FangLi,GuizhiCheng,HongQu,BingWang,JieMa,ShiyingwangDept.ofImmunologyCollegeofbasicmedicalsciencesDalianMedicalUniversityTel:86110294

本文檔共110頁；當前第1頁；編輯于星期二\9點49分I.IntroductionToImmunologyII.ApplicationofMolecularBiologyinImmunology本文檔共110頁；當前第2頁；編輯于星期二\9點49分CHAPTERIIntroductionToImmunology本文檔共110頁；當前第3頁；編輯于星期二\9點49分ImmunologyDefinition:

Immunologyisthestudyofimmunityinthisbroadersenseandofthecellularandmoleculareventsthatoccurafteranorganismencountersmicrobes

andotherforeignmacromolecules本文檔共110頁；當前第4頁；編輯于星期二\9點49分TheImmuneSystemisthenameofacollectionofMolecules,

CellsandOrganswhosecomplexinteractionsformanefficientsystemthatisusuallyabletoprotect

anindividualfrombothoutside

invadersanditsownaltered

internalcells.本文檔共110頁；當前第5頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第6頁；編輯于星期二\9點49分中樞免疫器官（Centrallymphoidorgan）淋巴細胞發(fā)育成熟的場所骨髓（bonemarrow）、胸腺（thymus）免疫器官immuneorgans本文檔共110頁；當前第7頁；編輯于星期二\9點49分外周免疫器官（Peripherallymphoidorgan）淋巴細胞定居和發(fā)揮功能的場所脾（spleen）、淋巴結（lymphoidnodes）黏膜相關淋巴組織（MALT）本文檔共110頁；當前第8頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第9頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第10頁；編輯于星期二\9點49分 單核巨噬細胞（monocytesandmacrophages）免疫細胞immunecells本文檔共110頁；當前第11頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第12頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第13頁；編輯于星期二\9點49分抗體（antibody）主要組織相容性復合體（MHC）T細胞受體TCR免疫分子immunemolecules本文檔共110頁；當前第14頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第15頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第16頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第17頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第18頁；編輯于星期二\9點49分12345本文檔共110頁；當前第19頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第20頁；編輯于星期二\9點49分免疫記憶——疫苗與抗感染免疫免疫記憶（Immunologicalmemory）經歷了某種微生物感染之后短時間內一般不會再次被同一種微生物感染。這種現(xiàn)象稱為免疫記憶。記憶細胞本文檔共110頁；當前第21頁；編輯于星期二\9點49分Immunologicalmemorymakesvaccinationagainstinfectiousdiseasespossible!疫苗（VACCINE）Mycobacteriumtuberculosis.脊髓灰質炎Polio狂犬病Rabies

天花Smallpoxvirus白喉diphtheriaHepatitisA

HepatitisB本文檔共110頁；當前第22頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第23頁；編輯于星期二\9點49分接種疫苗后21天內的反映情況

本文檔共110頁；當前第24頁；編輯于星期二\9點49分免疫記憶ImmunologicmemoryAB白喉vaccineDEAnti-白喉antibody白喉BmcellAnti-白喉antibodyagainst白喉白喉Bmcell本文檔共110頁；當前第25頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第26頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第27頁；編輯于星期二\9點49分獲得性免疫應答免疫缺陷腫瘤變態(tài)反應(超敏反應)自身免疫性病移植免疫本文檔共110頁；當前第28頁；編輯于星期二\9點49分臨床免疫及免疫病理——Hypersensitivity超敏反應Immunodeficiency免疫缺陷Autoimmunediseases自身免疫病Canceroftheimmunesystem免疫系統(tǒng)腫瘤TumorImmunology腫瘤免疫本文檔共110頁；當前第29頁；編輯于星期二\9點49分IHypersensitivity超敏反應本文檔共110頁；當前第30頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第31頁；編輯于星期二\9點49分Contactallergylimitedtotheeyelids,duetosecondarycontactfromhairdyecontainingparaphenylenediamine本文檔共110頁；當前第32頁；編輯于星期二\9點49分Patientswithhypersensitivityvasculitiswithtypicalskinrash.本文檔共110頁；當前第33頁；編輯于星期二\9點49分Eczema濕疹Anatopiceczemareactiononthebackofakneeofachildallergictoriceandeggs本文檔共110頁；當前第34頁；編輯于星期二\9點49分Serumsickness本文檔共110頁；當前第35頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第36頁；編輯于星期二\9點49分5本文檔共110頁；當前第37頁；編輯于星期二\9點49分6.(Ach:acetylcholine)乙酰膽堿本文檔共110頁；當前第38頁；編輯于星期二\9點49分T、B細胞聯(lián)合免疫缺陷

