（XX）糧油食品有限公司Oils,Grains&FoodstuffsCo.,Ltd負(fù)責(zé)部門品管部精密儀器操作規(guī)程編號(hào):WI-PG-230版本:A/1簽發(fā)時(shí)間:頁(yè)次:核定:（簽字）簽發(fā):（簽字）發(fā)文范圍:品管部油化、原糧化驗(yàn)室版本修訂歷史記錄序號(hào)修訂內(nèi)容修訂人修訂日期版本備注1新版范天然2016-07-15A/02增加近紅外設(shè)備使用說(shuō)明、增加自產(chǎn)氮?dú)獾臋z測(cè)、增加粕中ZEA、AFT、DON的檢測(cè)、增加了氣相色譜的維護(hù)3目錄TOC\o"1-2"\h\z\u第一部分：近紅外掃描儀 3一、近紅外操作規(guī)程 3第二部分：氣相色譜 17二、脂肪酸甲酯制備與組成分析 17三、植物油中溶劑殘留的測(cè)定 19四、粕中殘留溶劑的測(cè)定 22五、正己烷純度的測(cè)定 25六、氣相儀器的使用 26第三部分：液相色譜 36七、油脂中維生素A和維生素E含量的檢測(cè) 36八、FAD中維生素E含量的檢測(cè) 38九、油脂、谷物及其制品中苯并(a)芘的測(cè)定 40十、油脂中TBHQ含量的測(cè)定 43十一、油脂、米糠或米糠粕中玉米赤霉烯酮的檢測(cè) 46十二、食品中黃曲霉毒素的測(cè)定 50十三、液相色譜儀基本操作 58第三部分：轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè) 60十四、水稻及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法 60十五、水稻及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分快速測(cè)試條檢測(cè)法 84第四部分：氮?dú)鈾z測(cè) 85十六、食品級(jí)氮?dú)庵幸谎趸技岸趸己繖z測(cè) 85十七、食品級(jí)氮?dú)庵形⒘克值臋z測(cè)——露點(diǎn)法 88十八、食品級(jí)氮?dú)庵形⒘垦醯臋z測(cè)——原電池法 89第一部分：近紅外掃描儀儀器型號(hào)：波通DA7200一、近紅外操作規(guī)程1.收集項(xiàng)目的建立1.1點(diǎn)擊“項(xiàng)目”、“創(chuàng)建新項(xiàng)目”。1.2項(xiàng)目類型選“數(shù)據(jù)采集”，并對(duì)項(xiàng)目進(jìn)行命名，然后點(diǎn)“下一步”。1.3對(duì)單擊“保存光譜到文件”一欄打鉤，點(diǎn)擊“下一步”。1.4設(shè)置“重復(fù)測(cè)量”和“裝樣次數(shù)”為“2”，即裝樣兩次，每裝樣一次掃描兩次，每樣品共掃描4次。其他設(shè)置如下圖。點(diǎn)擊“下一步”。1.5對(duì)要收集的數(shù)據(jù)類型進(jìn)行“標(biāo)注”，如要收集灰分值和蛋白質(zhì)含量可分別將“Comp0”、“Comp1”設(shè)置為“Ash”、“Protein”。點(diǎn)擊“下一步”。名稱不能用全中文，因?yàn)閮?chǔ)存收集數(shù)據(jù)的“.db”文件不兼容中文，全中文會(huì)顯示為“#”，可用中文加字母，這樣既便于閱讀又能通過(guò)字母進(jìn)行區(qū)分，如“灰分A”、“蛋白P”。1.6進(jìn)行輸入時(shí)可用鍵盤(pán)輸入也可點(diǎn)擊“...”用軟鍵盤(pán)進(jìn)行輸入。項(xiàng)目建立完畢后對(duì)“項(xiàng)目創(chuàng)建信息：”點(diǎn)擊“是”調(diào)用快捷鍵編輯器。1.7在“沒(méi)有使用的項(xiàng)目<Products>”一欄找到剛剛建立的項(xiàng)目，單擊并按住拖動(dòng)到“菜單上顯示的項(xiàng)目文件：”一欄，并且可在“快捷菜單上顯示的項(xiàng)目名：”一欄對(duì)顯示名進(jìn)行修改。點(diǎn)擊“OK”，項(xiàng)目創(chuàng)建完成。新的收集項(xiàng)目建立時(shí)，由于系統(tǒng)原因，第一個(gè)收集的數(shù)據(jù)所有常規(guī)值不能設(shè)置為0（可隨意拿一個(gè)樣品進(jìn)行收集并將所有常規(guī)值設(shè)置為100，在建立曲線時(shí)該數(shù)據(jù)應(yīng)刪除）。2.數(shù)據(jù)的收集2.1裝樣方法2.1.1適用于米糠、膨化米糠、米糠粕、芝麻餅粕、油菜籽、大米、米粉等均一性較好且顆粒較小的樣品。將樣品混勻、分樣后倒入裝樣盤(pán)（常用且優(yōu)先使用的為直徑16cm的裝樣盤(pán)，樣品較少時(shí)可用直徑9.5cm或7.5cm的裝樣盤(pán)），倒入時(shí)倒入多量樣品，使高出裝樣盤(pán)。然后用直尺將高出樣品刮平，刮平時(shí)勿擠壓物料。2.1.2直條烘干裝樣標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)附件《直條烘干裝樣及掃描標(biāo)準(zhǔn)》2.2數(shù)據(jù)收集2.2.1打開(kāi)收集項(xiàng)目，將裝好的樣品放于近紅外上，在“值”一欄輸入樣品對(duì)應(yīng)常規(guī)項(xiàng)目的檢測(cè)值，按“分析”進(jìn)行掃描，并重復(fù)裝樣一次再次掃描。2.2.2收集足夠數(shù)據(jù)（最好大于100個(gè)）后即可進(jìn)行曲線的建立，收集樣品常規(guī)檢測(cè)值應(yīng)在區(qū)間內(nèi)較均勻的分布，且收集樣品常規(guī)檢測(cè)值的區(qū)間應(yīng)至少包含待掃描樣品常規(guī)檢測(cè)值的區(qū)間，否則掃描值很可能不準(zhǔn)。3.曲線的建立3.1導(dǎo)出“*.dx”文件3.1.1點(diǎn)擊“工具”、“實(shí)用功能”、“導(dǎo)出”、“校準(zhǔn)數(shù)據(jù)->JCAMP*.dx文件”，選擇前述收集的要導(dǎo)出的“.db”文件，并選擇要導(dǎo)出到的文件夾，點(diǎn)擊“確定”。3.1.2點(diǎn)擊“Average”一欄打鉤，“Marker”一欄標(biāo)記為“x”表示該數(shù)據(jù)不會(huì)被導(dǎo)出，注意不能將所有數(shù)據(jù)均標(biāo)記為“x”。3.2導(dǎo)入dx文件點(diǎn)擊打開(kāi)軟件“TheUnscramblerStartup”，點(diǎn)擊“OK”進(jìn)入。點(diǎn)擊“File”、“Import”、“JCAMP-DX”導(dǎo)入dx文件。3.3刪除異常光譜數(shù)據(jù)3.3.1按下圖依序點(diǎn)擊“1”、“2”所示區(qū)域，點(diǎn)擊“3”所示區(qū)域查看光譜異常曲線。如圖所示異常的光譜曲線明顯與其他光譜曲線不同，記下異常曲線數(shù)目。3.3.2點(diǎn)擊“Modify”、“SortSample”。在“SortSample”對(duì)話框中，“Sample”一欄選擇“AllSamples”，“Sortby”一欄選擇“Values”，將光譜數(shù)據(jù)按值（Values)上升排序。根據(jù)上一步異常光譜曲線數(shù)目選擇最后幾行（相同數(shù)量），點(diǎn)擊左上方快捷工具欄的黑色“X”刪除異常數(shù)據(jù)。再次查看光譜曲線，異常數(shù)據(jù)已刪除。3.4刪除異常常規(guī)數(shù)據(jù)選中要建曲線的一列（如建立含油曲線則點(diǎn)擊含油常規(guī)數(shù)據(jù)所在列），點(diǎn)擊“Modify”、“SortSample”。在“SortSample”對(duì)話框中，“Sample”一欄選擇“AllSamples”，“Sortby”一欄選擇“Values”。刪掉一些無(wú)用或錯(cuò)誤數(shù)據(jù)，如米糠粕含油曲線中含油為0或15.2%的數(shù)據(jù)可以刪去。3.5對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理點(diǎn)擊“Modify”、“Transform”、“User-defined”，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理。在“User-definedTransformation”對(duì)話框中，“Samples”選擇“AllSamples”，由于是對(duì)141條近紅外光譜曲線求導(dǎo)，故“Variables”（自變量）選擇“NEARINFRAREDSP[141]”（141條近紅外曲線），“Function”（函數(shù)）選擇“Harmonisation”（和諧的）。點(diǎn)擊“OK”。3.6回歸分析3.6.1點(diǎn)擊“Task”(任務(wù)）、“Regression”（回歸分析)。3.6.2在彈出的“Regression”對(duì)話框中，點(diǎn)擊“Samples”，“Sampleset：”一欄選擇“AllSamples”，“ValidationMethod”（驗(yàn)證方式）選擇“CrossValidation”（交叉驗(yàn)證)。3.6.3點(diǎn)擊“X-variables”，，“Variable”一欄選擇“NEARINFRAREDSP[141]”。3.6.4點(diǎn)擊“Y-variables”（Y變量），點(diǎn)擊“Define”（定義)，彈出的“SetEditor”對(duì)話框中點(diǎn)擊“Add”。在彈出的“NewVariableSet”對(duì)話框中，“Name：”一欄輸入名稱（如灰分曲線則可輸入Ash)命名，然后在“Interval（Validrangeis1though147)”一欄輸入欲建曲線常規(guī)值所在列（或點(diǎn)“select”手動(dòng)選擇)。點(diǎn)擊“OK”開(kāi)始運(yùn)算。運(yùn)算結(jié)束后點(diǎn)擊“View”。3.7模型的建立3.7.1記錄紅色參數(shù)“RMSE”（標(biāo)準(zhǔn)誤差，它不同于標(biāo)準(zhǔn)差。標(biāo)準(zhǔn)誤差是觀測(cè)值與真值偏差的平方與觀測(cè)次數(shù)n比值的平方根，能夠很好地反映出測(cè)量的精密度，而標(biāo)準(zhǔn)差是用來(lái)衡量一組數(shù)自身的離散程度）和“R-Square”（R平方，即擬合度)。3.7.2點(diǎn)擊“Plot”、“SampleOutliers”（離群樣本)，在彈出的對(duì)話框中選擇“OK”。先鼠標(biāo)單擊要?jiǎng)h除點(diǎn)所在框，再單擊點(diǎn)選要?jiǎng)h除的一個(gè)點(diǎn)。