關(guān)于如何制作檢驗(yàn)科質(zhì)控圖第1頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)控血清1．內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清

2．外部對(duì)照質(zhì)控血清

外部對(duì)照質(zhì)控血清是各級(jí)實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)控每次檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及檢驗(yàn)試劑盒批間差異而設(shè)置的一套陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清。設(shè)立外部對(duì)照還可以提示標(biāo)本處于臨界值狀態(tài)時(shí)的檢驗(yàn)操作情況。

第2頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三（1)外部對(duì)照質(zhì)控血清的組成

理想的外部對(duì)照應(yīng)該包括陽(yáng)性對(duì)照、弱陽(yáng)性對(duì)照、臨界值對(duì)照和陰性對(duì)照。在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置一個(gè)單一濃度水平的質(zhì)控品即弱陽(yáng)性對(duì)照。這個(gè)弱陽(yáng)性對(duì)照的值以設(shè)定在該試劑盒Cut-off值的2－3倍為宜。第3頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三（2）外部對(duì)照質(zhì)控血清的來(lái)源和選擇1）通過(guò)向有關(guān)機(jī)構(gòu)購(gòu)買獲得2）通過(guò)實(shí)驗(yàn)室制備獲得(比較經(jīng)濟(jì)的方法)①混合試劑盒內(nèi)部對(duì)照血清，等量分裝。②混合HIV抗體陽(yáng)性或陰性人血清，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，用0.2m生物濾膜過(guò)濾除菌后再進(jìn)行56℃30分鐘加熱滅活處理。弱陽(yáng)性對(duì)照可以通過(guò)使用HIV抗體陰性的正常人血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清并經(jīng)標(biāo)定后得到。弱陽(yáng)性對(duì)照的OD值以2－3倍于Cut-off為宜。第4頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三（3）外部對(duì)照質(zhì)控血清的保存

1）外部對(duì)照血清或血漿的一次制備量應(yīng)該足夠本實(shí)驗(yàn)室一年使用2）外部對(duì)照血清應(yīng)該均一、無(wú)菌3）外部對(duì)照血清標(biāo)定后應(yīng)該等量分裝，每個(gè)分裝的量應(yīng)足夠一周使用4）外部對(duì)照應(yīng)該分類作好標(biāo)記，使用不同顏色的標(biāo)簽5）外部對(duì)照血清應(yīng)該存放在－70℃，如無(wú)條件則存放在非自動(dòng)除霜的－20℃冰箱6）外部對(duì)照血清一旦融解以后應(yīng)該存放在2－8℃，一周后必須棄去，不能重新凍存。第5頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三（4）外部對(duì)照質(zhì)控血清的使用

原則上每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對(duì)照質(zhì)控血清，建立質(zhì)控圖，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)操作的一致性和結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)可以了解各批試劑盒之間的誤差(批間差異)。第6頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)控圖(1)XX+SX-SX-2SX+2S第7頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三建立質(zhì)控圖參數(shù)

對(duì)HIV抗體檢測(cè)(ELISA)外部對(duì)照質(zhì)控血清的評(píng)價(jià)采用多次測(cè)定的OD值的均值上下各兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的范圍，即外部對(duì)照OD值的95％可信限為x

2s。各個(gè)外部對(duì)照的標(biāo)定即確定外部對(duì)照的均值和可信限，可用下列幾個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)參數(shù)來(lái)確定可信限:①算術(shù)平均值(x)代表一組OD值數(shù)的平均值。②標(biāo)準(zhǔn)差(s)③變異系數(shù)(cv)，第8頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三次數(shù)質(zhì)控血清ODCut-off值ODS/CO值10.1800.1051.7120.1900.1051.8130.2000.1051.9040.2280.1051.8150.1370.1051.0960.2210.1052.1070.1500.1051.4380.1700.1051.6290.1800.1052.14100.1500.1051.43110.2000.1051.90120.1420.1051.35130.2100.1052.00140.2210.1051.52150.1800.1051.71160.1900.1051.81170.1600.1051.52180.2210.1052.10190.2100.1052.00200.1500.1051.43

