基因工程專題訓(xùn)練

1.研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？蒲腥藛T培育出轉(zhuǎn)入hLZ基因

羊以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。?，過程如圖1所示，其中編號(hào)①?⑨表

示過程；質(zhì)粒S中的標(biāo)記基因Leu控制合成亮氨酸，標(biāo)記基因GFP控制合成綠色熒

光蛋白；四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是濟(jì)加/I：G3GATCC、BgII：A

IGATCT,HindIII：AIAGCTT、XbaI：TICTAGA0請(qǐng)分析并回答下列問題：

成纖維細(xì)胞

圖1

AlA2A3A4ASA6A7ASA9A10AU

—939bp

591bp

327bp

圖2

（1）過程①采用PCR技術(shù)對(duì)hLZ基因進(jìn)行擴(kuò)增，若一個(gè)該DNA分子在PCR儀中經(jīng)

過4次循環(huán)，產(chǎn)物中共有個(gè)等長的hLZ基因片段。

（2）過程②物質(zhì)B的獲得是用限制酶切割的結(jié)果，重組質(zhì)粒T上hLZ基

因前需添加,以確保能夠在轉(zhuǎn)基因羊的乳汁中獲得hLZ。

（3）為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)液中（填：“需

要”或“不需要”）添加亮氨酸。過程⑧通常是用物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞,

使其完成,再進(jìn)行過程⑨獲得轉(zhuǎn)基因羊。

（4）基因編輯技術(shù)，能較為精確的對(duì)生物體基因組中特定目的基因進(jìn)行改造?；?/p>

因編輯體系包括核酸內(nèi)切酶與一段小RNA（crRNA）,crRNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)準(zhǔn)確

識(shí)別靶基因上特定序列后，引導(dǎo)核酸內(nèi)切酶定位到靶基因上進(jìn)行切割，隨后細(xì)胞啟

動(dòng)DNA損傷修復(fù)機(jī)制，可引發(fā)DNA小片段缺失或插入，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)基因編輯。科研人

員利用上述方法使轉(zhuǎn)基因羊干細(xì)胞中的R基因功能喪失（基因敲除），導(dǎo)致Tsp45I

酶（一種限制酶）識(shí)別序列發(fā)生突變。提取進(jìn)行基因編輯后的細(xì)胞（A1?All）中

的DNA,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增R基因的相關(guān)區(qū)域，再用Tsp45I酶切處理后，電泳結(jié)

果如圖2所示(bp表示堿基對(duì))。A5、A7、All的電泳結(jié)果說明,這些干

細(xì)胞的R基因具體改變情況為，一條染色體上的R基因未成功敲除細(xì)胞有

______________O

2.回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：

科研工作者將TaNHX2基因轉(zhuǎn)移到某植物細(xì)胞內(nèi)，獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽植株新品種。

如圖是獲取的含有目的基因的DNA片斷，Sau3AI,EcoR\、及加〃I三種限制性核

酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列分別是IGATC、GIAATTC,GIGATCC,質(zhì)粒上各有一個(gè)Sau必

I和ECoRX的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)分析回答問題：

(1)若用民初〃I切割圖中所示的DNA片段獲得了目的基因，則需選用酶切

割質(zhì)粒，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒，該方案的缺陷是會(huì)出現(xiàn)目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化以

及。故切割圖中所示DNA片段的最佳方案是選用酶。實(shí)驗(yàn)中酶作用的

強(qiáng)弱可用表示.

(2)將獲得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入原生質(zhì)體，導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和o原生

質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，其作用是。原生質(zhì)體經(jīng)過細(xì)胞壁

再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成。

(3)為了從個(gè)體水平檢測(cè)成果，需要進(jìn)行的操作是。

BamHiSau3AIBamH1

【答案】(l)Sau渤I目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定EcoR

I和酶活性

(2)顯微注射法維持一定的滲透壓，保持原生質(zhì)體的形

態(tài)愈傷組織

(3)將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地，觀察其生長狀況

【解析】

【分析】

本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理、操作

工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。

【解答】

(1)根據(jù)各種限制前的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)可知，限制醐艮W7Z//I切割形成的黏性末端

第2頁，共22頁

與限制酶Sau3AI切割形成的黏性末端相同，因此若用BamHI切割圖中所示的DNA

片段獲得了目的基因，則需選用I酶切割質(zhì)粒，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒；用一種

酶切割目的基因或質(zhì)粒，導(dǎo)致目的基因或質(zhì)粒兩端的黏性末端相同，這樣會(huì)出現(xiàn)目的基

因和質(zhì)粒的自我環(huán)化以及目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定。因此，切割質(zhì)粒應(yīng)該用

Sau3AI和EcoR\酶,而切割圖中DNA片段需要用EcoRI和BamH\酶。實(shí)驗(yàn)中醐作用

的強(qiáng)弱可用酶活性表示。

(2)將獲得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入原生質(zhì)體，導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法。原生