刪點(diǎn)時(shí)一次刪除一個(gè)點(diǎn)，優(yōu)先刪除較高的點(diǎn)。3.7.3選好要?jiǎng)h的點(diǎn)后，點(diǎn)擊“Plot”、“RecalculateWithoutMarked”，當(dāng)RMSE變小，R-square變大時(shí)說(shuō)明刪點(diǎn)是正確的，反之則可點(diǎn)圖示右上角黑色“×”退回刪點(diǎn)前那步（紅色“×”為關(guān)閉軟件）。3.7.4可點(diǎn)擊“Plot”、“ScoresandLoadings”查看偏差范圍，并可據(jù)此刪點(diǎn)。3.7.5總刪點(diǎn)數(shù)不宜超過(guò)常規(guī)數(shù)據(jù)總數(shù)的10%，且當(dāng)某一區(qū)間常規(guī)數(shù)據(jù)較少時(shí)則該區(qū)域刪點(diǎn)應(yīng)非常慎重（如米糠粕灰分?jǐn)?shù)據(jù)大于13.5的只有3個(gè)時(shí)，除非已知這三個(gè)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)，否則不宜刪除），得到滿意的RMSE和R-square值（如無(wú)論如何刪點(diǎn)二者值均不明顯變好時(shí)），刪點(diǎn)結(jié)束。3.7.6點(diǎn)擊“Saveas”（另存為)，在彈出的對(duì)話框中，點(diǎn)擊“SelectAll”，然后點(diǎn)擊“確定”保存曲線，選擇存儲(chǔ)的文件夾并對(duì)曲線命名。3.7.7曲線命名規(guī)則，樣品類型+常規(guī)類型+曲線建立日期+曲線制作人。4.分析項(xiàng)目的建立4.1點(diǎn)擊“項(xiàng)目”、“創(chuàng)建新項(xiàng)目”。4.2項(xiàng)目類型選“分析”，并對(duì)項(xiàng)目進(jìn)行命名，然后點(diǎn)“下一步”。4.3“光譜”欄點(diǎn)擊“下一步”。4.4打開(kāi)“C盤(pán)/pda7200/calibs”文件夾，選擇任意“.cdf”頻道文件，復(fù)制粘貼并重新命名。4.5在“預(yù)測(cè)”“使用文件中的校準(zhǔn)數(shù)據(jù)：”一欄找到并選擇前一步得到的“.cdf”頻道文件（該文件不一定使用于目前所建項(xiàng)目，故在步驟5中會(huì)對(duì)“.cdf”文件進(jìn)行修改），點(diǎn)擊“下一步”4.6“馬氏距離/杠桿值”一欄選擇“下一步”。4.7“斜率/截距”一欄默認(rèn)設(shè)置為0。4.8“參數(shù)”一欄“重復(fù)測(cè)量：”和“裝樣次數(shù)：”一欄設(shè)置為2，“樣品標(biāo)識(shí)：”一欄設(shè)置為“必需樣品ID”，點(diǎn)擊“下一步”。4.9“固定最小/固定最大值范圍”一欄可將“最小”和“最大”最大分別設(shè)置為0和100，點(diǎn)擊“下一步”。4.10“變量最大/最小范圍-選擇”一欄設(shè)置為“無(wú)”，點(diǎn)擊“下一步”?！白兞孔畲?最小范圍”一欄點(diǎn)擊“下一步”?！皡⒖挤治鲈O(shè)置”一欄點(diǎn)擊“下一步”?！皥?bào)表設(shè)置”一欄點(diǎn)擊“完成”4.11調(diào)用快捷鍵編輯器進(jìn)行編輯，方法參考“1.7”。5.頻道文件（cdf文件）的編輯5.1點(diǎn)擊“項(xiàng)目”、“編輯CDF文件”，打開(kāi)要編輯的頻道文件。5.2如圖“CAL1”至“CAL6”代表掃描項(xiàng)目一共使用的6條曲線，當(dāng)需使用更多曲線時(shí)可在下方增加。如圖編號(hào)“1”所示的分號(hào)必須處于圖示位置，不可放于其他行。編號(hào)“2”所示“MAX”表示曲線的數(shù)量，如一共有7條曲線則需改為7。編號(hào)“3”所示為掃描波長(zhǎng)分辨率（5nm），不用更改。5.2如圖編號(hào)“1”所示為掃描項(xiàng)目的名稱，名稱需與曲線對(duì)應(yīng)，名稱應(yīng)如圖所示采用中文加字母的方式。編號(hào)“2”所示區(qū)域應(yīng)根據(jù)曲線數(shù)量進(jìn)行修改。編輯完后應(yīng)注意空格的刪除，可用鼠標(biāo)選定一定區(qū)域，如有空格會(huì)出現(xiàn)如編號(hào)“3”所示的藍(lán)色條。5.3點(diǎn)擊“文件”、“保存”保存頻道文件。6.掃描項(xiàng)目的應(yīng)用6.1掃描樣品的命名6.1.1榨油廠生產(chǎn)膨化米糠、米糠粕命名格式：送樣時(shí)間點(diǎn)數(shù)（即幾點(diǎn)的樣，1到24表示）+掃描人名字拼音首字母縮寫(xiě)。如：17yw。6.1.2自產(chǎn)米糠命名格式：ZC+米糠種類+掃描人，例如：ZC65002tzh6.1.3主要為到貨米糠或芝麻餅等油料，命名格式：車牌+掃描人+1/2(初檢為1，復(fù)檢為2）。例如：GA62940tzh1。6.1.4查庫(kù)，主要為查庫(kù)的粕類樣品，命名格式為：倉(cāng)庫(kù)+垛位+掃描人+位置。例如：ZA3tzhm，Y101A3tzh4（左、中、右分別用L、M、R表示）。6.1.5送檢或其他，主要為外來(lái)送檢樣品，命名格式：SJ/QT+樣品名+掃描人。例如：SJjinxitzh。6.2掃描方法掃描時(shí)裝樣及掃描方法應(yīng)與收集時(shí)裝樣方法對(duì)應(yīng)相同，詳見(jiàn)步驟2。6.3曲線驗(yàn)證6.3.1新的曲線建立后應(yīng)用有對(duì)應(yīng)項(xiàng)目常規(guī)數(shù)據(jù)的樣品進(jìn)行掃描，并將常規(guī)數(shù)據(jù)及掃描數(shù)據(jù)填寫(xiě)于表格，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，一條曲線的對(duì)比數(shù)據(jù)最好不少于20組，表格樣式可參考附件《米糠、米糠粕掃描與常規(guī)數(shù)據(jù)對(duì)比》。如掃描值與常規(guī)值存在差值，但差值的標(biāo)準(zhǔn)差較小，可進(jìn)行截距調(diào)整。如掃描值與常規(guī)值差值較大，且差值的標(biāo)準(zhǔn)差也較大，則該曲線不建議使用。經(jīng)數(shù)據(jù)分析后曲線可以使用時(shí)，經(jīng)主任及經(jīng)理簽字認(rèn)可后即可投入使用，未經(jīng)主任及經(jīng)理簽字認(rèn)可的不能作為報(bào)送數(shù)據(jù)。6.3.2老的曲線也應(yīng)定期進(jìn)行掃描值與常規(guī)值對(duì)比驗(yàn)證（在收集收據(jù)時(shí)順帶進(jìn)行驗(yàn)證），如掃描值與常規(guī)值連續(xù)存在較大差異也應(yīng)參考步驟6.3.1進(jìn)行驗(yàn)證。7.項(xiàng)目的刪除7.1點(diǎn)擊“用戶”、“系統(tǒng)管理員”、“快捷鍵編輯器”，雙擊“Products.ini”，將要?jiǎng)h除的項(xiàng)目從“菜單上顯示的項(xiàng)目文件：”一欄拖動(dòng)到“沒(méi)有使用的項(xiàng)目<Products>”一欄。7.2打開(kāi)“C:\pda7200\Data\Products”文件夾，找到要?jiǎng)h除的”.prj”項(xiàng)目文件并刪除。8.掃描與收集數(shù)據(jù)的查看8.1點(diǎn)擊“視圖”、“光譜數(shù)據(jù)庫(kù)”，打開(kāi)對(duì)應(yīng)“db”（收集數(shù)據(jù)文件）或“DB”（掃描數(shù)據(jù)文件）文件即可。9.儀器的維護(hù)與數(shù)據(jù)備份9.1儀器維護(hù)9.1.1當(dāng)儀器散熱較差（儀器兩側(cè)溫度較以往偏高較多）或電腦運(yùn)行速度明顯變慢時(shí)需對(duì)儀器清灰，清灰主要需求對(duì)象是其電腦部分。清灰時(shí)先拆開(kāi)儀器，然后用吸塵器將灰洗掉（用吹風(fēng)類機(jī)器清灰會(huì)存在將灰擴(kuò)散到儀器光路部分的風(fēng)險(xiǎn)）9.1.2陶瓷參考盤(pán)較臟時(shí)應(yīng)在其彈出時(shí)用無(wú)香味的橡皮擦進(jìn)行清潔;9.1.3打雷時(shí)及時(shí)關(guān)閉儀器并拔掉儀器電源;9.1.4每周應(yīng)至少兩次打開(kāi)儀器后方網(wǎng)格，進(jìn)行清灰；9.1.5較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)應(yīng)及時(shí)關(guān)閉儀器（關(guān)閉電腦并關(guān)掉后方電源）。9.2數(shù)據(jù)備份9.2.1每月應(yīng)將“C/pda7200”文件夾復(fù)制到近紅外電腦F盤(pán)進(jìn)行備份。9.2.2每三個(gè)月左右備份至網(wǎng)絡(luò)硬盤(pán)。10.附件10.1直條烘干裝樣及掃描標(biāo)準(zhǔn)10.2米糠、米糠粕掃描與常規(guī)數(shù)據(jù)對(duì)比第二部分：氣相色譜儀器型號(hào)：安捷倫7820A二、脂肪酸甲酯制備與組成分析1.原理油樣中甘油酯在堿性條件下與甲醇發(fā)生酯交換生成對(duì)應(yīng)脂肪酸甲酯，加入飽和食鹽水除去剩余甲醇和氫氧化鉀等，將上層清液注入氣相色譜系統(tǒng)分離各脂肪酸甲酯，通過(guò)與標(biāo)樣的保留時(shí)間對(duì)比定性，面積法確定油樣中各脂肪酸甲酯的百分含量。2.范圍適用于測(cè)定食用油脂中甘油酯的脂肪酸組成。3.參考方法GB/T17376-2008動(dòng)植物油脂脂肪酸甲酯制備4.試劑4.1正己烷；4.20.4mol/L氫氧化鉀的甲醇溶液（稱取2.3g氫氧化鉀溶于100mL無(wú)水甲醇中，橡膠塞瓶中保存,當(dāng)瓶中溶液用至剩三分之一時(shí)由于甲醇的揮發(fā)會(huì)導(dǎo)致氫氧化鉀濃度偏高，故應(yīng)重新配制）；4.3飽和食鹽水；4.4C4-C24脂肪酸甲酯標(biāo)樣。5.儀器及用具5.1氣相色譜儀帶氫火焰離子化檢測(cè)器；5.210mL具塞比色管；5.310μL進(jìn)樣針。6.操作步驟6.1試樣處理稱取100～150mg油樣，裝入10mL具塞比色管中，加入正己烷約2mL，稍事振搖，待油樣溶解后，再加入氫氧化鉀的甲醇溶液約2mL，混勻，在室溫下放置約30分鐘。再沿瓶壁加入飽和食鹽水至刻度線，靜置30min，待分層，用微量進(jìn)樣器取1μL(最多不超過(guò)3μL)上層清液進(jìn)氣相色譜系統(tǒng)分析，與標(biāo)樣保留時(shí)間對(duì)比定性，面積法確定百分含量。