SevereCombinedImmunodeficiency，SCIDIIImmunodeficiency免疫缺陷本文檔共110頁；當前第39頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第40頁；編輯于星期二\9點49分HIV感染淋巴細胞Immunodeficiency免疫缺陷本文檔共110頁；當前第41頁；編輯于星期二\9點49分HIVbuddingfromhumanlymphtissue(TEMx133,335)Immunodeficiency免疫缺陷本文檔共110頁；當前第42頁；編輯于星期二\9點49分LesionsonthestomachofapatientwithKaposi'ssarcoma

Figure-Kaposi'sSarcomaKaposi'ssarcoma(skin).SkinshowingAIDS-associatedKaposi'ssarcoma

Immunodeficiency免疫缺陷本文檔共110頁；當前第43頁；編輯于星期二\9點49分Hairyleukoplakia（黏膜白斑）oftongueinAIDSOralthrush鵝口瘡.CandidaandherpessimplexinAIDS

SevereangularcheilitisinAIDS口角炎

Immunodeficiency免疫缺陷本文檔共110頁；當前第44頁；編輯于星期二\9點49分RA患者手指關節(jié)實質性損傷IIIAutoimmunediseases自身免疫病本文檔共110頁；當前第45頁；編輯于星期二\9點49分SLE患者臉部的蝴蝶斑Autoimmunediseases自身免疫病本文檔共110頁；當前第46頁；編輯于星期二\9點49分ankylosingspondylitis(B27),強直性脊柱炎本文檔共110頁；當前第47頁；編輯于星期二\9點49分Destructionofpancreaticislet-cellsbyinfiltratingT-cellsintheNonobesediabetic(NOD)mouse本文檔共110頁；當前第48頁；編輯于星期二\9點49分ApplicationofMolecularBiologyinImmunology

本文檔共110頁；當前第49頁；編輯于星期二\9點49分MOLECULARBIOLOYSeektoexplaintherelationshipsbetweenthestructureandfunctionofbiologicalmoleculesandhowtheserelationshipscontributetotheoperationandcontrolofbiochemicalprocesses.本文檔共110頁；當前第50頁；編輯于星期二\9點49分Practicalapplications

inthedevelopmentofnewandsafeproductssuchastherapeutics,vaccinesandfoodstuffs,andinthediagnosisofgeneticdiseaseandingenetherapyModernmolecularbiology:本文檔共110頁；當前第51頁；編輯于星期二\9點49分一、新細胞因子的cDNA克隆技術本文檔共110頁；當前第52頁；編輯于星期二\9點49分ProteinFMVL……..cDNAlibraries........SequencingAUGCCUAAUCCU……mRNATACGGATTAGGA……ProbeDesigningSpeculating.......TransfertonitrocellulosePlating32PDigColonyhybridizationPositivecolony傳統(tǒng)的蛋白質到核酸途徑本文檔共110頁；當前第53頁；編輯于星期二\9點49分差異顯示技術克隆細胞因子利用同一細胞在不同條件下表達免疫分子的差異克隆新細胞因子，例如T細胞活化前低表達細胞因子，活化后則高表達細胞因子，利用DD-PCR、RDA、SSH等技術可克隆T細胞活化后高表達的基因，其中可能含有新細胞因子cDNA.(-)(+)現(xiàn)代的核酸到蛋白質途徑本文檔共110頁；當前第54頁；編輯于星期二\9點49分Interleukin-10.Chain:l.(150residues)-[9helices]