質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，其作用是維持一定的滲透壓，保持原生質(zhì)體

的形態(tài)。原生質(zhì)體經(jīng)過細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。

(3)從個(gè)體水平檢測(cè)成果的方法是將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地，觀察其生長狀況。

故答案為:

(1)Sau3AI目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定EcoRI和

BamH\酶活性

(2)顯微注射法維持一定的滲透壓，保持原生質(zhì)體的形

態(tài)愈傷組織

(3)將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地，觀察其生長狀況

3.水稻是世界上最重要的糧食作物之一，是全球約半數(shù)人口的主糧。然而水稻只有在

磷充足的條件下才能保證高產(chǎn)。S基因是番茄線粒體中的磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，科研人

員將S基因轉(zhuǎn)入水稻體內(nèi)，以期望獲得低磷條件下的高產(chǎn)水稻。操作流程如圖：

BjunllIHindi

GtS柒肉

BglD

21

復(fù)制原點(diǎn)

小M片f—舒三立."：用6上

MS培養(yǎng)M轉(zhuǎn)移

培養(yǎng)狀2培岸*3

他選培養(yǎng)

(1)由番茄細(xì)胞的總RNA得到cDNA,需要的酶是______。從cDNA文庫中獲取的

S基因往往需要利用PCR技術(shù)在引物的端添加限制酶識(shí)別序列。已知Ti質(zhì)

粒轉(zhuǎn)錄方向?yàn)轫槙r(shí)針，相關(guān)酶切位點(diǎn)如表。

BamllIHindlllBgHIEcoRI

（；;GATCCAACCTTA;GATCTG-AATTC

<11\<.1KG\\TCTAG?ACTTAA.G

通過測(cè)序已知S基因部分序列如圖：

5'-ATGGAGAACTCCTT-CT-3,

3'-TACCTCTTCAGGAAGA-5,

請(qǐng)補(bǔ)充擴(kuò)增結(jié)束后，大多數(shù)DNA片段的堿基對(duì)序列。

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心工作，該工作的重要意義是。

基因表達(dá)載體除目的基因、標(biāo)記基因外，還必須含有和。

(3)圖中兩處篩選時(shí)均需在培養(yǎng)基中加入。已知GUS基因的產(chǎn)物能催化無

色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色,若,則說明S基因在水稻愈傷組織細(xì)胞中已成功表達(dá)。

【答案】(1)逆轉(zhuǎn)

r

酶5，5--GGATCCATGGAGAA……GTCCTTCTAAGCTT—3

°3,-CCTAGGTACCTCTT……CAGGAAGATTCGAAT

(2)使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代；同時(shí)使目的基因能夠表

達(dá)和發(fā)揮作用啟動(dòng)子終止子

(3)氨葦青霉素經(jīng)無色物質(zhì)K處理愈傷組織并篩選出了呈現(xiàn)藍(lán)色的組織

【解析】(1)由RNA獲得cDNA是通過逆轉(zhuǎn)錄過程實(shí)現(xiàn)的，該過程需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶；

由于擴(kuò)增方向是從5,端開始延伸的，故需要在利用PCR技術(shù)在引物的5,端添加限制

酶識(shí)別序列；已知Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)錄方向?yàn)轫槙r(shí)針，通過圖示中重組質(zhì)粒分析，插入目的基

因的左側(cè)所用的限制性酶是BamHI,右側(cè)所用的限制性酶是HindHI,再通過表格中限

制性酶切割的具體堿基序列，結(jié)合S基因的堿基序列，可知擴(kuò)增結(jié)束后，大多數(shù)DNA片

段的堿基對(duì)序列：5；-^ATCCATGGAGAA……GTCCTTCTAAGCy-3：。

3r—CCTAGGTACCTCTT.......CAGGAAGATTCGAA一'

(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體的意義是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一

代；同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；基因表達(dá)載體除目的基因、標(biāo)記基因外，還

必須有啟動(dòng)子(用于驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄)和終止子(用于控制轉(zhuǎn)錄的結(jié)束)。

(3)重組質(zhì)粒中有標(biāo)記基因一氨半青霉素抗性基因，故為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體

的農(nóng)桿菌和水稻愈傷組織，圖中兩處篩選時(shí)均需在培養(yǎng)基中加入氨茉青霉素；圖示中可

以看出，重組質(zhì)粒含GUS基因，GUS基因的產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，根據(jù)這一

特性，經(jīng)無色物質(zhì)K處理愈傷組織并篩選出了呈現(xiàn)藍(lán)色的組織，說明S基因在水稻細(xì)胞

中已成功表達(dá)。

故答案為：

第4頁，共22頁

⑴逆轉(zhuǎn)酶5，5--GGATCCATGGAG.4.A.……GTCCTTCTAAGCTT—3'