6.2氣相色譜條件6.2.1色譜柱：SP-2560內(nèi)徑0.25mm，長(zhǎng)100.0m，膜厚0.20μm；6.2.2前進(jìn)樣器：250℃，分流比120:1；6.2.3柱溫：0～47.95min179℃，48～70min，240℃；6.2.4前檢測(cè)器：280℃；6.2.5載氣（N2）：20mL/min；6.2.6氫氣：30mL/min；6.2.7空氣：350mL/min。7.注意事項(xiàng)7.1甲酯化的目的是使樣品衍生為低沸點(diǎn)的甲酯便于分析。本方法的原理是酯交換（GB/T17376-2008）；7.2KOH-甲醇溶液中KOH濃度的選擇，相對(duì)甲酯化率隨KOH濃度升高而提高，當(dāng)KOH濃度達(dá)到0.4mol/L時(shí)，幾種主要脂肪酸甲酯化率達(dá)到最大值。當(dāng)濃度進(jìn)一步達(dá)到1.0mol/L時(shí)，產(chǎn)物色譜峰面積會(huì)下降。這是因?yàn)镵OH-甲醇溶液既是甲酯化試劑又是皂化試劑（參考文獻(xiàn)8.2）；7.3有學(xué)者將本方法和酸法中酯化效果較好的1%硫酸-甲醇酯化法分別酯化脂肪和脂肪酸，結(jié)果表明本方法適合于甘油酯的甲酯化，脂肪酸酯化效率較低（參考文獻(xiàn)8.3）。國(guó)標(biāo)也提到游離脂肪酸及其鹽不會(huì)被氫氧化鉀酯化，所以本方法只能使甘油酯部分生成甲酯（GB/T17376-2008）。8.參考文獻(xiàn)8.15種脂肪酸甲酯化方法的酯化效率研究_黃崢8.2GC_FID甲酯化法測(cè)定橄欖油中六種脂肪酸_韓深8.3脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究_寇秀穎三、植物油中溶劑殘留的測(cè)定1.原理將植物油樣品放入密封的氣化瓶中，在規(guī)定溫度下，植物油中存在的揮發(fā)性殘留溶劑擴(kuò)散至液面上的氣相，經(jīng)一定時(shí)間達(dá)到氣相/液相間分配濃度的動(dòng)態(tài)到平衡時(shí)，取頂空氣體注入氣相色譜中測(cè)定峰面積，外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食用植物油中殘留溶劑含量的檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以浸出法提取的各種食用油中以六碳烷烴為主體的烴類溶劑殘留的檢驗(yàn)。3.參考方法GB/T5009.37-2003食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法SN/T0801.23-2002進(jìn)出口動(dòng)植物油及油脂溶劑殘留量檢驗(yàn)方法4.試劑4.1六號(hào)溶劑（已在生產(chǎn)中循環(huán)使用的回收溶劑）；4.2基體油（經(jīng)超聲或70℃開(kāi)放式加熱趕掉大部分殘留溶劑的一級(jí)油）。5.儀器及用具5.1氣相色譜儀帶氫火焰離子化檢測(cè)器；5.2100mL氣化瓶(輸液瓶)帶橡膠反口塞；5.31.5mL離心管；5.4100μL進(jìn)樣針；5.5水浴鍋（50℃±1）℃；5.61.8L塑料瓶帶蓋。6.操作步驟6.1試樣處理稱取25.00g混勻的試樣于氣化瓶，密塞后于50℃水浴鍋中加熱30min，取出后立即用進(jìn)樣針吸取100μL頂空氣體（與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)樣體積一致）注入氣相色譜后進(jìn)樣口，外標(biāo)法定量，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求出液上氣體中六號(hào)溶劑的含量。樣品進(jìn)樣前先用空氣將空針洗凈,并進(jìn)一針空針,在計(jì)算結(jié)果時(shí)減去空針殘溶數(shù)值.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取塑料瓶加入約1500g(精確至0.01g)基體油，用1.5mL離心管稱取約0.3g（精確至0.0001g）六號(hào)溶劑，稱重時(shí)蓋上離心管蓋。將離心管小心開(kāi)蓋并放入塑料瓶，迅速蓋好塑料瓶蓋，并振搖塑料瓶5～10min，得到六號(hào)溶劑含量約200ppm的待稀釋油樣。取五個(gè)氣化瓶，其中四個(gè)分別加入約24.88g、23.75g、18.75g、12.5g基體油，并將五個(gè)瓶加入適量前述待稀釋油樣，使五個(gè)氣化瓶中的油樣補(bǔ)充至約25.00g，并迅速塞上新的橡膠反口塞。得到六號(hào)溶劑含量分別約為1ppm、10ppm、50ppm、100ppm、200ppm的油樣，然后參考6.1試樣處理方法進(jìn)氣相色譜系統(tǒng)分析測(cè)定峰面積，扣除對(duì)應(yīng)使用空針的空白后五點(diǎn)定標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3氣相色譜條件6.3.1色譜柱：HP-5，內(nèi)徑0.32mm，長(zhǎng)30.0m，膜厚0.25μm；6.3.2后進(jìn)樣器：120℃，分流比10:1；6.3.3柱溫：120℃；6.3.4后檢測(cè)器：150℃；6.3.5載氣（N2）：30mL/min；6.3.6氫氣：30mL/min；6.3.7空氣：350mL/min。7.注意事項(xiàng)7.1頂空瓶法利用組分在氣相和液相中達(dá)到分配平衡，再吸取液上氣體進(jìn)樣分析。50℃加熱下一般低殘溶樣品30min可達(dá)到分配平衡（參考文獻(xiàn)8.1中3.1.2）；7.2在30～115℃溫度范圍內(nèi)，組分峰面積與溫度呈顯著指數(shù)關(guān)系，故溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響非常大，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意水浴鍋溫度的校正（參考文獻(xiàn)8.1中3.1.1）。由于水浴鍋水位的高低影響氣化瓶和水的接觸面積，進(jìn)而影響到氣化瓶的受熱效果。由于本方法目前所用的標(biāo)曲建立時(shí)水浴鍋水位為恰好使氣化瓶漂浮，故檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量選擇與此接近的水位；7.3氣化瓶體積的選擇，頂空瓶體積越大，氣體的提取越充分，平衡時(shí)間越短，但檢測(cè)靈敏度損失也越多（參考文獻(xiàn)8.1中3.1.3）。檢測(cè)時(shí)應(yīng)選用和標(biāo)曲建立時(shí)相同體積的氣化瓶；7.4國(guó)標(biāo)法中標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立采用了DMA對(duì)溶劑進(jìn)行稀釋，DMA能顯著降低油的黏度，提升移液準(zhǔn)確度，同時(shí)使標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液保存時(shí)間延長(zhǎng)（參考文獻(xiàn)8.1）。由于未購(gòu)買DMA本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立參考了行標(biāo)法中的稀釋方法，直接用大量油加入溶劑進(jìn)行配制。同時(shí)采用了將溶劑裝入密閉離心管再稱量的方法，減少溶劑稱量的誤差；7.5本方法目前所用標(biāo)曲建立時(shí)進(jìn)樣前先進(jìn)了空針，并在曲線建立時(shí)扣除了空針的峰面積，故檢測(cè)時(shí)應(yīng)據(jù)情況進(jìn)空針，并扣除空針的濃度檢測(cè)結(jié)果。8.參考文獻(xiàn)8.1食用油中溶劑殘留測(cè)定的若干影響因素分析_袁毅四、粕中殘留溶劑的測(cè)定1.原理將試樣放入密封的氣化瓶中，80℃水浴使殘留溶劑氣化達(dá)到平衡，取頂空氣體注入氣相色譜儀中測(cè)定峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，外標(biāo)法定量。2.范圍經(jīng)溶劑萃取食用油后得到的米糠粕、豆粕。3.參考方法GB/T5009.117-2003食用豆粕衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法4.試劑4.1六號(hào)溶劑（已在生產(chǎn)中循環(huán)使用的回收溶劑）；4.2蒸餾水。5.儀器及用具5.1氣相色譜儀帶氫火焰離子化檢測(cè)器；5.2100mL氣化瓶(輸液瓶)帶橡膠反口塞；5.3定性濾紙；5.41μL、100μL進(jìn)樣針；5.5水浴鍋（80℃處經(jīng)校正偏差小于±1℃）。6.操作步驟6.1試樣處理取100mL輸液瓶，將兩張直徑稍小于內(nèi)徑的圓形濾紙置于瓶?jī)?nèi)，向?yàn)V紙上加注0.5mL水，使濾紙附貼于瓶底，稱取2.00g粕，置于瓶?jī)?nèi)濾紙上，立即塞好橡膠反口塞，然后在80±2℃水浴鍋中加熱2h，樣品經(jīng)加熱氣化后，冷卻至室溫。用進(jìn)樣針取100μL頂空氣，注入氣相色譜后進(jìn)樣口，外標(biāo)法定量。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取五個(gè)頂空瓶，以1μL微量進(jìn)樣器沿壁注入0.1μL、0.2μL、0.3μL、0.4μL、0.5μL（V1)六號(hào)溶劑，迅速塞上橡膠反口塞，在80℃±2℃水浴中加熱2h，取出冷卻至室溫。用100μL微量進(jìn)樣器，按20μL、40μL、60μL、80μL、100μL取頂空氣分別注入色譜儀，以其色譜峰面積為縱軸，以對(duì)應(yīng)的試樣溶劑殘留量為橫軸，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣溶劑殘留量X由下式計(jì)算得出：式中：X——試樣溶劑殘留量，單位為毫克每千克（mg/Kg）；V1——溶劑取用量，單位為微升（μL）；D——溶劑的相對(duì)密度，0.7mg/μL；V2——標(biāo)準(zhǔn)頂空氣進(jìn)樣量，單位為微升（μL）；V3——試樣頂空氣進(jìn)樣量，單位為微升（μL）；V——頂空瓶容積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。6.3氣相色譜條件6.3.1色譜柱：HP-5，內(nèi)徑0.32mm，長(zhǎng)30.0m，膜厚0.25μm；6.3.2后進(jìn)樣器：120℃，分流比10:1；6.3.3柱溫：120℃；6.3.4后檢測(cè)器：150℃；6.3.5載氣（N2）：30mL/min；6.3.6氫氣：30mL/min；6.3.7空氣：350mL/min。