旱蓮草對衰老小鼠自由基代謝的影響【摘要】目的：探討旱蓮草對衰老小鼠體內(nèi)氧自由基代謝的影響.方法：以D半乳糖致亞急性衰老小鼠為模型,測定腦組織中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性及丙二醛(MAD)含量，腦細胞膜Na+K+ATP酶、Ca2+APT酶活性.結(jié)果：與模型組比較,旱蓮草組可明顯提高腦組織SOD()和GSHPX()的活性；提高腦細胞Na+K+ATP酶()、Ca2+APT酶()活性，降低MDA含量().結(jié)論：旱蓮草具有明顯的抗衰老作用，其作用機制可能與其清除自由基的作用有關(guān).

【關(guān)鍵詞】旱蓮草；自由基；衰老

0引言

旱蓮草為菊科一年生草本植物鱧腸Ecliptaprostratal的全草，江南諸省均有分布，為常用中藥之一.祖國醫(yī)學認為旱蓮草入肝、腎經(jīng)，具有滋陰補腎、涼血止血之功效.主治牙齒松動，須發(fā)早白，眩暈耳鳴，陰虛血熱之吐血、尿血、便血、崩漏等.旱蓮草對老齡小鼠氧自由基代謝影響少見報道，我們采用D半乳糖致亞急性小鼠衰老模型，觀察研究旱蓮草的抗衰老作用,初步探討其作用機制.

1材料和方法1材料D半乳糖.超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽過氧化物酶，Na+K+ATP酶、丙二醛(MDA)檢測試劑盒.旱蓮草購自河南省南陽市醫(yī)藥公司.751型紫外分光光度計;XHF21高速離心機;XW280A旋渦混合器;電子分析天平;電動玻璃勻漿機.雄性昆明種小鼠50只，體質(zhì)量(25±5)g，由南陽醫(yī)學高等?？茖W校實驗動物中心提供.

方法旱蓮草水煎劑的制備取旱蓮草500g加自來水2500mL煎煮30min,四層紗布過濾，藥渣用2000mL自來水煎煮30min過濾，合并濾液，濃縮至1kg/L,高壓滅菌,4℃冰箱保存?zhèn)溆?

動物分組及給藥將50只小鼠隨機分成5組，每組10只，即空白對照組，模型組，旱蓮草低、中、高劑量組.實驗組分別以8g/(kg?d),16g/(kg?d),24g/(kg?d)旱蓮草煎液灌胃給藥，1次/d.對照組、模型組每日灌胃等量生理鹽水.

造模方法模型組和旱蓮草低、中、高劑量組每日頸背部皮下注射10g/LD半乳糖g/，空白對照組注射等量生理鹽水.

小鼠腦組織勻漿制備給D半乳糖及受試藥42d后,斷頭處死小鼠，迅速取出小鼠腦，用冰冷的生理鹽水洗2次,濾紙拭干稱質(zhì)量，剪碎組織塊后，倒入勻漿瓶中，量取9倍生理鹽水，先取少量倒入裝有組織塊的勻漿瓶中，冰水中勻漿15min，然后將余下的生理鹽水加入，制成100g/L的腦組織勻漿.

腦組織SOD酶、GSHPX酶活力及MDA含量測定①腦組織SOD酶活力的測定：取上述腦組織勻漿4000r/min離心15min，取上清液5μL，按試劑盒說明書方法，測定A值；②腦組織GSHPX酶活力的測定：取腦組織勻漿上清液，按試劑盒說明書方法，測定A值；③腦組織MDA含量測定：以硫化巴比妥比色法取勻漿上清液，制備標準管、空白管、測定管，分別在532nm處1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，測A值.

腦組織細胞膜Na+K+ATP酶、Ca2+ATP酶活性測定取腦組織勻漿以10625g離心20min，按試劑盒說明書提取細胞膜測Na+K+ATP酶活性.

統(tǒng)計學處理：實驗數(shù)據(jù)用x±s表示,采用方差分析處理數(shù)據(jù).

2結(jié)果

旱蓮草對D半乳糖亞急性衰老小鼠腦SOD，GSHPX，MDA含量的影響給予D半乳糖后,與對照組比較，小鼠腦中的MDA含量明顯增加(),SOD，GSHPX的活性和腦細胞膜明顯下降().同時給予旱蓮草制劑組能明顯降低腦中的MDA含量,提高SOD，GSHPX的活性(表1).

表1旱蓮草對D半乳糖衰老模型小鼠腦組織中SOD，GSHPX，MDA含量影響

，vs對照；，vs模型.

旱蓮草對D半乳糖亞急性衰老小鼠腦細胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性的影響給予D半乳糖后,與對照組比較，小鼠腦細胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性明顯降低()，同時給予旱蓮草制劑組能明顯提高腦細胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶的活性.

表2旱蓮草對D半乳糖亞急性衰老小鼠腦細胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶活性的影響

，vs模型；vs對照.

3討論

機體衰老的分子機制包括諸多因素，而自由基的損傷在衰老機制的研究中占有重要的地位.機體在代謝過程中可產(chǎn)生羚自由基(HO-),琉自由基(RS-),氫過氧物自由基(HO2)等活性氧，這些自由基組織內(nèi)一旦生成，則可損傷鄰近的生物膜或其它組織生物大分子包括糖類、蛋白質(zhì)、DNA和脂質(zhì)，使組織遭受損傷.尤其是使DNA堿基發(fā)生羥化等修飾及多核昔酸鏈斷裂，使DNA的復制與轉(zhuǎn)錄受到嚴重干擾，加速機體的衰老過程［1-2］.細胞內(nèi)Ca2+的超載也與衰老密切相關(guān)［3］.

D半乳糖所致的亞急性癡呆模型，已為大多學者所公認，長期注射D半乳糖使其在細胞內(nèi)大量集聚，造成代謝紊亂，導致過多自由基的產(chǎn)生.體內(nèi)存在的氧化防御系統(tǒng)包括超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘膚過氧化物酶(GSHPX)和過氧化氫酶(CAT)等，對抗氧化應(yīng)激反應(yīng)，清除機體內(nèi)產(chǎn)生的自由基.

本結(jié)果證實旱蓮草可以減少衰老小鼠腦組織中MDA的產(chǎn)生，增加SOD,GSHPX的活性.旱蓮草通過減少腦中氧自由基的產(chǎn)生，增強清除氧自由基的能力，提高機體抗氧化的功能，抑制機體、組織、細胞的過氧化過程.并能明顯提高腦細胞Na+K+ATP酶及Ca2+ATP酶的活性，防止細胞內(nèi)Ca2+超載而延緩衰老.

【參考文獻】

［1］包金風，包金云，李錦明，等.腦力智寶對D半乳糖所致亞急性衰老小鼠的抗衰老作用及機制［J］.中國老年病學雜志，2004,24(8):742-