°3（-CCTAGGTACCTCTT……CAGGAAGATTCGAAT

（2）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代；同時(shí)使目的基因能夠表

達(dá)和發(fā)揮作用啟動(dòng)子終止子

（3）氨葦青霉素經(jīng)無色物質(zhì)K處理愈傷組織并篩選出了呈現(xiàn)藍(lán)色的組織

本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生運(yùn)用所學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相

關(guān)的生物學(xué)問題的能力。

4.C0VIDT9的抗原性與感染性與其表面的S蛋白（刺突糖蛋白）密切相關(guān)，現(xiàn)利用

基因工程的方法生產(chǎn)相關(guān)疫苗。圖甲為構(gòu)建S蛋白基因表達(dá)載體的過程，圖乙為重

組質(zhì)粒被相關(guān)酶切后的電泳結(jié)果。請(qǐng)回答下列問題。

（1）①過程為，所使用的酶和原料分別為和。

（2，③過程為PCR技術(shù),該反應(yīng)體系的酶比一般的DNA聚合酶具有的特性。

該過程能否在cDNA分子中專一性擴(kuò)增出S蛋白基因______（能或否），原因是

（3）構(gòu)建好的重組質(zhì)粒長度共2000bp,用限制酶HindlH及限制前HindHI和BamHI

分別對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行完全酶切并電泳，結(jié)果如圖乙所示，可推測(cè)限制酶BamHI在重

組質(zhì)粒上有個(gè)酶切位點(diǎn)，限制酶HindHI和BamHI共同酶切得到

個(gè)200bp。為使S蛋白基因在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把S蛋白基因正確插人重

組質(zhì)粒的之間。

fflT

【答案】（1）反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄前）（4種游離

的）脫氧核甘酸（dNTP）

（2）耐高溫（耐熱）能引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設(shè)計(jì)

合成（或引物能與S蛋白基因特異性結(jié)合）

(3)33啟動(dòng)子和終止子

【解析】（1）①過程以RNA為模板，合成DNA,故為反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄），需要逆轉(zhuǎn)錄

酶（反轉(zhuǎn)錄酶）催化和（4種游離的）脫氧核甘酸（dNTP）為原料。

（2）PCR技術(shù)是在高溫條件下解旋，又依據(jù)體內(nèi)雙鏈DNA復(fù)制原理，故需要的DNA聚

合酶要耐高溫。從cDNA分子中可以專一性擴(kuò)增出S蛋白基因片段，是因?yàn)榭梢愿鶕?jù)目

的基因（S蛋白基因）的一段已知序列設(shè)計(jì)引物（引物能與S蛋白基因特異性結(jié)合）。

（3）單獨(dú)的HindlH酶切得到3種DNA片段，總和為2000bp,所以有2個(gè)酶切位點(diǎn)，每

種DNA片段有1個(gè)，Hindlll和BamHI共同酶切，在HindHI酶切基礎(chǔ)上，得到了3種

片段，根據(jù)片段長度可推算出原200bp保留，原400中點(diǎn)處有一個(gè)有BamHI的酶切位

點(diǎn)，切出2個(gè)200bp的DNA片段，原1400內(nèi)部有2個(gè)酶切位點(diǎn)，切出2個(gè)420bp的DNA

片段，1個(gè)560bp的DNA片段，故BamHI的醐切位點(diǎn)有3個(gè)，限制酶HindlH和BamHI

共同酶切一共得到3個(gè)200bp的DNA片段。要讓基因表達(dá)，必須使它位于啟動(dòng)子和終止

子之間。

故答案為：

（D反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶）（4種游離的）脫氧

核昔酸（dNTP）

（2）耐高溫（耐熱）能引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設(shè)計(jì)

合成（或引物能與S蛋白基因特異性結(jié)合）

（3）33啟動(dòng)子和終止子

1、分析題圖，圖甲中①是逆轉(zhuǎn)錄過程，②是經(jīng)過復(fù)制形成雙鏈cDNA,③是獲取S蛋白

基因的過程，圖乙是用限制酶切割后形成的電泳圖。

2、PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離

脫氧核甘酸為原料,合成子鏈,在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，

即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA

的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3'端延伸DNA鏈。

3、PCR反應(yīng)過程：變性一復(fù)性一延伸。

本題主要考查基因工程和PCR技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記PCR技術(shù)的原理及流程：

識(shí)記基因工程的操作步驟，能根據(jù)電泳圖分析出酶切位點(diǎn)，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)正確答題。

第6頁，共22頁

5.如圖1表示利用基因工程制各抗體的基本途徑，據(jù)圖回答下列問題是:

分離②

免疫后的小鼠F胞①TmRNATcDNA,重組噬菌體一大腸桿菌-抗體

噬菌體

圖1

（1）圖1中的細(xì)胞①是______細(xì)胞，過程②是_____過程。

（2）抗體基因可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得。首先從基因組數(shù)據(jù)庫中查詢需合成的