7.注意事項(xiàng)7.1加水的作用，粕中加入一定量水，置于密閉容器中加熱時(shí)，粕中殘留溶劑會(huì)隨水蒸氣蒸發(fā)而揮發(fā)。如直接加到粕上，粕中水會(huì)分布不均，故需先加兩張濾紙，然后將水滴到濾紙上，再將粕放到濾紙上（參考文獻(xiàn)8.1）；7.2加水量的選擇，經(jīng)實(shí)驗(yàn)0.5mL較佳（參考文獻(xiàn)8.2中2.2）；7.3本方法的標(biāo)曲建立時(shí)，六號(hào)溶劑為生產(chǎn)使用過(guò)的溶劑，故與待測(cè)油樣溶劑組成較為接近。溶劑組成對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響主要因?yàn)轫斂諝庵蟹峙湎禂?shù)的差異（參考文獻(xiàn)8.3），而非響應(yīng)因子（見(jiàn)方法四、正己烷純度的測(cè)定中注意事項(xiàng)7.1）；7.4本方法的標(biāo)曲建立時(shí)，由于標(biāo)曲配制殘溶標(biāo)樣濃度較高，故未進(jìn)空針。檢測(cè)時(shí)可不進(jìn)空針，但進(jìn)樣前需反復(fù)抽拉用空氣洗凈空針。8.參考文獻(xiàn)8.1浸出油_粕中殘留溶劑的氣相色譜測(cè)定方法_付梅軒8.2粕中殘留溶劑測(cè)定實(shí)踐_耿聰8.3食用油中溶劑殘留測(cè)定的若干影響因素分析_袁毅五、正己烷純度的測(cè)定1.原理取色譜純正己烷標(biāo)樣注入氣相色譜儀確定保留時(shí)間，取樣品注入氣相色譜儀中,與標(biāo)樣保留時(shí)間對(duì)比定性，測(cè)定峰面積，面積法確定正己烷的百分比含量即為純度。2.范圍到貨浸出用六號(hào)溶劑3.參考方法暫無(wú)4.試劑4.1色譜純正己烷5.儀器及用具5.1氣相色譜儀帶氫火焰離子化檢測(cè)器；5.21μL進(jìn)樣針。6.操作步驟6.1樣品檢驗(yàn)1μL進(jìn)樣針取0.3μL樣品注入氣相色譜，峰面積法計(jì)算六號(hào)溶劑中正己烷百分含量。6.2氣相色譜條件6.2.1色譜柱：HP-5，內(nèi)徑0.32mm，長(zhǎng)30.0m，膜厚0.25μm；6.2.2后進(jìn)樣器：120℃，分流比50:1；6.2.3柱溫：40℃；6.2.4后檢測(cè)器：151℃；6.2.5載氣（N2）：25mL/min；6.2.6氫氣：30mL/min；6.2.7空氣：350mL/min。7.注意事項(xiàng)7.1烴類化合物在FID上相對(duì)質(zhì)量校正因子基本相同，由于六號(hào)溶劑中主要為烴類，故可直接采用峰面積法（參考文獻(xiàn)8.1）。8.參考文獻(xiàn)8.1顧惠祥、閆寶石.氣相色譜實(shí)用手冊(cè)（第2版）（文本暫無(wú)）六、氣相儀器的使用1.日?；静僮?.1開(kāi)機(jī)程序打開(kāi)氣瓶柜氣源（目前氣源為常開(kāi)故無(wú)需打開(kāi)），打開(kāi)計(jì)算機(jī)，打開(kāi)氣相電源開(kāi)關(guān)，點(diǎn)擊“軟件盤(pán)”，雙擊打開(kāi)“工作站”，雙擊圖標(biāo)“進(jìn)入工作站”進(jìn)入工作站。1.2方法的打開(kāi)與切換點(diǎn)擊“文件”、“方法”、“打開(kāi)”選擇“D盤(pán)/方法”文件夾，如分析脂肪酸組成則打開(kāi)“組分方法”文件夾下“組分最新方法2016####.met”，如分析殘溶等則打開(kāi)“殘溶等方法”文件夾的相關(guān)met文件。點(diǎn)擊“控制”、“下載方法”后，氣相開(kāi)始升降溫。儀器發(fā)出“噼里啪啦”聲（氫氣爆鳴）時(shí)儀器開(kāi)始自動(dòng)點(diǎn)火（目前由于空氣泵流量不足需人工對(duì)檢測(cè)器扇風(fēng)幫助其點(diǎn)火），如點(diǎn)火不成功，點(diǎn)擊軟鍵盤(pán)上的“關(guān)/否”“開(kāi)/是”點(diǎn)火。當(dāng)需切換方法時(shí)按前述方法找到要打開(kāi)的方法并下載方法即可。1.3運(yùn)行樣品當(dāng)工作站左側(cè)顯示“GC處于就緒狀態(tài)：等待預(yù)運(yùn)行”時(shí)表明可以進(jìn)樣，點(diǎn)擊“控制”、“單次運(yùn)行”，在“樣品ID”欄輸入樣品名稱。在“數(shù)據(jù)路徑”欄選擇合適數(shù)據(jù)保存路徑。點(diǎn)擊“開(kāi)始”，待右下方進(jìn)度條由黃色變?yōu)樽仙箝_(kāi)始進(jìn)樣。1.4樣品命名及數(shù)據(jù)保存路徑可在“數(shù)據(jù)文件”一欄通過(guò)設(shè)置對(duì)樣品默認(rèn)添加遞增編號(hào)、進(jìn)樣日期與時(shí)間、所用方法名稱等，由于目前使用默認(rèn)添加日期與時(shí)間時(shí)，進(jìn)樣日期可省去不寫(xiě)。罐區(qū)油樣：“罐號(hào)+油品種類+進(jìn)樣人名字”，例如：“TB3001一菜范祥”。到貨油樣：“供應(yīng)商名稱+油品種類”，例如：“加多寶四菜范小祥”。小包裝黃金比例：“黃金比例+罐號(hào)+進(jìn)樣人名字”，例如：“TC105黃金比例范中祥”。精煉廠出油：“日期+精煉+油品種類”，如“1111精煉一玉劉承新”。其他油樣：“油品基本信息+進(jìn)樣人名字”，例如：“1111環(huán)比范大祥”。數(shù)據(jù)保存路徑設(shè)置：組分樣品保存在D盤(pán)/氣相色譜數(shù)據(jù)/“月份+周數(shù)”文件夾（如11月第1周）。殘溶等保存在D盤(pán)/氣相色譜數(shù)據(jù)/殘溶等數(shù)據(jù)“月份+周數(shù)”文件夾（如11月第1周）。1.5進(jìn)樣進(jìn)樣前用無(wú)水乙醇將進(jìn)樣針清洗至少4次（當(dāng)前一個(gè)樣品為菜油當(dāng)前進(jìn)樣為葵油等情況時(shí)用乙醇清洗至少10次），再用待測(cè)樣品將進(jìn)樣針清洗4次。將進(jìn)樣針插入待測(cè)樣品，慢吸快推將進(jìn)樣針氣泡排盡，吸入（1±0.1）μL樣品（以實(shí)際要求為準(zhǔn)）。左手中指抵住針桿防止其彈出，食指壓住針桿上端，左手其余手指捏住進(jìn)樣針針筒。當(dāng)工作站右下方進(jìn)度條變?yōu)樽仙螅瑢⑦M(jìn)樣針前段完全插入進(jìn)樣口，左手食指迅速按下注入樣品，然后右手立即按儀器上的“Start”鍵。1.6離線查看、數(shù)據(jù)分析打開(kāi)“工作站”，右擊“進(jìn)入工作站”圖標(biāo)選擇“離線打開(kāi)”。點(diǎn)擊“文件”、“方法”、“打開(kāi)”打開(kāi)對(duì)應(yīng)方法，“文件”、“數(shù)據(jù)”、“打開(kāi)”打開(kāi)對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)。用“手動(dòng)峰”、“分裂峰”等對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行合適的積分，積分完畢后點(diǎn)“方法”“自定義報(bào)告”，選中報(bào)告，復(fù)制粘貼至對(duì)應(yīng)word文檔。并在文檔上對(duì)峰名稱進(jìn)行核對(duì)和修改。需要打印的點(diǎn)擊在word軟件點(diǎn)“打印”、“打印當(dāng)前頁(yè)”進(jìn)行打?。ㄔ诠ぷ髡窘缑纥c(diǎn)“Alt+F5”可直接打印，在工作站界面打印后需在紙上對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行核對(duì)與修改）。1.7降溫關(guān)機(jī)儀器使用完畢后，點(diǎn)擊“文件”、“方法”、“打開(kāi)”選擇“D盤(pán)/方法/組分方法/組分殘溶通用降溫關(guān)機(jī)程序2016####.met”，點(diǎn)擊“控制”、“下載方法”，儀器開(kāi)始降溫。待柱溫箱降至約100℃時(shí)（通過(guò)軟鍵盤(pán)點(diǎn)擊“柱溫”查看），關(guān)閉軟件和氣相電源開(kāi)關(guān)。2.日常維護(hù)2.1堵塞進(jìn)樣針的清洗殘溶用進(jìn)樣針堵塞后,拔出針桿然后用另一根針從尾端加入少量超純水（當(dāng)進(jìn)樣針阻力很大時(shí)可換為正己烷，并反復(fù)吸入推出正己烷清洗直至進(jìn)樣針阻力變小），插入針桿推到底。然后拔出針桿，于烘箱50℃烘干。當(dāng)組分用進(jìn)樣針堵塞時(shí)參照前述方法，用乙醇或正己烷清洗。2.2硅膠的更換當(dāng)空氣泵旁容器內(nèi)80%以上的硅膠變?yōu)榧t色時(shí)需更換為干燥過(guò)的藍(lán)色硅膠，并將變紅的硅膠置于烘箱干燥。2.3氮?dú)馀c氫氣氣瓶的更換當(dāng)儀器出現(xiàn)報(bào)警，氮?dú)饬髁恳恢边_(dá)不到設(shè)置的要求，經(jīng)檢查且不是漏氣引起的時(shí)，這時(shí)需觀察氮?dú)鈮毫Ρ恚拷獨(dú)馄康膲毫Ρ碛靡詼y(cè)量氮?dú)馄績(jī)?nèi)壓力，此壓力表過(guò)后為減壓閥，減壓閥過(guò)后的壓力表用以測(cè)量管路中的壓力），如氣瓶?jī)?nèi)壓力小于0.1MPa，則需更換新一瓶氮?dú)?。先必須關(guān)閉空瓶的閥門，用扳手逆時(shí)針旋松連接氣瓶與壓力表的螺母。換上一瓶新氮?dú)猓冒馐猪槙r(shí)針旋緊螺母。打開(kāi)氮?dú)馄可系拈y門，旋松至靠近氮?dú)馄康膲毫Ρ碇羔樧x數(shù)不再增大，這時(shí)觀察壓力，如壓力小于1.2MPa，則氮?dú)馄繅毫ζ〔⑿璺答伣o貿(mào)易要求供應(yīng)商改正。用洗衣粉水涂抹于接頭檢查是否漏氣，尤其是氮?dú)馄颗c壓力表的連接處，如出現(xiàn)氣泡說(shuō)明漏氣，需重新旋緊螺母。減壓閥固定在使減壓閥后的壓力表指示在0.6MPa處（有白色標(biāo)記），特殊情況調(diào)整壓力閥是必須從低壓力調(diào)至高壓力，如從高壓力調(diào)至低壓力由于管路中氣體未耗盡可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)際壓力小于減壓閥后的壓力表所指示壓力。將氮?dú)馐褂锰鞌?shù)填至儀器使用與維護(hù)原始記錄電子版。氫氣瓶的更換參考氮?dú)馄康母鼡Q（詳細(xì)文本暫無(wú)），氫氣一般半年左右更換一次。