Cytokinesynthesisinhibitoryfactor.Interleukin-10receptoralphachain.Chain:rFragment.(205residues)-[2helices,12strands]:extracellulardomain,本文檔共110頁；當前第55頁；編輯于星期二\9點49分(-)IL-10(+)PHAExpressingmRNAcDNAReveretranscript本文檔共110頁；當前第56頁；編輯于星期二\9點49分第二輪雜交，加新的變性driver,退火加引物+PCR擴增回收片段，克隆化PHA刺激的U937細胞IL-10抑制的U937細胞PHA刺激的U937細胞TestercDNAwithadaptor-1DrivercDNA(超量)TestercDNAwithadaptor-2第一輪雜交末端補齊SuppressionSubtractiveHybridizationSSH示意圖本文檔共110頁；當前第57頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第58頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第59頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第60頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第61頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第62頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第63頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第64頁；編輯于星期二\9點49分

GTTCCCAATCTGAAGTGAAGCCGAGCTGGGCGAGAAGTAGGGGAGGGCGGTGCTCCGCCG60CGGTGGCGGTTGCTATCGCTTCGCAGAACCTACTCAGGCAGCCAGCTGAGAAGAGTTGAG120GGAAAGTGCTGCTGCTGGGTCTGCAGACGCGATGGATAACGTGCAGCCGAAAATAAAACA180MDNVQPKIKHTCGCCCCTTCTGCTTCAGTGTGAAAGGCCACGTGAAGATGCTGCGGCTGGATATTATCAA240RPFCFSVKGHVKMLRLDIINCTCACTGGTAACAACAGTATTCATGCTCATCGTATCTGTGTTGGCACTGATACCAGAAAC300SLVTTVFMLIVSVLALIPETCACAACATTGACAGTTGGTGGAGGGGTGTTTGCACTTGTGACAGCAGTATGCTGTCTTGC360TTLTVGGGVFALVTAVCCLACGACGGGGCCCTTATTTACCGGAAGCTTCTGTTCAATCCCAGCGGTCCTTACCAGAAAAA420DGALIYRKLLFNPSGPYQKKGCCTGTGCATGAAAAAAAAGAAGTTTTGTAATTTTATATTACTTTTTAGTTTGATACTAA480PVHEKKEVL-GTATTAAACATATTTCTGTATTCTTCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA534CKLF1的完整cDNA序列和編碼的蛋白質序列

(GenBankAF096895)本文檔共110頁；當前第65頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第66頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第67頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第68頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第69頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第70頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第71頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第72頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第73頁；編輯于星期二\9點49分CKLF1獨特的功能廣譜的體內、外趨化活性對造血祖/干細胞的促增殖作用

對骨骼肌細胞的促增殖分化作用新細胞因子CKLF1（Chemokine-likefactor1)(BiochemJ2001,357,127–135)本文檔共110頁；當前第74頁；編輯于星期二\9點49分AB小鼠骨骼肌基因注射10天后注射部位組織學圖像（HE132）ApcDI組；BpcDI-CKLF1組本文檔共110頁；當前第75頁；編輯于星期二\9點49分ADCBpCDI-hCKLF1裸基因注射小鼠肺部病變A:對照；B:2周；C：3周；D：4周CKLF1的病理作用本文檔共110頁；當前第76頁；編輯于星期二\9點49分CKLF1特殊的組織分布成人組織低表達或不表達胚胎組織和腫瘤組織高表達，變異體形式多CKLF1在腫瘤組織中的特征性分布預示著該基因在腫瘤發(fā)病中可能起重要作用本文檔共110頁；當前第77頁；編輯于星期二\9點49分二、基因突變MUTAGENESISOFCLONEDGENESDelectionmutagenesisSite-directedmutagenesisPCRmutagenesis本文檔共110頁；當前第78頁；編輯于星期二\9點49分利用點突變技術（Site-directedmutagenesis）定向改變某（個）些氨基酸，以產生具有不同生物學活性的新的突變體。Site-directedmutagenesisChangingoneorafewnucleotidesataparticularsiteAnnealingamutagenicprimertoatemplatefollowedbycomplementarystrandsynthesisbyaDNApolymerase.(PCR)本文檔共110頁；當前第79頁；編輯于星期二\9點49分IL-8為重要的炎癥介質(急性炎癥反應,類風濕性關節(jié)炎)