抗體基因mRNA的核昔酸序列，以便根據(jù)這一序列設(shè)計(jì)合成,并以圖1中的

一為模板直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若圖2為第一輪循環(huán)產(chǎn)生的產(chǎn)物，請(qǐng)繪出以a鏈

和b鏈為模板經(jīng)PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物.（要求：在產(chǎn)物中標(biāo)出a、b鏈和引物的

種類）

mmjmz

^l?A

引

【nuWiiuiiliniiinfHirnT

圖2

（3）圖中將目的基因?qū)氪竽c桿菌的過程中，（填“要”或“不需要”）

利用Ca處理大腸桿菌制備感受態(tài)細(xì)胞，原因______。

（4）為檢測(cè)目的基因在大腸桿菌中是否翻譯，可從大腸桿菌中提取,進(jìn)行

雜交實(shí)驗(yàn)

【答案】（1）漿逆轉(zhuǎn)錄

（2）引

min

引物A

物cDNA

引物B

bHiiinuiHHiiinnHiuiiiilllUHIIIII

引物A

（3）不需要噬菌體可以侵染大腸桿菌，將重組DNA分子注入大腸桿菌

（4）抗體抗原-抗體

【解析】圖示分析：①是漿細(xì)胞，②是逆轉(zhuǎn)錄.

（1）抗體是由漿細(xì)胞分泌的，利用基因工程制備抗體，首先要從已經(jīng)免疫的小鼠體內(nèi)

分離出漿細(xì)胞，然后提取出合成抗體的mRNA模版鏈，通過逆轉(zhuǎn)錄獲得DNA,故圖中①

是漿細(xì)胞，過程②是逆轉(zhuǎn)錄過程。

(2)從基因組數(shù)據(jù)庫中查詢抗體基因mRNA的核昔酸序列，以便根據(jù)這一序列通過逆

轉(zhuǎn)錄合成引物，用于PCR擴(kuò)增。圖為第1輪循環(huán)產(chǎn)生的產(chǎn)物，DNA復(fù)制是半保留復(fù)制，

故以a鏈和b鏈為模板經(jīng)PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物如圖(要注意引物A、B的位置)：

min

引物A

引物B

引物A

(3)將重組DNA分子注入大腸桿菌時(shí)，由于噬菌體是專門侵染大腸桿菌的病毒，故不

需要利用Ca處理大腸桿菌制備感受態(tài)細(xì)胞。

(4)檢測(cè)目的基因在大腸桿菌中是否翻譯成功，可從大腸桿菌中提取抗體，進(jìn)行抗原-

抗體雜交實(shí)驗(yàn)。

6.科學(xué)家通過基因工程，將蘇云金芽泡桿菌的Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入到普通棉株細(xì)胞內(nèi)，

并成功實(shí)現(xiàn)了表達(dá)，從而培育出了能抗棉鈴蟲的棉花植株一抗蟲棉。其過程大致如

圖所示：

BT毒蛋

Ti質(zhì)粒

-目的基因插

入了染色體

DNA中

(1)從蘇云金芽抱桿菌中獲取Bt毒蛋白基因，需要用到的工具是______,可采

用技術(shù)對(duì)Bt毒蛋白基因進(jìn)行大量擴(kuò)增。

(2)基因表達(dá)載體的組成有Bt毒蛋白基因、啟動(dòng)子、終止子以及等，啟

動(dòng)子是識(shí)別和結(jié)合的部位。

(3)用Ti質(zhì)粒作為載體，是因?yàn)門i質(zhì)粒上有,它能將Bt毒蛋白基因整

合到棉花細(xì)胞的上。

第8頁，共22頁

(4)將Bt毒蛋白基因?qū)朊藁?xì)胞內(nèi)采用的方法是。將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)

入農(nóng)桿菌，首先必須用處理農(nóng)桿菌。

(5)檢測(cè)Bt毒蛋白基因在抗蟲棉中是否成功表達(dá)，在分子水平上的檢測(cè)方法是

—;要確定抗蟲棉是否具有抗蟲特性，還需要進(jìn)行水平的鑒定。

【答案】(1)限制酶PCR

(2)標(biāo)記基因RNA聚合酶

(3)T-DNA染色體DNA

(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法Ca2"

(5)抗原-抗體雜交個(gè)體生物學(xué)

【解析】分析圖解可知，圖中將蘇云金芽抱桿菌的Bt毒蛋白基因和Ti質(zhì)粒進(jìn)行重組，

利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞；在利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)成完整植株。

(1)獲取Bt毒蛋白基因，需要用到限制酶，可采用PCR技術(shù)對(duì)Bt毒蛋白基因進(jìn)行大

量擴(kuò)增。

(2)一個(gè)基因表達(dá)載體的組成必須有啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因；啟動(dòng)子

是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。

(3)Ti質(zhì)粒上有T-DNA,可用Ti質(zhì)粒作為載體，它能將Bt毒蛋白基因整合到棉花細(xì)

胞的染色體上。

(4)將Bt毒蛋白基因?qū)朊藁?xì)胞內(nèi)常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿

菌，首先必須用處理農(nóng)桿菌，使農(nóng)桿菌處于感受態(tài)。

(5)檢測(cè)Bt毒蛋白基因在抗蟲棉中是否成功表達(dá)，在分子水平上的檢測(cè)方法是抗原-

抗體雜交；要確定抗蟲棉是否具有抗蟲特性，還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。

7.圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列，圖2

表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有,他0I、BamHI,MboI>5i?aI4種限

制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CICGG、GIGATCC、IGATC、

CCCIGGGo請(qǐng)回答下列問題：

目的基因D

,----n----入-------------\

1111111Hr**i?i'i；i111r*i111111r*i111111111

GGATCCCfpGGGCCCGGGGGATCC

CCTAGGGfetcCCGGGCCCCCTAGG

11111r11L」?扁mL..I111111L」1111iIIII

1534bp7募p658bp

圖1

(1)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為。

(2)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛?/p>

d。從隱性純合子分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶S"al完全切割，產(chǎn)

物中共有______種不同DNA片段。為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，需要通過技術(shù)

擴(kuò)增目的基因，以獲得目的基因的大量拷貝，該技術(shù)原理為?

圖2

(3)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒,

那么應(yīng)選用的限制酶是o在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿

菌，一般需要用添加的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，想進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受

體細(xì)胞，還需要接種到含的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

(4)假設(shè)用BamH\切割DNA獲取目的基因，用加。I切割質(zhì)粒，然后形成重組質(zhì)

粒，若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，能否再次用Bamll

I(填：可以、不可以、不一定)，原因是：。

【答案】(1)537bp、790bp、661bp

(2)2PCRDNA雙鏈復(fù)制

(3)Bamlll抗生素B抗生素A

(4)不一定因?yàn)槟康幕蚝涂股谺抗性基因拼接處不一定出現(xiàn)GGATCC

第10頁，共22頁

【解析】分析圖1：圖1基因片段中含有2個(gè)限制酶Sma\(識(shí)別序列CCCIGGG)的切

割位點(diǎn)，因此用SmaI切割可得到三種長度的DNA片段。

分析圖2：圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列，其中有MspI、BamHI、MboI3

種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，分別為CICGG、G\GATCC>\GATC.CCC

\GGG。

(1)加al的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)是CCCIGGG,可知其切割產(chǎn)生的末端是平末端，產(chǎn)

物長度是534+3=537bp、796-3-3=790bp>658+3=661bp。

(2)基因D會(huì)被防aI切割形成三個(gè)片段(長度分別為537bp、790bp、661bp)；若圖

1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，則基因D就突變?yōu)榛騞,且基因d只有

一個(gè)SmaI的酶切位點(diǎn)，因而基因d會(huì)被SmaI切割形成兩個(gè)片段(長度分別為1327bp、

661bp)?為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，可以通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因，以獲得目的基

因的大量拷貝，該技術(shù)模擬了體內(nèi)DNA復(fù)制的過程，原理為DNA雙鏈復(fù)制。

(3)由圖可知，目的基因1)兩側(cè)都是限制前BamH\的識(shí)別序列，因此應(yīng)選用限制酶BamH

I切割圖1中含有目的基因D的外源DNA分子和圖2中的質(zhì)粒。用BamH\切割質(zhì)粒后

會(huì)破壞抗生素A抗性基因，但不會(huì)破壞抗生素B抗性基因，因此一般需要用添加抗生素

B的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；若想進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞，還需要接種到含抗生

素A的培養(yǎng)基中培養(yǎng)篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。

(4)假設(shè)用BamH\切割DNA獲取目的基因，用MboI切割質(zhì)粒，然后形成重組質(zhì)粒，

若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來，再次用BamH\不一定能將

其切割，因?yàn)槟康幕蚝涂股谺抗性基因的粘性末端隨意連接，拼接處不一定出現(xiàn)

GGATCCo

8.中科院動(dòng)物研究所利用CRISPR/Cas9技術(shù)，向豬的基因組內(nèi)插入一個(gè)解耦聯(lián)蛋白基

因(UCP1)經(jīng)過基因改造的豬瘦肉率高、脂肪少、抗寒能力強(qiáng)。如圖是基因改造過

程中涉及的相關(guān)限制酶及酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題:

BamWI

EcoRIuCP1EcoRI

抗生素、

抗性基因夕卜源DNA

質(zhì)粒

反oRl

SmaIBamHISHUIIHiml^

(1)圖中的抗生素抗性基因的作用是作為基因，以便于篩選。為了獲取

重組質(zhì)粒，除了使用限制酶外，還需使用酶。

(2)重組質(zhì)粒上應(yīng)有識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)解耦聯(lián)蛋白基因(UCP1))

轉(zhuǎn)錄，該部位稱為。

(3)在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，為避免出現(xiàn)質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，常用

兩種限制酶同時(shí)切割質(zhì)粒和UCP1基因。

(4)獲得目的基因后，常采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在此過程中，由于DNA聚

合酶不能從頭開始合成DNA單鏈，只能從端延伸DNA單鏈，因此需要加入

引物。

(5)科研人員通過法，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入豬的受精卵中?？赏ㄟ^.