2.4數(shù)據(jù)及方法的備份每2個(gè)月左右將數(shù)據(jù)文件、儀器使用與維護(hù)原始記錄電子版、殘溶檢測(cè)原始記錄電子版、儀器運(yùn)行日志、方法保存電子表格等備份至其他電腦硬盤(pán)及網(wǎng)絡(luò)硬盤(pán)。每當(dāng)方法改變時(shí)需將方法文件備份至方法保存電子表格。點(diǎn)擊“儀器設(shè)置”圖標(biāo)，在左側(cè)儀器狀態(tài)欄取樣點(diǎn)右鍵、點(diǎn)擊“將狀態(tài)復(fù)制到剪貼板”，然后將儀器狀態(tài)數(shù)據(jù)粘貼保存至儀器使用與維護(hù)原始記錄。每周保存一次，儀器使用不正常時(shí)適當(dāng)加大保存頻率。2.5色譜柱的老化*（帶星號(hào)的為非必需掌握內(nèi)容，下同）當(dāng)峰形變差，出現(xiàn)鬼峰等情況時(shí)（具體以有經(jīng)驗(yàn)人士判斷為準(zhǔn)，勿擅自老化）。參考步驟1.2打開(kāi)老化方法，老化1～2h。2.6進(jìn)樣口的結(jié)構(gòu)與拆裝2.6.1用扳手逆時(shí)針旋松“隔墊固定螺母”（綠色）。取出隔墊。旋松“頂部插件組件”的固定螺母,拔出“頂部插件組件”。拔出“襯管”（連同“O形環(huán)”一起）。用“STANLEY”螺絲刀旋松“保溫套”的固定螺絲，并取下“保溫套”。用1/2英寸扳手旋松“變徑接頭”（又稱縮徑螺母），并從其內(nèi)取出“分流平板”及其墊圈（注意如圖所示墊圈在分流平板下方）。進(jìn)樣口的安裝過(guò)程參考前述～逆向進(jìn)行，前后進(jìn)樣口結(jié)構(gòu)一致。2.7.隔墊的更換2.7.1作用密封，防止樣品及載氣泄露，并避免外界空氣滲入、污染系統(tǒng)。隔墊一般由耐高溫、惰性好、氣密性優(yōu)良的硅橡膠制成。2.7.2更換頻率視檢測(cè)樣品量，一般2～3個(gè)月更換一次。當(dāng)進(jìn)樣口出現(xiàn)漏氣使GC無(wú)法達(dá)到就緒狀態(tài)，空白分析出現(xiàn)鬼峰等情況時(shí)可能需要更換隔墊。2.7.3更換方法拆卸步驟見(jiàn)2.6，取下并換上新“隔墊”后用手順時(shí)針旋“隔墊螺母”至旋不動(dòng)為止。2.8.襯管的更換2.8.1作用不揮發(fā)組分會(huì)滯留在襯管內(nèi)從而保護(hù)色譜柱。襯管內(nèi)少量經(jīng)硅烷化處理的石英玻璃毛可減少注射器針尖的歧視（即針尖內(nèi)的溶劑和易揮發(fā)組分首先汽化）并加速樣品汽化、避免固體物質(zhì)進(jìn)入并堵塞色譜柱。2.8.2更換頻率視檢測(cè)樣品量一般2～3個(gè)月更換一次。峰形變差，重現(xiàn)性差，有鬼峰出現(xiàn)等情況時(shí)可能需要更換襯管。2.8.3更換方法參考步驟2.6，換上新的襯管。2.9.石墨墊的更換2.9.1作用色譜柱與進(jìn)樣口的連接處靠“石墨墊”密封。2.9.2更換頻率拆卸時(shí)觀察到破損時(shí)。2.9.3更換方法參考步驟2.6，換上新的“石墨墊”。2.10分流平板清洗與更換2.10.1作用“分流平板”的鍍金惰性表面可防止樣品吸附，可正確密封進(jìn)樣口并防止樣品降解及系統(tǒng)泄露。2.10.2清洗頻率及方法浸泡于色譜純甲醇、丙酮超聲波清洗，晾干后參考步驟2.6安裝。2.10.3更換參考步驟2.6，換上新的分流平板。2.11進(jìn)樣口端色譜柱的拆裝與切割用5/16英寸扳手固定“柱螺母”上方的螺母，用1/4英寸扳手旋松“柱螺母”，連同螺母拔出色譜柱。當(dāng)色譜柱受到樣品污染等情況需要切割時(shí)，用陶瓷尺有刻度的一側(cè)在距色譜柱進(jìn)口端約5～15cm（截取長(zhǎng)度以經(jīng)驗(yàn)人士判斷為準(zhǔn)，新手勿擅自截?。┨幯杆賱澑?，然后彎折掰斷色譜柱，切割色譜柱的斷面必須平整，以保證斷面整潔，如不平整需重新截取。將隔墊（固定色譜柱位置用）平整地貼在色譜柱螺母底部，調(diào)節(jié)柱螺母和固定用隔墊的位置，使色譜柱伸出石墨墊部分為0.5cm。然后連同色譜柱插入到進(jìn)樣口，用手?jǐn)Q緊柱螺母，再用1/4英寸扳手?jǐn)Q緊“柱螺母”，不宜擰的過(guò)緊，以色譜柱輕輕拉動(dòng)時(shí)恰好不滑動(dòng)為佳。2.12檢測(cè)器端色譜柱的拆裝與切割2.12.1用5/16英寸扳手固定“適配接頭”的螺母，用1/4英寸扳手旋松檢測(cè)器色譜柱螺母，連同螺母拔出色譜柱。2.12.2色譜柱的切割參考2.11。2.12.3調(diào)節(jié)固定用隔墊、柱螺母位置，使色譜柱伸出約6.8cm，將色譜柱插入到進(jìn)樣口。2.12.4用手指擰緊柱螺母，再用扳手?jǐn)Q緊螺母，不宜擰的過(guò)緊，以色譜柱輕輕拉動(dòng)時(shí)恰好不滑動(dòng)為佳。2.13檢測(cè)器的結(jié)構(gòu)與拆裝2.13.1用手旋松“收集極螺帽”，取出“點(diǎn)火器外罩”。2.13.2取出“收集極主體”。用STANLEY螺絲刀旋松固定“收集極底座”的螺釘，取出“收集極底座”。2.13.3用1/4英寸Blackhawk內(nèi)六角扳手旋松“FID噴嘴”。2.13.4安裝時(shí)按相反順序，先裝好“FID噴嘴”并旋緊。然后裝上“收集極底座”，裝的時(shí)候用鑷子將“FID信號(hào)桿彈簧”向柱溫箱門方向輕壓，便能順利裝上“收集極底座”。再裝上“收集極主體”，裝的時(shí)候也用鑷子將“FID信號(hào)桿彈簧”向柱溫箱門方向輕壓，必須保證“收集極主體”與“FID信號(hào)桿彈簧”緊密接觸，否則可能會(huì)導(dǎo)致點(diǎn)火成功后而沒(méi)有輸出信號(hào)，接著旋緊螺釘，放好“點(diǎn)火器外罩”，并旋緊“收集極螺帽”。2.14FID噴嘴的清潔當(dāng)噴嘴表面附有較多燃燒產(chǎn)物、噴嘴部分或完全堵塞，將噴嘴置于裝有色譜純甲醇的潔凈燒杯，放入超聲波清洗儀清洗5min。清洗完成后用潔凈鑷子取出噴嘴，先用熱的超純水再用色譜純甲醇清洗。用氮吹儀吹干噴嘴內(nèi)部，然后置于濾紙上于空氣中晾干。第三部分：液相色譜儀器型號(hào)：安捷倫1260七、油脂中維生素A和維生素E含量的檢測(cè)1.原理油脂中維生素A和維生素E經(jīng)高效液相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，并用外標(biāo)法定量分析。2.范圍植物油脂中維生素A和維生素E的檢測(cè)。3.參考方法GB/T5009.82-2003食品中維生素A和維生素E的測(cè)定4.試劑4.1色譜純乙腈；4.2色譜純甲醇；4.3維生素A標(biāo)準(zhǔn)液：用丙酮溶解維生素A醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品；4.4維生素E標(biāo)準(zhǔn)液：α-VE、β-VE、γ-VE、δ-VE，用丙酮溶解維生素E標(biāo)準(zhǔn)品；4.5丙酮：分析純(溶解試樣)、色譜純(溶解標(biāo)樣)。5.儀器及用具5.1高效液相色譜儀帶紫外檢測(cè)器；5.2分析天平,感量0.0001g；5.310mL容量瓶；5.41.5mL塑料離心管；5.5超聲波水?。?.60.45μm有機(jī)系濾膜及濾膜搭配用針筒。6.操作步驟6.1試樣處理依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度稱取樣品2.0000g±0.1g（精確至0.0001），于10mL容量瓶中,先加入一定量丙酮,將樣品超聲溶解2-3min至溶液澄清，再用丙酮定容至刻度。用0.45μm有機(jī)系濾膜對(duì)溶液進(jìn)行過(guò)濾至1.5mL離心管，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6.2.1準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮溶解配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，確定各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間。6.2.2將各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成適合濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，采用面積積分，建立五級(jí)定標(biāo)曲線。6.2.3如用的是反向色譜柱，β-VE、γ-VE無(wú)法分離，均視為γ-VE。6.3液相色譜條件6.3.1流動(dòng)相比例：乙腈：甲醇=70：30；6.3.2色譜柱：250mm×4.6mm，5μm，C18反向柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：25min；6.3.4流動(dòng)相流速：1.2mL/min；6.3.5紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：VA(0-7min)檢測(cè)波長(zhǎng)325nm，VE(7-25min)檢測(cè)波長(zhǎng)295nm；6.3.6柱溫：30℃，組合柱溫箱；6.3.7固定進(jìn)樣體積：100μL（定量環(huán)體積20μL）。7.計(jì)算乘積因子：樣品重克數(shù)的倒數(shù)；稀釋因子：定容體積毫升數(shù)除以100。八、FAD中維生素E含量的檢測(cè)1.原理將測(cè)試樣品溶解在正己烷中，通過(guò)高效液相色譜將各種維生素E分離，用外標(biāo)法計(jì)算每種維生素E的含量。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定動(dòng)植物油脂的脫臭餾出物中游離α-、β-、γ-、δ-維生素E含量的高效液相色譜法。3.參考方法《KERRY－R&D－004FAD中維生素E的檢測(cè)》4.試劑α-、β-、γ-、δ-維生素E標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；4.2色譜純異丙醇；4.3色譜純正己烷（流動(dòng)相用），分析純正己烷（試樣處理用）。5.儀器及用具5.1高效液相色譜儀帶紫外檢測(cè)器；5.2分析天平,感量0.0001g；5.3100mL容量瓶；5.4超聲波水?。?.50.45μm有機(jī)系濾膜及濾膜搭配用針筒；5.61.5mL塑料離心管。6.操作步驟6.1試樣處理液體樣品混合均勻后檢測(cè)，但是不能夠過(guò)濾；固體樣品可在不超過(guò)40℃的烘箱中熔化，并輕微振蕩混勻。樣品制備時(shí)應(yīng)避免陽(yáng)光直射，盡量在柔和的光線條件下進(jìn)行。