本文檔共110頁；當前第80頁；編輯于星期二\9點49分趨化因子介導的炎癥是機體對外來刺激的一種病理性免疫反應，與若干重大臨床病患的產生和發(fā)展密切相關(炎癥、自身免疫性疾病等)。本文檔共110頁；當前第81頁；編輯于星期二\9點49分TheroleofIL-8signalinginthetumormicroenvironment.Tumor-derivedIL-8hasthecapacitytoexertprofoundeffectsonthetumormicroenvironment.Forexample,secretionofIL-8fromcancercellscanenhancetheproliferationandsurvivalofcancercellsthroughautocrinesignalingpathways.Inaddition,tumor-derivedIL-8willactivateendothelialcellsinthetumorvasculaturetopromoteangiogenesisandinduceahemotacticinfiltrationofneutrophilsintothetumorsite.AlthoughIL-8canpromotecellinvasionandmigration,thecapacityofIL-8toinducetumor-associatedmacrophagestosecreteadditionalgrowthfactorswillfurtherincreasetherateofcellproliferationandcancercellinvasionatthetumorsite.本文檔共110頁；當前第82頁；編輯于星期二\9點49分IL-8--CXC家族趨化因子,最重要的中性粒細胞趨化因子，以高親和力結合受體CXCR1/CXCR2，介導中性粒細胞引起的炎癥反應。本文檔共110頁；當前第83頁；編輯于星期二\9點49分endogenic/ectogenicsstimulationMastcellneutrophilAcuteinflammationmonocyteIL-8RIL-8

本文檔共110頁；當前第84頁；編輯于星期二\9點49分Chain:A(71residues)-[K&S:1helix,3strands]

Chain:B(71residues)-[K&S:1helix,3strands]

Chain:C(19residues)IL-8RIL-8NC本文檔共110頁；當前第85頁；編輯于星期二\9點49分SAKELRCQCIKTYSKPFHPKFIKELRVIESGPHCANTEIIVKLSDGRELCLDPKENWVQRVVEKFLKRAENSIL-8123456