范例：參考鄭懷競(jìng)主編《免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)與室內(nèi)質(zhì)控》，1997年出版。

第9頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三x

計(jì)算公式為：

Σx

x=──N

s

計(jì)算公式為：───────∑(xn-x)2

s=───────N

cv

計(jì)算公式為：

s

cv=──x100%

x

第10頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三

通過(guò)上表，計(jì)算S/CO值的均值（x），標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（cv）

x=1.72s=0.29cv=16.9%

根據(jù)以上數(shù)據(jù)繪制室內(nèi)質(zhì)控框架圖,開(kāi)始質(zhì)量控制次數(shù)日期質(zhì)控血清ODCut-off值S/CO值217.40.1600.1051.52227.70.1900.1051.81237.80.2000.1051.90247.110.2280.1051.81257.120.1390.1051.10267.150.2210.1052.10277.160.1500.1051.43287.180.1700.1051.62297.190.2250.1052.14第11頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)控圖(Levey-Jennings控制圖)第12頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)控圖的判定和分析

如果檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)時(shí)，質(zhì)控對(duì)照值超出

2s，則本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受(失控)。

位移：如果幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(3-5次)都落在均值(中心線)的一邊則稱之為位移，通常表示存在大的變化(失控)。引起位移的原因有使用新批號(hào)的試劑盒、使用新試劑、實(shí)驗(yàn)員的更換、孵育溫度的改變、儀器(移液器)故障等。

第13頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)控圖的判定和分析

趨勢(shì)：當(dāng)幾個(gè)連續(xù)質(zhì)控對(duì)照值(5-7個(gè))幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱之為趨勢(shì)(失控)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起，如試劑失效和移液器逐漸不準(zhǔn)確等。發(fā)生漂移和趨勢(shì)的最常見(jiàn)的原因是試劑(如酶標(biāo)記物)或?qū)φ盏氖?。?4頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)

a．可以先進(jìn)行最佳條件下的變異測(cè)定，即在最佳條件下(人、儀器、試劑、實(shí)驗(yàn)室等因素)對(duì)同一批質(zhì)控血清連續(xù)進(jìn)行測(cè)定20次以上，獲得一組數(shù)據(jù)，求x

和s值。然后求出常規(guī)條件下的x

和s。如果常規(guī)條件下的x

和s

值與最佳條件下的x和s值比較接近，則可以接受。若不作最佳條件下的測(cè)定，可以用本室以往處于控制狀態(tài)下的數(shù)值替代。b．采用S/CO比值制圖要比單用OD或A值制圖的方法給出更為精確的評(píng)估，因?yàn)樗鼘⒚看?每天OD值的浮動(dòng)考慮在內(nèi)。從S/CO質(zhì)控圖中可以直觀地發(fā)現(xiàn)外部對(duì)照值的漂移和趨勢(shì)。第15頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)c．

由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月(月末)定期召開(kāi)質(zhì)量控制會(huì)，討論本月檢測(cè)的質(zhì)量控制情況。檢驗(yàn)人員在每次檢驗(yàn)之前，了解一下質(zhì)控圖的結(jié)果，做到心中有數(shù)。d．

建議長(zhǎng)期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒。第16頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)e．使用新批號(hào)或使用不同廠家的試劑盒都必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。原則上，如果改用新批號(hào)試劑盒，應(yīng)重新制作室內(nèi)質(zhì)控框架圖，并建議對(duì)新舊兩批試劑盒進(jìn)行平行性試驗(yàn)。f．

發(fā)現(xiàn)全部對(duì)照值劇烈位移，立即報(bào)告室主管，分析原因，若是試劑盒質(zhì)量問(wèn)題，立刻通知廠家。第17頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三質(zhì)量控制圖建立和分析的注意要點(diǎn)h．