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度稱取樣品2.0000g±0.1g（精確至0.0001g）至100mL容量瓶中,先加入一定量分析純正己烷,將樣品溶解超聲3-5min至溶液澄清，再用正己烷定容至刻度，然后用0.45μm濾膜過(guò)濾至1.5mL塑料離心管，進(jìn)液相色譜分析。測(cè)試溶液應(yīng)避光，并在當(dāng)天進(jìn)行分析。配制濃度較高的溶液時(shí)應(yīng)在在進(jìn)色譜之前對(duì)溶液進(jìn)行稀釋。在分析過(guò)程中堿金屬、熱和光會(huì)使得VE氧化從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低，檢測(cè)時(shí)應(yīng)盡量避免這些因素的影響。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別準(zhǔn)確將購(gòu)來(lái)的商品化的α,β,γ,δ-VE標(biāo)樣用正己烷溶解配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備根據(jù)紫外檢測(cè)器的靈敏度,配置合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以標(biāo)準(zhǔn)液的配制為例：分別取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液混合，如1mL，再用正己烷稀釋至一定體積，使溶液含有的各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度均為5.0mg/mL，再稀釋成各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.5mg/mL的標(biāo)樣，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，所有溶液應(yīng)避光0℃～4℃冷藏儲(chǔ)存。用進(jìn)樣針取100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，5個(gè)濃度標(biāo)樣定標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3液相色譜條件6.3.1流動(dòng)相比例:正己烷：異丙醇=97.5：2.5；6.3.2色譜柱：250mm×4.6mm，5μm的氨基柱或250mm×4mm，5μm的二醇基硅膠柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：12min；6.3.4流動(dòng)相流速：2mL/min；6.3.5紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：295nm；6.3.6柱溫箱溫度：30℃；6.3.7固定進(jìn)樣體積：100μL（定量環(huán)體積20μL）。7.計(jì)算乘積因子：樣品重克數(shù)的倒數(shù)；稀釋因子：定容體積毫升數(shù)除以100。九、油脂、谷物及其制品中苯并(a)芘的測(cè)定1.原理試樣經(jīng)過(guò)有機(jī)溶劑提取，分子印跡小柱凈化，氮吹濃縮后乙腈溶解，反相液相色譜分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了油脂中苯并(a)芘的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用各種食用油中苯并(a)芘含量的測(cè)定。3.參考方法GB5009.27-2003食品中苯并(a)芘的測(cè)定4.試劑4.1色譜純乙腈；4.2色譜純正己烷；4.3色譜純二氯甲烷；4.4苯并芘（a)標(biāo)準(zhǔn)品；4.5苯并（a）芘分子印跡柱。5.儀器及用具5.1液相色譜儀帶熒光檢測(cè)器；5.2分析天平,感量0.0001g；5.3渦旋混合器；5.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或氮?dú)獯蹈裳b置或水浴鍋；5.5固相萃取裝置；5.6低速離心機(jī)；5.70.45μm有機(jī)系濾膜及配套針筒；5.81.5mL塑料離心管；5.9空氣泵。6.操作步驟6.1試樣處理6.1.1試樣前處理油脂的前處理提取：稱取0.4±0.02g（精確至0.0001g）試樣，加入5mL色譜純正己烷，旋渦混合0.5min（若樣品為人造黃油等含水油脂制品，則會(huì)出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，需要4000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移出上層正己烷層待凈化），待凈化。谷物及其制品提取樣品用粉碎機(jī)粉碎后，稱取1±0.05g（精確至0.0001g）試樣，加入5mL正己烷，旋渦混合0.5min，40℃下超聲提取10min，4000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移出上清液。再加入5mL正己烷重復(fù)提取一次。合并上清液，待凈化。6.1.2樣品凈化采用苯并（a）芘分子印跡柱，先依次用5mL二氯甲烷及5mL正己烷活化柱子。將待凈化液轉(zhuǎn)移進(jìn)柱子，用6mL正己烷清洗裝試樣容器后再用于淋洗柱子，棄去流出液。用6mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液。將凈化液在常溫下約25mL/min流量氮?dú)獯蹈桑o(wú)氮吹儀時(shí)可75℃水浴蒸干），吹干后盡快拿出。加入0.4mL乙腈（谷物及其制品為1.0mL），渦旋溶解0.5min，如液體渾濁，則用0.45μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾至1.5mL離心管，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.5mg/mL）：準(zhǔn)確稱取苯并（a）芘12.5mg（精確到0.1mg）于25mL容量瓶中，用甲苯溶解，定容。4℃密封避光保存，至少6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)中間液苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.0μg/mL，0.05μg/mL）：吸取0.1mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用乙腈定容到10mL，得到5.0μg/mL的中間液，4℃密封避光保存,至少1個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。同法再稀釋，得到0.05μg/mL的中間液，臨用現(xiàn)配。6.2.3標(biāo)準(zhǔn)工作液把0.05μg/mL中間液用乙腈稀釋得到0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL的校準(zhǔn)曲線溶液，臨用現(xiàn)配。6.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線用進(jìn)樣針取100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，5個(gè)濃度標(biāo)樣定標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3液相色譜條件6.3.1流動(dòng)相比例:乙腈：水=88：12；6.3.2色譜柱C18柱,250mm×4.6mm，5μmPAH多環(huán)芳烴專用柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：12min；6.3.4流動(dòng)相流速：2mL/min；6.3.5熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)：384nm，檢測(cè)波長(zhǎng)：406nm；6.3.6柱溫箱溫度：35℃組合柱溫箱；6.3.7固定進(jìn)樣體積：60μL（定量環(huán)體積20μL）。7.計(jì)算乘積因子：樣品重克數(shù)的倒數(shù)；稀釋因子：油脂：0.4，谷物及其制品：1.0。8.分子印跡柱的回收8.1將洗脫后的柱子做好標(biāo)記，并將使用信息記錄在原始記錄上，然后將柱子放回冰箱4℃保存；8.2多次使用時(shí)應(yīng)不定期檢測(cè)柱子使用效果（檢測(cè)樣品時(shí)與其他柱子一起平行檢測(cè)樣品，分析檢測(cè)值的差異）。十、油脂中TBHQ含量的測(cè)定1.原理將油脂中的TBHQ萃取至有機(jī)溶劑中，用高效液相色譜C18反相柱分離，經(jīng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，并用外標(biāo)法定量測(cè)定。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了采用液相色譜測(cè)定TBHQ的原理、試劑、儀器和設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于較低熔點(diǎn)的食用油中TBHQ含量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)不適用于熔點(diǎn)高于35℃的食用油中TBHQ含量的測(cè)定。3.參考方法GB/T21512-2008食用油中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定4.試劑4.1色譜純乙腈；4.2蒸餾水。5.儀器及用具5.1實(shí)驗(yàn)室常用器具；5.2高效液相色譜儀帶紫外檢測(cè)器；5.3低速離心機(jī)；5.4均質(zhì)儀；5.5分析天平,感量0.0001g；5.61.5mL塑料離心管；5.70.45μm有機(jī)系濾膜及配套針筒；5.850mL塑料離心管。6.操作步驟6.1試樣處理準(zhǔn)確稱取1g±0.1g（精確至0.0001g）樣品于50mL塑料離心管中，用移液管加入20mL色譜純乙腈，使用高速均質(zhì)儀混勻1min(±1s)，均質(zhì)儀使用前分別用蒸餾水和乙腈各清洗一遍(用50mL離心管裝20mL液體，均質(zhì)5s即為清洗一次)，清洗后用濾紙擦干凈方可使用。均質(zhì)結(jié)束后，離心分離，4000r/min離心5min。