8/8同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見稿）一、前言同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來源組織為原料經(jīng)加工或組成的產(chǎn)品。我國(guó)目前對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測(cè)血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對(duì)人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測(cè)血清中的病毒核酸。但是，盡管對(duì)供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，以及生產(chǎn)過程中帶入外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中采用有效的病毒滅活工藝，并對(duì)病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗(yàn)證。本指導(dǎo)原則是對(duì)同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。本指導(dǎo)原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的修訂版。主要修訂內(nèi)容包括：修改指導(dǎo)原則中相關(guān)語言描述；完善指示病毒類型及舉例的相關(guān)描述；調(diào)整病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則。二、適用范圍本指導(dǎo)原則適用于需要對(duì)生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的同種異體植入性醫(yī)療器械。三、基本要求（一）常用的病毒滅活方法同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮以下問題，包括病毒滅活效果的驗(yàn)證；病毒滅活工藝對(duì)產(chǎn)品性能的影響；病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。常用的病毒滅活方法舉例如下：1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的病毒滅活方法。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運(yùn)用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。2.干熱滅活法干熱滅活法主要用于凍干制品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已為實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證和臨床應(yīng)用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。干熱滅活法的優(yōu)勢(shì)是可用于凍干后的同種異體植入性醫(yī)療器械。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性、凍干工藝和產(chǎn)品水分殘留量等。3.γ射線輻照滅活法γ射線輻照滅活法的主要優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無有害物質(zhì)殘留、無明顯溫度升高等。該方法主要通過破壞核酸而滅活病毒。由于病毒在不同介質(zhì)中對(duì)射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時(shí)，應(yīng)去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。4.過氧乙酸-乙醇滅活法過氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。過氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒（PV）、HIV、偽狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細(xì)小病毒（PPV）等多種病毒，其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品過氧乙酸殘留量。5.乙醇滅活法乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對(duì)多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分，應(yīng)采用浸泡處理，采用該方法時(shí)應(yīng)考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。（二）病毒滅活工藝的驗(yàn)證1.指示病毒的選擇應(yīng)選擇可能污染的病毒，或理化性質(zhì)相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無包膜等方面應(yīng)具有代表性，應(yīng)包括一種對(duì)物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，應(yīng)至少選擇四類指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應(yīng)包括HIV和HAV、HBV、HCV的指示病毒表1可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及可選用的指示病毒（舉例）病毒基因組包膜大?。╪m）指示病毒舉例HIVRNA有80-100HIVHAVRNA無20Polio病毒、EMCVHBVDNA有45DHBV、PRVHCVRNA有40-60BVDV、Sindbis病毒B19DNA無20CPV、PPV注：DHBV：鴨乙型肝炎病毒；CPV：犬細(xì)小病毒。2.染毒方法由于同種異體植入性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，應(yīng)盡量模擬植入材料的病毒負(fù)載方式，同時(shí)考慮材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，建議采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應(yīng)至少≥106/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。3.方案設(shè)計(jì)（1）試驗(yàn)分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對(duì)照組，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議至少包括細(xì)胞空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組、樣品細(xì)胞毒性對(duì)照組或滴定前進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)、病毒滅活方法終止對(duì)照組及試驗(yàn)組。其中，病毒對(duì)照組的滴度是計(jì)算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果對(duì)照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對(duì)照組相當(dāng)或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時(shí)間終止作用。試驗(yàn)組至少應(yīng)有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動(dòng)力學(xué)，包括滅活動(dòng)力學(xué)曲線。（2）觀察指標(biāo)：①滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。②病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。（3）病毒滅活效果的判定應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評(píng)價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。①所選擇的病毒是否適宜，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。②病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過與病毒滅活后測(cè)定的殘留病毒量的比較，計(jì)算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測(cè)方法的靈敏度造成檢測(cè)出的病毒降低系數(shù)接近但小于4logs時(shí)，應(yīng)盲傳三代，如無病毒檢出，亦可認(rèn)為是有效地去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗(yàn)證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過程中估計(jì)去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數(shù)量的總和。但是由于驗(yàn)證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1log，則不宜將其計(jì)算在總量中。③病毒滅活動(dòng)力學(xué)：病毒滅活通常不是簡(jiǎn)單的一級(jí)反應(yīng)，評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動(dòng)力學(xué)。需以作圖的形式報(bào)告滅活動(dòng)力學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時(shí)才達(dá)到最低檢出限度值，則不能認(rèn)為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對(duì)該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。4.病毒滅活工藝驗(yàn)證原則（1）若申請(qǐng)人采用一個(gè)病毒滅活工藝，應(yīng)同時(shí)對(duì)有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒等四類病毒或其指示病毒（參見表1）的滅活效果均達(dá)到4logs以上，可認(rèn)為是有效病毒滅活工藝。（2）若申請(qǐng)人采用一個(gè)病毒滅活工藝，無法滿足（1）的要求，建議申請(qǐng)人生產(chǎn)過程中采用兩種（或兩種以上）不同滅活原理的病毒滅活工藝，并分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證，保證每個(gè)病毒有至少一個(gè)滅活工藝可使其滅活效果達(dá)到4logs以上。（3）若采用的病毒滅活/去除工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)產(chǎn)品來源、采集及過程控制情況以及對(duì)患者的風(fēng)險(xiǎn)/受益分析來判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低系數(shù)仍需達(dá)到4logs以上。5．舉例說明病毒滅活效果的判斷．其他需考慮的問題毒滅活效果的影響。（4）病毒滅活工藝對(duì)不同類型病毒滅活的選擇性。（三）病毒滅活工藝的再驗(yàn)證生產(chǎn)過程發(fā)生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時(shí)；被滅活前產(chǎn)品的組成或pH值發(fā)生改變時(shí)，均需對(duì)病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗(yàn)證。四、名詞解釋1．同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。2．植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：－全部導(dǎo)入人體；－替代上皮表面或眼表面；通過外科