78910111213141516171819…………3132GP(3132)本文檔共110頁；當前第86頁；編輯于星期二\9點49分目的:篩選出高受體親和力而無生物活性的突變體利用點突變技術（Site-directedmutagenesis）定向改變某（個）些氨基酸，以產生具有不同生物學活性的新的突變體。作為CXCR1/CXCR2受體拮抗劑本文檔共110頁；當前第87頁；編輯于星期二\9點49分Site-directedmutagenesisChangingoneorafewnucleotidesataparticularsiteAnnealingamutagenicprimertoatemplatefollowedbycomplementarystrandsynthesisbyaDNApolymerase.(PCR)本文檔共110頁；當前第88頁；編輯于星期二\9點49分GeneticcodeSecondpositionFirstposition(5’end)Thirdposition(3’end)UCAGUCAGUCAGUCAGUCAGUCAGPheUUUSerUCUTyrUAUCysUGUPheUUCSerUCCTyrUACCysUGCLeuUUASerUCAStopUAAStopUGALeuUUGSerUCGStopUAGTrpUGGLeuCUUProCCUHisCAUArgCGULeuCUCProCCCHisCAUArgCGCLeuCUAProCCAGlnCAAArgCGALeuCUGProCCGGlnCAGArgCGGIIeAUAThrACUAsnAAUSerAGUIIeAUCThrACCAsnAACSerAGCIIeAUGThrACALysAAAArgAGAMetAUGThrACGLysAAAArgAGGValGUUAlaGCUAspGAUGlyGGUValGUCAlaGCCAspGACGlyGGCValGUAAlaGCAGluGAAGlyGGAValGUGAlaGCGGluGAGGlyGGG本文檔共110頁；當前第89頁；編輯于星期二\9點49分SAKELRCQCIKTYSKPFHPKFIKELRVIESGP12345678910111213141516171819……3132agtgctaaagaacttagatgtcagtgcataaagacatactccaaacctttccaccccaaatttatcaaagaactgagagtgattgagagtggacca11K11R(精氨酸)AAGCGTCGCCGACGGAGAAGG賴氨酸蘇氨酸酪氨酸甘氨酸脯氨酸5’-cttagatgtcagtgcataAAGacatactccaaacctttccac-3’5’-cttagatgtcagtgcataAGGacatactccaaacctttccac-3’本文檔共110頁；當前第90頁；編輯于星期二\9點49分cDNAAbout40bpG+C%(Tm)mutantsiteinthemiddleoftheprimer本文檔共110頁；當前第91頁；編輯于星期二\9點49分DNApolymerasedNTP95C62C72C本文檔共110頁；當前第92頁；編輯于星期二\9點49分95C62C本文檔共110頁；當前第93頁；編輯于星期二\9點49分72C30cycles本文檔共110頁；當前第94頁；編輯于星期二\9點49分DpnIDpnI5’-GmATC-3’3’-CTmAG-5’Methylase甲基化酶:addsamethylgrouptoaC(dcm)orA(dam)basewithinthesamerecognitionsequencesinthecellularDNA.damaddamethylgrouptoA’sN6in“GATC”sequence.本文檔共110頁；當前第95頁；編輯于星期二\9點49分NickA-T-T-G-A-A-T-G-T-C-A-T-C-C-A-T-G5’3’5’3’T-A-C-C-G-G-T-A-T-A-C-C-G-G-A-A-T5’3’本文檔共110頁；當前第96頁；編輯于星期二\9點49分Agarosegelelectrophoresis23.19.46.64.42.32.00.56MM12M:marker1.parentDNA2.mutantDNA本文檔共110頁；當前第97頁；編輯于星期二\9點49分TransformationPlateIsolationofDNASequencingExpressionofmutantproteinAssayingforfunction本文檔共110頁；當前第98頁；編輯于星期二\9點49分SAKELRCQCIKTYSKPFHPKFIKELRVIESGP12345678910111213141516171819……3132agtgctaaagaacttagatgtcagtgcataaagacatactccaaacctttccaccccaaatttatcaaagaactgagagtgattgagagtggacca11K11R(精氨酸)AAGCGTCGCCGACGGAGAAGG賴氨酸蘇氨酸酪氨酸甘氨酸脯氨酸5’-cttagatgtcagtgcataAAGacatactccaaacctttccac-3’5’-cttagatgtcagtgcataAGGacatactccaaacctttccac-3’本文檔共110頁；當前第99頁；編輯于星期二\9點49分111213…3132IL-8-K11R（賴氨酸/精氨酸）IL-8-T12S（蘇氨酸/絲氨酸）IL-8-Y13F（酪氨酸/苯丙氨酸）IL-811R12S13FIL-8-K11R/G31P（甘氨酸/脯氨酸）IL-8-K11R/P32GIL-8-K11R/31P32GIL-8-K11R/G31P:HighestbindinglowestactivityAsareceptorantagonistMutants-本文檔共110頁；當前第100頁；編輯于星期二\9點49分本文檔共110頁；當前第101頁；編輯于星期二\9點49分三、基因免疫(geneimmunization)DNAVaccinesTheThirdVaccineRevolutionPlasmidvaccine本文檔共110頁；當前第102頁；編輯于星期二\9點49分

DNA疫苗是有目的的將DNA質粒（plasmid）導入人體（vaccinee）。

質粒攜有編碼蛋白的基因，體內低效率感染細胞，表達抗原，引起免疫反應。**DNA-mediatedorDNA-basedimmunization，因為目的不是產生對DNA分子本身的抗體，而是得到由受者細胞表達的蛋白。本文檔共110頁；當前第103頁；編輯于星期二\9點49分PlasmidvaccineGeneforantigenicproteinantigenicproteinantigenicpeptidesAntigenbindingcausescytotoxicTcellstomultiplyandattackinoculatedcellsMemoryTcellActivated