取離心后的上層清液用0.45μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾至1.5mL塑料離心管，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備稱取到貨進(jìn)口TBHQ粉末0.2±0.02g（精確至0.0001g），加入1000g不含TBHQ的油，記錄準(zhǔn)確質(zhì)量(先用小燒杯裝適量油加熱溶解TBHQ，再溶于剩下的油中)，觀察完全澄清即可，此相當(dāng)TBHQ約200ppm,再用該無(wú)抗的油稀釋成100、50、10、1ppm。按照6.1的方法對(duì)此5個(gè)樣品進(jìn)行處理，做五級(jí)定標(biāo)。6.3液相色譜條件6.3.1流動(dòng)性比例：乙腈：水=90:10；6.3.2色譜柱：250mm×4.6mm,5μm，C18反相色譜柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：4.2min；6.3.4流動(dòng)相流速：0.8mL/min；6.3.5紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：292nm；6.3.6柱溫箱溫度：25℃；6.3.7固定進(jìn)樣體積：100μL（定量環(huán)體積20μL）。7.計(jì)算乘積因子：樣品重克數(shù)的倒數(shù)；稀釋因子：1。十一、油脂、米糠或米糠粕中玉米赤霉烯酮的檢測(cè)1.原理試樣經(jīng)過(guò)乙腈-水萃取，提取液經(jīng)稀釋后，經(jīng)過(guò)含有玉米赤霉烯酮特異抗體的免疫親和柱層析凈化，以甲醇通過(guò)免疫親和柱洗脫，洗脫液供帶有熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了油脂中玉米赤霉烯酮的基準(zhǔn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用各種食用油中玉米赤霉烯酮含量的測(cè)定。3.參考方法SN/T1745-2006進(jìn)出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的檢驗(yàn)方法GB/T28716-2012飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法4.試劑4.1色譜純乙腈；4.2色譜純甲醇；4.3氯化鈉；4.4十二水合磷酸氫二鈉；4.5磷酸二氫鉀；4.6氯化鉀；4.7吐溫-20（Tween-20）；4.8超純水；4.984%乙腈蒸餾水溶液；4.1080%乙腈蒸餾水溶液；4.11PBST緩沖液：稱取8.0g氯化鈉、3.02g十二水合磷酸氫二鈉、0.2g磷酸二氫鉀、0.2g氯化鉀，用990mL水將上述試劑溶解,加入2mL吐溫-20，再用水定容至1L。不使用時(shí)應(yīng)放于4℃冷藏,并應(yīng)定期查看是否變質(zhì)。新鮮溶液澄清透明、泡沫較多、粘滯力較小，變質(zhì)的溶液有白色混濁物，且會(huì)造成凈化時(shí)待凈化液滴下速度較慢；4.12玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度大于99%；4.13玉米赤霉烯酮免疫親和柱。5.儀器與設(shè)備5.1高效液相色譜儀帶熒光檢測(cè)器；5.2分析天平,感量0.0001g，電子天平,感量0.01g；5.350mL離心管；5.41.5mL玻璃進(jìn)樣瓶；5.51000μL移液槍及配套吸頭；5.6移液管；5.7渦旋混合器；5.80.45μm有機(jī)系濾膜及濾膜搭配用針筒；5.920mL玻璃注射器；5.10連接玻璃注射器與免疫親和柱用轉(zhuǎn)接頭；5.11空氣泵；5.12均質(zhì)儀；5.13250mL錐形瓶；5.14定性濾紙；5.15玻璃纖維濾紙（直徑11cm、孔徑1.5μm，無(wú)熒光特效）；5.16試驗(yàn)篩：1mm孔徑。6.操作步驟6.1油脂試樣處理6.1.1萃取油脂樣品萃取準(zhǔn)確稱取4g油脂樣品于50mL離心管（毛油樣品稱取1g，精確至0.0001g），用移液管精確加入20mL84%乙腈水溶液（V1）。均質(zhì)儀處理60±1秒，轉(zhuǎn)速4000rpm離心5min，待凈化；米糠或米糠粕樣品萃取用電子天平稱取40.00g樣品于250mL錐形瓶，加入4.0g氯化鈉，用量筒加入100.0mL80%乙腈水溶液（V3）。均質(zhì)儀處理（120±1）秒，濾紙過(guò)濾，用移液管準(zhǔn)確移取10.00mL濾液于50mL離心管并用移液管加入40.00mLPBS溶液稀釋，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾2次到50mL離心管（至濾液澄清），備用；6.1.2凈化油脂樣品的凈化用移液槍準(zhǔn)確移取3mL離心后上清（V2）于50mL離心管中，并加入25mLPBST緩沖液，渦漩震蕩15s。將免疫親和柱接上轉(zhuǎn)接頭和注射器筒,然后倒入渦旋后待凈化液過(guò)免疫親和柱，流速控制在1滴/秒。用10mLPBST緩沖液清洗盛待凈化液的離心管然后淋洗免疫親和柱，流速控制在2mL/min1滴/秒。再用10mL超純水淋洗免疫親和柱，流速控制在2滴/秒，直至2至3mL空氣通過(guò)免疫親和柱(約30S)。用移液槍各取三次0.5mL甲醇（V3）洗脫免疫親和柱，自然流下即可，最后用洗耳球?qū)⒓状纪耆党?將樣品收集在1.5mL玻璃進(jìn)樣瓶中。0.45μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾至1.5mL玻璃進(jìn)樣瓶，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析（用油脂中玉米赤霉烯酮含量的檢測(cè)方法）。米糠或米糠粕樣品的凈化將免疫親和柱接上轉(zhuǎn)接頭和注射器筒,用移液管準(zhǔn)確移取10.00mL待凈化液注入玻璃注射器中，流速不大于1滴/秒（一般自然滴下即可），用潔凈洗耳球緩慢吹2次至親和柱干。用10mL超純水淋洗免疫親和柱，流速不大于1滴/秒。分別用10mL超純水淋洗免疫親和柱兩次，流速不大于2滴/秒，用潔凈洗耳球緩慢吹2次至親和柱干。用移液槍分三次取0.5mL甲醇（V4）洗脫免疫親和柱，自然流下即可，最后用洗耳球?qū)⒓状纪耆党?將樣品收集在1.5mL玻璃進(jìn)樣瓶中。0.45μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾至1.5mL玻璃進(jìn)樣瓶，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析（用米糠及米糠粕中玉米赤霉烯酮含量的檢測(cè)方法）。6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇配制0.1mg/mL的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃冰箱備用，可使用6個(gè)月。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取一定量的玉米赤霉烯酮儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋，分別配成相當(dāng)于0ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣分析，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3色譜條件6.3.1流動(dòng)相比例:乙腈：水：甲醇=46：46：8；6.3.2色譜柱100mm×4.6，3.5μm，C18反相色譜柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：6min；6.3.4流動(dòng)相流速：1.0mL/min；6.3.5熒光檢測(cè)器：激發(fā)光波長(zhǎng)274nm，檢測(cè)波長(zhǎng)440nm；6.3.6柱溫箱溫度:30℃，組合柱溫箱；6.3.7固定進(jìn)樣體積：100μL（定量環(huán)體積20μL）。7.計(jì)算乘積因子：樣品重克數(shù)的倒數(shù)；稀釋因子：1。8.免疫親和柱的回收8.1將洗脫完的免疫親和柱立即用70%甲醇水溶液填滿，接入到玻璃注射器中，用10mL70%甲醇水溶液淋洗一遍；8.2再用10mL70%甲醇水溶液淋洗一遍免疫親和柱；8.3用20mLPBS緩沖溶液淋洗免疫親和柱；8.4保留免疫親和柱中的緩沖溶液，將免疫親和柱進(jìn)出口端封好；8.5將上述回收好的免疫親和柱做好標(biāo)記，并將信息記錄在原始記錄上，放回原保存盒中，放置于冰箱4℃下保存即可；8.6多次使用時(shí)應(yīng)不定期檢測(cè)柱子使用效果（檢測(cè)樣品時(shí)與其他柱子一起平行檢測(cè)樣品，分析檢測(cè)值的差異）。十二、食品中黃曲霉毒素的測(cè)定1.原理試樣經(jīng)過(guò)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過(guò)濾、稀釋后，濾液經(jīng)過(guò)含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和層析柱凈化，此抗體對(duì)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專一性，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上。用水將免疫親和柱雜質(zhì)除去，以甲醇通過(guò)免疫親和層析柱洗脫，洗脫液經(jīng)水稀釋后通過(guò)帶熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀柱后熒光衍生測(cè)定黃曲霉毒素的含量。2.范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物油脂、大米、花生及花生制品（花生仁、花生醬、花生米）、小麥、玉米、醬油、食醋等食品中黃曲霉毒素的含量。樣品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2總量的檢出限為1μg/Kg。3.參考方法GB/T18979-2003食品中黃曲霉毒素的測(cè)定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法GB5009.22-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定GB/T30955-2014飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法4.