技術(shù)，來檢測(cè)UCP1基因是否已導(dǎo)入到豬受精卵細(xì)胞。

【答案】(1)標(biāo)記DNA連接

(2)RNA聚合酶啟動(dòng)子

(3)Bamlll和HindIII

(4)3'顯微注射DNA分子雜交

【解析】(1)抗生素抗性基因常作為基因工程的標(biāo)記基因，目的是便于篩選。獲取重

組質(zhì)粒時(shí)，除了使用限制酶外，還需使用DNA連接酶。

(2)驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程的是啟動(dòng)子，其是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。

(3)在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，不能用限制酶Sami進(jìn)行切割，否則會(huì)破壞標(biāo)記基

因和目的基因；為避免出現(xiàn)質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，常用BamHI和HindlH兩種限制

酶同時(shí)切割質(zhì)粒和UCP1基因，同時(shí)還能防止目的基因與質(zhì)粒反向連接。

(4)獲得目的基因后，常采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在此過程中，由于DNA聚合酶

不能從頭開始合成DNA單鏈，只能從3'端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。

(5)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受

體細(xì)胞可采用DNA分子雜交技術(shù)。

分析題圖：質(zhì)粒中含有限制酶BamHI、HindllLEcoRKSamI的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)；

含有目的基因的外源DNA分子含有限制酶BamHI、HindlH、EcoRI,SamI的識(shí)別序列

及切割位點(diǎn)。

本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理及操作

步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題。

一、填空題(本大題共3小題，共3.0分)

(一)(1)下表關(guān)于基因工程中的操作工具，對(duì)應(yīng)合理的組合是

第12頁，共22頁

分子手術(shù)刀分子縫合針分子運(yùn)輸車

A限制性內(nèi)切醐DNA連接酶某些病毒

BDNA連接酶限制性內(nèi)切酶受體細(xì)胞

C限制性內(nèi)切酶DNA連接酶受體細(xì)胞

DDNA連接酶限制性內(nèi)切酶質(zhì)粒

(3)下列不屬于基因工程方法生產(chǎn)的藥品是

A.青霉素B.白細(xì)胞介素一2C.干擾素D.乙肝疫苗

(4)基因工程操作中，人們常選用帶有一個(gè)抗菌素抗性基因的細(xì)菌質(zhì)粒，該基因的主

要作用是

A.便于與外源目的基因拼接

B.有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行初步檢測(cè)

C.提高質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞的成功率

D.增強(qiáng)受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性

(5)蛋白質(zhì)工程能制造符合人類生產(chǎn)、生活需求的非天然的蛋白質(zhì)，為實(shí)現(xiàn)這一目的，

蛋白質(zhì)工程需要直接改造或創(chuàng)造出

A.新的氨基酸B.新的基因C.新的肽

鏈D.新的蛋白質(zhì)

(6)在離體的植物器官、組織和細(xì)胞脫分化形成愈傷組織的過程中，下列哪一項(xiàng)操作

要求不是必須的

A.無菌操作B.給予適宜光照C.添加營養(yǎng)物

質(zhì)D.添加植物激素

(7)下列為有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，其中錯(cuò)誤的是

A.用于培養(yǎng)細(xì)胞的大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織

B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞

C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)都只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)衰老死亡

D.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液

(8)利用胚胎工程擴(kuò)繁優(yōu)良品種家畜時(shí)，對(duì)供體母畜實(shí)施超數(shù)排卵處理，所用的激素

是

A.孕激素B.促性腺

激素釋放激素

C.促性腺激素D.性激素

(9)科學(xué)家正嘗試?yán)酶杉?xì)胞治療一些頑疾，用骨髓移植法有效治療白血病便是成功

的例證。下列說法中不正確的是

A.利用干細(xì)胞治療是因?yàn)楦杉?xì)胞具有再生各種組織細(xì)胞的潛能

B.紅骨髓內(nèi)含有造血干細(xì)胞，可以在患者體內(nèi)分化形成正常的血細(xì)胞

C.異體骨髓移植成功后，康復(fù)者的血型有可能發(fā)生改變

D.用骨髓移植法治療白血病的優(yōu)點(diǎn)之一是不發(fā)生排斥反應(yīng)

(10)我國西北土地沙化和鹽漬化非常嚴(yán)重，主要人為原因是超載放牧導(dǎo)致草地退化。

從生態(tài)工程的原理角度分析，這違背了

A.系統(tǒng)整體性原理B.整體性原理

C.物種多樣性原理D.協(xié)調(diào)與平衡原理

(二)狂犬病病毒的核酸是RNA,G蛋白和N蛋白是狂犬病病毒的主要抗原，它們刺激人

體后可誘導(dǎo)人體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)，下圖表示用生物工程制備抗狂犬病病

