對(duì)人具有較強(qiáng)的免疫原性，反復(fù)人體使用后可誘導(dǎo)產(chǎn)生人抗鼠的免疫應(yīng)答導(dǎo)致機(jī)體免疫損傷。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第67頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分三、基因工程抗體(geneticengineeringantibody)

原理：借助DNA重組和蛋白質(zhì)工程技術(shù)，按人們的意愿在基因水平上對(duì)Ig分子進(jìn)行切割、拼接或修飾，重新組裝成新型抗體分子。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第68頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分根本出發(fā)點(diǎn)：解決抗體的鼠源性問(wèn)題優(yōu)點(diǎn)：人源化或完全人源的抗體，均一性強(qiáng)，可工業(yè)化生產(chǎn)；缺點(diǎn)：親和力弱，效價(jià)不高。本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第69頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分基因工程抗體本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第70頁(yè)；編輯于星期一\13點(diǎn)15分

思考題

1、掌握抗體的結(jié)構(gòu)與功能。

2、比較并熟悉各類抗體的異同點(diǎn)。

3、簡(jiǎn)述人工制備抗體的方法。60本文檔共73頁(yè)；當(dāng)前第