試劑4.1甲醇：洗脫免疫親和柱、配制標(biāo)樣用的為色譜純，其他提取、稀釋、回收柱子等用的為分析純；4.270%分析純甲醇水溶液，80%分析純甲醇水溶液；4.3氯化鈉；4.4黃曲霉毒素儲(chǔ)備液：黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2甲醇溶液的標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)備液；4.5黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取適量的黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)準(zhǔn)混合儲(chǔ)備液，用50%的甲醇水溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液；4.6黃曲霉毒素免疫親和柱（從冷藏室取出后室溫放置約30min）。5.儀器與設(shè)備5.1高效液相色譜儀帶熒光檢測(cè)器；5.2移液管；5.3均質(zhì)儀；5.4空氣泵等免疫親和柱配套裝置；5.5玻璃纖維濾紙；5.61000μL移液槍；5.720mL玻璃注射器；5.8中速定性濾紙；5.9錐形瓶；5.101.5mL玻璃進(jìn)樣瓶；5.111.0mm試驗(yàn)篩；5.12250mL三角瓶。6.操作步驟6.1試樣處理稱取試樣25g于250mL大口錐形瓶中，加入約5g氯化鈉及125mL70%甲醇水溶液，以均質(zhì)儀高速攪拌120±1s。中速定性濾紙過(guò)濾，移液管準(zhǔn)確移取15mL溶液并加入30mL蒸餾水稀釋，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾。6.1.1提取植物油脂樣品的提取稱取5g試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中,加入20mL乙腈-水溶液(84+16)或甲醇-水溶液(70+30),渦旋混勻,用均質(zhì)器均質(zhì)(180±1S),在6000r/min下離心10min,取上清液備用。米糠粕樣品的提取稱取經(jīng)粉碎過(guò)1.0mm篩的樣品50.0g于250mL三角瓶，加入5g氯化鈉及用移液管準(zhǔn)確加入100.0mL80%甲醇水溶液，用均質(zhì)儀均質(zhì)（120±1）S，定性濾紙過(guò)濾于三角瓶，用移液管準(zhǔn)確移取10.0mL濾液于50mL燒杯并加入40mLPBS緩沖液稀釋，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾1～2次，至濾液澄清，待凈化。6.1.2凈化將免疫親和柱連接于20mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL上述待凈化液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液約2滴/秒的流速緩慢通過(guò)免疫親的柱，直至2～3mL空氣通過(guò)柱體。分別以10mL蒸餾水清洗柱子兩次，棄去全部流出液，并使2-3mL空氣通過(guò)柱體。從免疫親和柱上端準(zhǔn)確加入1.0mL色譜純甲醇洗脫，自然流下，用2.0mL離心管瓶收集。再?gòu)拿庖哂H和柱上端加入1mL超純水清洗柱子，收集全部洗脫液，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析。油脂樣品的凈化將免疫親和柱連接于20mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取15mL上述濾液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液約2滴/秒的流速緩慢通過(guò)免疫親的柱，直至2～3mL空氣通過(guò)柱體。分別以10mL蒸餾水清洗柱子兩次，棄去全部流出液，并使2-3mL空氣通過(guò)柱體。從免疫親和柱上端準(zhǔn)確加入1.0mL色譜純甲醇洗脫，流速為1mL/min-2mL/min，用1.5mL玻璃進(jìn)樣瓶收集。再?gòu)拿庖哂H和柱上端加入1mL超純水清洗柱子，收集全部洗脫液于前述玻璃進(jìn)樣瓶中，進(jìn)液相色譜系統(tǒng)分析。用水代替試樣，按上述步驟做空白試驗(yàn)。準(zhǔn)確移取4mL上述上清液,加入46mL1%吐溫-20的PBS(使用甲醇-水溶液提取時(shí)可減半加入),混勻。免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后,將上述樣液移至50mL注射器筒中,調(diào)節(jié)下滴速度,控制樣液以1mL/min~3mL/min的速度穩(wěn)定下滴。待樣液滴完后,往注射器筒內(nèi)加入2×10mL水,以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后,用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng),在親和柱下部放置10mL刻度試管,取下50mL的注射器筒,2×1mL甲醇洗脫親和柱,控制1mL/min~3mL/min的速度下滴,再用真空泵抽干親和柱,收集全部洗脫液至試管中。在50℃下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两?用初始流動(dòng)相定容至1.0mL,渦旋30s溶解殘留物,0.22μm濾膜過(guò)濾,收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。米糠或粕類樣品的凈化6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備6.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液甲醇配制的黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于4℃冰箱備用。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取一定量的黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用50%甲醇水溶液稀釋成黃曲霉毒素B1濃度分別為0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣分析，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.3色譜條件6.3.1流動(dòng)相比例:甲醇:水=45:55；6.3.2色譜柱150mm×4.6mm，5μm，C18反相色譜柱；6.3.3運(yùn)行時(shí)間：21min；6.3.4流動(dòng)相流速：0.8mL/min；6.3.5熒光檢測(cè)器：激發(fā)光波長(zhǎng)360nm，檢測(cè)波長(zhǎng)440nm；6.3.6柱溫箱溫度:38℃，組合柱溫箱；6.3.7固定進(jìn)樣體積：100μL（定量環(huán)體積20μL）；6.3.8衍生：采取柱后光化學(xué)衍生法。在進(jìn)樣檢測(cè)前15min將衍生器開(kāi)關(guān)打開(kāi)進(jìn)行預(yù)熱，待液相系統(tǒng)壓力正常后開(kāi)始進(jìn)樣分析。7.計(jì)算樣品中黃曲霉毒素B1，B2，G1或G2：的含量(X1)以微克每千克（μg/Kg）表示，按式(1)計(jì)算：X1=———式（1）其中：W=———式（2）式中:X1—樣品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，單位為微克每千克（μg/Kg）；C1—試樣中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，單位為微克每升(μg/L)；C0—空白試驗(yàn)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，單位為微克每升(μg/L)；V—最終甲醇洗脫液體積，單位為毫升(mL);W—最終凈化洗脫液所含的試樣質(zhì)量，單位為克（g）；m—試樣稱取的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)；V1—樣品和提取液總體積，單位為毫升(mL)；V2—稀釋用樣品濾液體積，單位為毫升(mL)；V3—稀釋液體積，單位為毫升(mL)；V4—通過(guò)親和柱的樣品提取液體積，單位為毫升(mL),黃曲霉毒素總量為B1、B2、G1、G2的濃度之和，即B1+B2+G1+G2,計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后兩位。乘積因子：25除以樣品重克數(shù)；樣品重的倒數(shù)稀釋因子：1。8.注意事項(xiàng)8.1溶劑提取法（萃?。┲饕鶕?jù)樣品的物理化學(xué)性質(zhì)來(lái)確定，AFT易溶于帶極性的溶劑中，提取液中少量水可以浸潤(rùn)基質(zhì)，增強(qiáng)有機(jī)溶劑在樣品中的滲透能力，提高萃取效率，因此本法采用70%水溶液來(lái)萃取AFT（參考文獻(xiàn)9.1，在中作者對(duì)比了40%、50%、60%、70%、80%甲醇水溶液提取效果）；8.2反相的極性條件下AFB1、AFG1等極易發(fā)生熒光淬滅，故本方法采用柱后光化學(xué)衍生的方法增強(qiáng)AFB1、AFG1等的熒光性。（參考文獻(xiàn)9.1）；8.3萃取高脂肪含量樣品時(shí)，樣液中油脂與甲醇水形成乳濁液，存在嚴(yán)重乳化現(xiàn)象，影響提取效率。要使乳化液失去穩(wěn)定性，就必須設(shè)法破壞油-水界面上的吸附膜，減少分散離子所帶的同種電荷，最后實(shí)現(xiàn)油水分離，達(dá)到破乳的目的。無(wú)機(jī)鹽類電解質(zhì)可使乳化液發(fā)生油水分層而遭破壞，不僅有很好的促進(jìn)提取作用，而且有加速液液萃取中的分層作用。因此在提取劑中加入氯化鈉（參考文獻(xiàn)9.1）；8.4洗脫液中的甲醇可使免疫親和柱中抗體蛋白變性，破壞了抗原抗體之間的力，從而達(dá)到洗脫作用（參考文獻(xiàn)9.1）。9.參考文獻(xiàn)9.1馬良.黃曲霉毒素b1高靈敏度檢測(cè)技術(shù)研究（見(jiàn)豆丁文檔/p-1454792273.html)10.免疫親和柱的回收10.1將洗脫完的免疫親和柱立即用70%甲醇水溶液填滿，接入到玻璃注射器中，用10mL