毒單克隆抗體的過程。請(qǐng)回答下列問題。

(1)制備該單克隆抗體的技術(shù)屬于生物技術(shù)的__________工程。圖中應(yīng)向小鼠體內(nèi)注

入后，才能獲得所需的細(xì)胞1。

(2)細(xì)胞1與細(xì)胞2混合后，采用滅活病毒可誘導(dǎo)形成多種融合的細(xì)胞3,若僅考慮

兩兩融合的情況，其中細(xì)胞才是人們希望獲得的。經(jīng)多輪篩選

最終獲得的細(xì)胞，其突出特點(diǎn)是既能,又可分泌特異性強(qiáng)的單克隆

抗體。

(3)單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈”，可明顯減少用藥量，原因是

【答案】

(-)

(1)A(2)D(3)A(4)B(5)B(6)B(7)C(8)C(9)D(10)D

第14頁，共22頁

(-)

(D細(xì)胞；(滅活的)狂犬病病毒(或G蛋白抗原、或N蛋白抗原)

(2)細(xì)胞1和細(xì)胞2融合(或雜交瘤細(xì)胞)；無限增殖

(3)單克隆抗體能夠與癌細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物集中在癌細(xì)胞周圍，實(shí)現(xiàn)高效用藥。

【解析】

(-)

(1)

【分析】

本題意在考查對(duì)基因工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)知

識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

基因工程中的操作工具有：分子手術(shù)刀即限制性內(nèi)切酶、分子縫合針即DNA連接酶、分

子運(yùn)輸車即質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒等，故A正確。

故選A。

(2)

【分析】

本題意在考查對(duì)基因工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)知

識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

基因工程操作的順序?yàn)椋禾崛∧康幕蛞荒康幕蚺c運(yùn)載體的結(jié)合一將目的基因?qū)胧?/p>

體細(xì)胞一目的基因的檢測(cè)和表達(dá)，綜上，ABC錯(cuò)誤，D正確。

故選Do

(3)

【分析】

本題意在考查對(duì)基因工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)知

識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

青霉素是利用人工誘變的高產(chǎn)青霉素菌株通過發(fā)酵工程生產(chǎn)的，不是基因工程菌生產(chǎn)的,

綜上，A符合題意，BCD不符合題意。

故選Ao

(4)

【分析】

本題意在考查對(duì)基因工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)知

識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

基因工程操作中，常選用帶有一個(gè)抗菌素抗性基因的細(xì)菌質(zhì)粒，該基因的主要作用是：

有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行初步檢測(cè)，與受體的篩選，綜上，ACD錯(cuò)誤，B正確。

故選B。

(5)

【分析】

本題意在考查對(duì)蛋白質(zhì)工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)

知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

蛋白質(zhì)工程需要直接改造或創(chuàng)造出：新的基因，綜上，ACD錯(cuò)誤，B正確。

故選Bo

(6)

【分析】

本題意在考查對(duì)植物細(xì)胞工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基

礎(chǔ)知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

在離體的植物器官、組織和細(xì)胞脫分化形成愈傷組織的過程中，需要無菌操作、添加一

定的營養(yǎng)物質(zhì)、添加植物激素，不必須的是：給予適宜光照，綜上，ACD不符合題意，

B符合題意。

故選B。

(7)

【分析】

本題意在考查對(duì)動(dòng)物細(xì)胞工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基

礎(chǔ)知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

A.用于培養(yǎng)細(xì)胞的大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織，A正確；

B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞，B正確：

C.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)都傳50代左右，所培養(yǎng)的大部分細(xì)胞就會(huì)衰老死亡，還有少部分發(fā)生

遺傳物質(zhì)改變可無限傳代，C錯(cuò)誤；

第16頁，共22頁

D.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液進(jìn)行傳代培養(yǎng)，D正

確。

故選C。

(8)

【分析】

本題意在考查對(duì)胚胎工程等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)知

識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

對(duì)供體母畜實(shí)施超數(shù)排卵處理，所用的激素是：促性腺激素，綜上，ABD錯(cuò)誤，C正確。

故選Co

(9)

【分析】

本題意在考查對(duì)干細(xì)胞治療等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和理解基礎(chǔ)

知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

A.利用干細(xì)胞治療是因?yàn)楦杉?xì)胞具有再生各種組織細(xì)胞的潛能，A正確；

B.紅骨髓內(nèi)含有造血干細(xì)胞，可以在患者體內(nèi)分化形成正常的血細(xì)胞，B正確；

C.異體骨髓移植成功后，康復(fù)者的血型有可能發(fā)生改變，C正確；

D.用骨髓移植法治療白血病還需考慮發(fā)生排斥反應(yīng)的問題，D錯(cuò)誤。

故選Do

(10)