外部和內(nèi)部陰性對(duì)照質(zhì)控血清出現(xiàn)高值傾向，應(yīng)該注意試劑、技術(shù)或設(shè)備出現(xiàn)問(wèn)題(如洗板機(jī)等)。i．

實(shí)驗(yàn)室配制新批次的外部對(duì)照質(zhì)控血清或變動(dòng)外部對(duì)照質(zhì)控血清的值時(shí)，必須重新計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，建立新的質(zhì)控圖。j．

操作者在測(cè)定質(zhì)控血清時(shí)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)控血清數(shù)據(jù)違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫(xiě)失控報(bào)告單，上交室負(fù)責(zé)人，由室負(fù)責(zé)人決定是否要發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。第18頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三第19頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三“即刻法”質(zhì)控采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，只需在常規(guī)條件下對(duì)外部質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定3次，按以下統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算，如連續(xù)測(cè)定3次的結(jié)果都在控制范圍之內(nèi)，即可對(duì)第3次結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。第20頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三“即刻法”的建立參見(jiàn)鄭懷競(jìng)主編《免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)評(píng)與室內(nèi)質(zhì)控》具體計(jì)算方法如下：先將測(cè)定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)計(jì)算X和s計(jì)算SI上限值和SI下限值第21頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三SI上限=X最大值

–XSSI下限= X-X最小值

S

將SI上限、SI下限與SI值表中的數(shù)字比較。第22頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三SI值表N n3s n2s N n3s n2s

3 1.15 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.33 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.44 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 102.412.1819 2.85 2.53 112.482.2320 2.88 2.56 第23頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)，表示該數(shù)據(jù)處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測(cè)定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時(shí)，說(shuō)明該值在2s-3s范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)，說(shuō)明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。第24頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三

處于“告警”和“失控”狀態(tài)的數(shù)值應(yīng)舍去，需重新測(cè)定該外部質(zhì)控血清和病人樣本。舍去的只是本次失控的數(shù)值及同時(shí)測(cè)定的樣本，其他次測(cè)定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)檢測(cè)的數(shù)值超過(guò)20次后,不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)計(jì)算,可以轉(zhuǎn)入常規(guī)的質(zhì)控圖的質(zhì)控。第25頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三21次質(zhì)控血清檢測(cè)S/CO值

次數(shù) S/CO值 次數(shù)S/CO值

1 1.71 12 1.35 2 1.81 13 2.00 3 1.90 14 1.52 4 1.81 15 1.71 5 1.09 16 1.81 6 2.10 17 1.52 7 1.43 18 2.10 8 1.62 19 2.00 9 2.14 20 1.43 10 1.43 21 1.52 11 1.90 第26頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三在第3次測(cè)定后按“即刻法”計(jì)算：n=3三次S/CO值從小到大排列為：

1.71 1.81 1.90

求出X=1.81,S=0.10

計(jì)算:SI下限= 1.81-1.71 =1.0 0.10 SI上限= 1.90-1.81 =0.9 0.10 查SI值表:n=3時(shí),n2s=1.15,n3s=1.15，SI上限和SI下限均小于n2s，表示該三次檢測(cè)數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi)。第27頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三在第5次測(cè)定后,按上法計(jì)算:n=51.09 1.71 1.81 1.81 1.90 X=1.66,S=0.33SI下限= 1.66-1.09 =1.73 0.33 SI上限= 1.90-1.66 =0.73 0.33 查SI值表：n=5時(shí),n2s=1.67,n3s=1.75

n2s(1.67)<SI下限(1.73)<n3s(1.75),SI下限值在n2s和n3s之間,說(shuō)明該值在2s~3s范圍，處于“告警”狀態(tài)，故本次數(shù)據(jù)及同時(shí)測(cè)定的樣本結(jié)果應(yīng)棄去后重新測(cè)定。第28頁(yè)，講稿共32頁(yè)，2023年5月2日，星期三第6次檢測(cè)，n仍為5進(jìn)行計(jì)算:n=51.711.811.811.90 2.10X=1.87,S=0.15SI下限= 1.87-1.71 =1.07