【分析】

本題意在考查對(duì)生態(tài)工程的基本原理等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能力，及熟記和

理解基礎(chǔ)知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

人為原因是超載放牧超出草原的環(huán)境容納量，導(dǎo)致草地退化。從生態(tài)工程的原理角度分

析，這違背了協(xié)調(diào)與平衡原理，綜上，ABC錯(cuò)誤，D正確。

故選D,,

(-)

【分析】

本題意在考查對(duì)動(dòng)物細(xì)胞工程、單克隆抗體的制備等所學(xué)知識(shí)的識(shí)記能力和綜合應(yīng)用能

力，及熟記和理解基礎(chǔ)知識(shí)是解答此題的關(guān)鍵。

【解答】

（1）制備該單克隆抗體的技術(shù)屬于生物技術(shù)的細(xì)胞工程。圖中應(yīng)向小鼠體內(nèi)注入（滅

活的）狂犬病病毒（或G蛋白抗原、或N蛋白抗原）后，才能獲得所需的細(xì)胞1。

（2）細(xì)胞1與細(xì)胞2混合后，采用滅活病毒可誘導(dǎo)形成多種融合的細(xì)胞3,若僅考慮

兩兩融合的情況，其中細(xì)胞1和細(xì)胞2融合（或雜交瘤細(xì)胞）細(xì)胞才是人們希望獲得的。

經(jīng)多輪篩選最終獲得的細(xì)胞，其突出特點(diǎn)是既能無限增殖，又可分泌特異性強(qiáng)的單克隆

抗體。

（3）單克隆抗體與抗癌藥物結(jié)合可制成“生物導(dǎo)彈”，可明顯減少用藥量，原因是單

克隆抗體能夠與癌細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物集中在癌細(xì)胞周圍，實(shí)現(xiàn)高效用藥。

故答案為：

（1）細(xì)胞；（滅活的）狂犬病病毒（或G蛋白抗原、或N蛋白抗原）

（2）細(xì)胞1和細(xì)胞2融合（或雜交瘤細(xì)胞）；無限增殖

（3）單克隆抗體能夠與癌細(xì)胞特異性結(jié)合，將藥物集中在癌細(xì)胞周圍，實(shí)現(xiàn)高效用

藥。

（-）【生物一選修1：生物技術(shù)實(shí)踐專題】

為了調(diào)查水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌的分離

等工作。測(cè)定水樣細(xì)菌含量的實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①配制培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白陳、NaCl、X、H20）；

②制作無菌平板；

③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；

④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。

回答下列問題：

（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的碳主要來源于________o若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中

的成分X通常是________,且常采用法滅菌。

（2）該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干

滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是;然

后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培

養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為36、35、34。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為

（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過滅菌,

在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是。

（二）【生物一選修3：現(xiàn)代生物科技專題】

第18頁，共22頁

研究人員利用小鼠的單倍體ES細(xì)胞（只有一個(gè)染色體組），成功培育出轉(zhuǎn)基因小鼠,

其主要技術(shù)流程如圖所示：

注：I、II、III、IV代表四種限制前，箭頭指向的位置為限制酶的切割位置；Ampr是

氨年青霉素抗性基因，Neor是G418抗性基因。

（1）對(duì)目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增需要經(jīng)歷變性、退火、延伸三個(gè)階段，其中延伸階段需

要加熱至70?75℃,在該溫度范圍內(nèi)酶的活性較高。除了該酶外，PCR擴(kuò)增

還需要的條件有模板DNA、和dNTP（N代表A、T、G、C）等。

（2）一定濃度的G418能有效殺死不具有Neor的小鼠細(xì)胞，而氨若青霉素不能有效殺

死小鼠細(xì)胞，據(jù)此推測(cè)，圖中③處的培養(yǎng)液應(yīng)添加（填“氨節(jié)青霉素”或“G418”）。

研究人員選用I和H兩種種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，而未使用HI、IV,原因是

（3）人工處理形成的細(xì)胞乙與類似，應(yīng)用技術(shù)，可以使其發(fā)育成桑根

胚。此時(shí)，胚胎是否已經(jīng)孵化？—（填“是”或“否”）。

【答案】

（一）（1）牛肉膏、蛋白陳；瓊脂；高壓蒸汽滅菌

（2）檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；3.5X107

（3）灼燒；將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落

（二）（1）Taq（或填“熱穩(wěn)定的DNA聚合”、“耐高溫的DNA聚合”）；引物

（2）G418；III、IV切割并插入目的基因，會(huì)破壞標(biāo)記基因Neor

（3）受精卵；早期胚胎培養(yǎng)；否

【解析】

【分析】

(-)本題結(jié)合圖表，考查微生物的培養(yǎng)和分離，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分、種類及

作用；識(shí)記微生物接種方法，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查。

(二)本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠圖示和題干信息確定合適的限制

酶，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題0

【解答】

(-)(1)根據(jù)配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白陳、NaCl、X、H20